孕激素受体膜成分2在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义

李 然，郑 洪，2

(1.遵义医科大学 病理学教研室，贵州 遵义 563099；2.遵义医科大学附属医院 病理科，贵州 遵义 563099)

在我国卵巢癌发病率并不高，但因其死亡率较高，是造成妇科恶性肿瘤死亡最常见的原因，应视为妇科重点防治的恶性肿瘤之一[1-2]。孕激素在卵巢癌的发生和发展中起到极为重要作用，有调查发现，避孕药和妊娠可降低卵巢癌发病率[3]。在体内、外孕激素均能抑制顺铂对卵巢癌细胞的凋亡作用[4],但使孕激素发挥此作用不是由核受体(PGR)介导，而是其他的介质如孕激素膜受体成分(PGRMC)介导[5]。PGRMC为一类小分子蛋白，目前发现有PGRMC1和PGRMC2两种。已有研究证实，PGRMC1在乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌和口腔癌表达[6]。在卵巢癌中，PGRMC1能促进肿瘤的发生与发展。沈建江等[7]的研究发现，Oroxylin A增加了过氧化物酶体增殖物激活受体γ的表达，并改变了卵巢癌细胞中PGRMC2的表达，对卵巢癌的治疗方面起作用。但关于PGRMC2在卵巢癌发生、发展中的作用还鲜有报道，作用机制尚不清楚。因此本文探讨PGRMC2在卵巢浆液性癌中的表达水平和临床病理指标及预后有无关系，为卵巢浆液性癌探寻新的诊断和治疗靶点。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集遵义医科大学附属医院病理科2012至2019年卵巢浆液性癌石蜡标本90例，所有患者术前均未接受化疗。年龄19～84岁，中位年龄53岁，年龄<53岁43例，≥53岁47例；病理分级：根据2014版WHO女性生殖器官肿瘤分类中浆液性肿瘤诊断标准[8]，分为高级别69例(高级别组)，低级别21例(低级别组)；临床分期：按照FIGO分期标准[9],I+II期19例，III+IV期71例；有淋巴结转移75例，无淋巴结转移15例。卵巢浆液性囊腺瘤20例(良性组，年龄28～52岁，中位年龄40岁)，卵巢交界性肿瘤15例(交界性组，年龄32～61岁，中位年龄49岁)，正常输卵管伞端上皮和正常卵巢15例为对照组(年龄26～58岁，中位年龄50岁)。所有组织经过中性福尔马林固定，石蜡包埋。

1.2 试剂 兔抗人PGRMC2一抗购买于Abcam公司；抗体工作浓度1∶250，Envision试剂盒购于福州迈新公司。

1.3 方法及阳性结果的判断 采用Envision法检测各组中PGRMC2蛋白的表达情况，以PBS缓冲液代替一抗作为空白对照，以人的正常肝组织为阳性对照。结果判定标准为：细胞质内被染色为棕黄色为阳性。

1.4 图像分析 每张切片用美国MediaCybemetics公司开发的Image-Pro Plus图像分析软件测量平均光密度值(MOD)，随机选取各组每张切片5个高倍镜视野(×400)，测量每个高倍镜视野阳性反应的平均光密度值，以每例5个高倍视野的平均光密度的平均值作为该例的平均光密度测量值。

1.5 随访 所有病例均采用电话随访方式，随访截止时间为2020年9月16日。在高级别组中，有40例死于随访期限内，截尾数据29例(均存活)，随访率为100%(69/69)；在低级别组中，有2例死于随访期限内，截尾数据19例(其中1例失访，其余均存活)，随访率为95.2%(20/21)。

1.6 统计学分析 通过SPSS17.0软件，χ2检验分析所有计数资料，t检验分析计量资料，Kaplan-Meier法进行单因素生存分析。结果为P<0.05时，表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PGRMC2在各组中的阳性表达率 阳性定位主要在肿瘤细胞胞质呈现棕黄色颗粒状染色(见图1)。PGRMC2在各组中的阳性表达率分别为对照组13.3%(2/15)、良性组25.0%(5/20)、交界性组60.0%(6/15)、低级别组76.2%(16/21)、高级别组82.6%(57/69)。高级别组分别与对照组、良性组、交界性组比较，低级别组分别与对照组、良性组、交界性组比较，交界性组与对照组、良性组比较，差异均存在统计学意义(P<0.05)；高级别组与低级别组比较，对照组与良性组比较，均不存在统计学意义(P>0.05，见表1)。

A:PGRMC2在对照组中的输卵管上皮呈阳性表达(IHC,×200)；B:PGRMC2在良性组中的表面上皮呈阳性表达(IHC,×200)；C:PGRMC2在交界性组中的表面上皮呈阳性表达(IHC,×200)；D:PGRMC2在低级别组中的肿瘤细胞胞质中阳性表达(IHC,×200)；E:PGRMC2在高级别组中的肿瘤细胞胞质中阳性表达(IHC,×200)。图1 PGRMC2在各组中的阳性表达情况

2.2 PGRMC2在各组中的阳性表达量 对照组15例，MOD(0.005±0.003)；良性组20例，MOD(0.066±0.020)；交界性组15例，MOD(0.084±0.026)；低级别组21例，MOD(0.124±0.018)；高级别组69例，MOD(0.152±0.028)。高级别组分别与对照组、良性组、交界性组比较，低级别组分别与对照组、良性组、交界性组比较，交界性组与对照组比较，良性组与对照组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；高级别组与低级别组比较，交界性组与良性组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)(见表2、图2)。

表2 各组中PGRMC2的平均关密度值(MOD)

A、B：PGRMC2表达强度测量结果。图2 PGRMC2表达强度

2.3 PGRMC2的表达与临床病理指标的关系 PGRMC2蛋白的表达水平在临床III+IV期组明显高于临床I+II期组，差异有统计学(P<0.05)，PGRMC2蛋白的表达水平在有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组，差异有统计学(P<0.05)。PGRMC2蛋白的表达水平与年龄、病理分级无关，差异没有统计学(P>0.05，见表3)。

表3 PGRMC2在卵巢浆液性癌中的表达与患者临床病理指标的关系

2.4 PGRMC2的表达与预后的关系 在高级别组中，患者总生存时间范围是1～80.4个月，平均25.29±20.11个月。患者的3年生存率为42.9%(18/42)，5年生存率为28.5%(6/21)(见表4)，其中临床分期I+II期12例，III+IV期57例；有淋巴结转移59例，无淋巴结转移10例(见表5)。在低级别组中，患者总生存时间范围是49～79.6个月，平均42.27±21.37个月。患者的3年生存率为91.6%(11/12)，5年生存率为71.4%(5/7)(见表4)，其中临床分期I+II期7例，III+IV期14例；有淋巴结转移16例，无淋巴结转移5例(见表5)。应用Kaplan-Meier 法分析得出：在高级别组中，PGRMC2蛋白阳性表达的总生存时间比PGRMC2蛋白阴性表达的总生存时间短(P<0.05)；在低级别组中，PGRMC2蛋白阳性表达与总生存时间没有统计学意义(P>0.05，见图3A、B)。

表4 高级别组与低级别组患者的3年及5年生存率

表5 PGRMC2的表达与预后的关系

高级别组中，临床分期I+II期、III+IV期且PGRMC2蛋白阳性表达的总生存时间均比I+II期、III+IV期且PGRMC2蛋白阴性表达的总生存时间短(P<0.05，见图3C、D)。有无淋巴结转移且PGRMC2蛋白阳性表达的总生存时间均比有无淋巴结转移且PGRMC2蛋白阴性表达的总生存时间短(P<0.05，见图3E、F)。低级别组中，临床分期I+II期、III+IV期、有无淋巴结转移且PGRMC2蛋白阳性表达与总生存时间没有统计学意义(P>0.05，见图3G～J)。

A:高级别组中PGRMC2的生存分析函数(P<0.05)；B:低级别组中PGRMC2的生存分析函数(P>0.05)；C:高级别组PGRMC2在I+II期中生存分析函数(P<0.05)；D:高级别组PGRMC2在III+IV期中生存分析函数(P<0.05)；E:高级别组PGRMC2在有淋巴结转移中生存分析函数(P<0.05)；F:高级别组PGRMC2在无淋巴结转移中生存分析函数(P<0.05)；G:低级别组PGRMC2在I+II期中生存分析函数(P>0.05)；H:低级别组PGRMC2在III+IV期中生存分析函数(P>0.05)；I:低级别组PGRMC2在有淋巴结转移中生存分析函数(P>0.05)；J:低级别组PGRMC2在无淋巴结转移中生存分析函数(P>0.05)。图3 各级别组PGRMC2在不同临床分期及无淋巴结转移中的生存分析函数

3 讨论

PGRMC2是近年来新发现的一种小分子蛋白，在多种细胞和组织中表达，如新生大鼠的正常卵巢、卵巢癌细胞中、正常肝组织以及肝癌细胞中[10-12]。在正常卵巢组织中PGRMC2能调节卵泡的发育和成熟[13]。在卵巢癌细胞中，PGRMC2和PGRMC1都能与细胞色素P450(CYP)结合，在肿瘤的进展中起重要作用，揭示了PGRMC2的作用与PGRMC1相似[14]。在卵巢癌中PGRMC1能促进卵巢癌细胞增殖[15]。Albrecht等[12]研究还表明PGRMC2与PGRMC1的作用有差别之处，降低PGRMC2水平导致较高的迁移率。在一项子宫颈腺癌转移的淋巴结中研究发现大量PGRMC2丢失，提示PGRMC2可能在子宫颈腺癌转移中起抑制因子的作用[16]。有研究推测PGRMC2对卵巢癌迁移的影响可能是通过激活或抑制特定的CYP来介导的。因此两者具有相似的功能，但在某些功能上，两者又有差异，尤其是在肿瘤转移方面的差异。

本研究结果显示，在高级别组和低级别组当中，PGRMC2的阳性表达率分别为82.6%、76.2%，阳性强度分别为0.152、0.124，与其他3组比较显著增高，并且差异有显著性，但在高级别组与低级别组之间无明显差异，这表明PGRMC2在卵巢浆液性癌和卵巢良性肿瘤中表达是不一样的，卵巢浆液性癌中表达高，而卵巢良性肿瘤中表达低。可以推测PGRMC2可促进卵巢癌的发生、发展，同时PGRMC2可能有助于辅助卵巢浆液性癌的诊断及鉴别诊断。

同时，我们在对PGRMC2蛋白与卵巢浆液性癌的临床病理特征比较时发现，患者临床分期越晚、淋巴结转移病例数越多，PGRMC2表达率越高。提示PGRMC2不仅与卵巢浆液性癌的进展密不可分，而且还与有无淋巴结转移密切相关。在一项乳腺癌的研究中，II期乳腺癌PGRMC2的mRNA转录水平明显低于III期乳腺癌[17]。因此，PGRMC2的表达程度与病期进展相一致。而在转移方面，最近在体外研究发现，HO-8910细胞PGRMC2蛋白表达明显高于SKOV3细胞，在孕激素相同浓度及时间作用下，SKOV3细胞转移能力较HO-8910细胞强，认为PGRMC2的高表达可能抑制卵巢癌细胞的迁移，可能是通过调节Wnt通路引起相关蛋白的改变从而影响卵巢癌细胞的转移[18]。本研究与上述研究结果存在差异，可能因为体外与体内环境以及检测手段不一样等客观因素造成的，同时PGRMC2对卵巢癌细胞的迁移影响可能是多条通路共同作用的结果，而且本研究中PGRMC2的功能可能受到某些因素抑制。总的来说PGRMC2影响卵巢癌细胞迁移的机制尚未完全清晰，有待进一步深入研究。

此外本研究显示，在高级别组中PGRMC2蛋白为阴性的患者总生存时间要长于PGRMC2蛋白为阳性的患者，但低级别组中PGRMC2与患者的总生存时间没有关系。同时有研究表明，PGRMC2的表达不仅与食管基底样鳞癌的增殖与进展有关，而且其高表达还与食管基底样鳞癌的预后相关[19]。因此，我们推测在卵巢高级别浆液性癌中，PGRMC2还可作为预后不良的指标之一。

综上所述，本研究表明PGRMC2可作为卵巢浆液性癌诊断、鉴别诊断以及判断临床分期及预后的潜在靶标，具有一定的临床指导意义与价值。