结直肠癌中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表达水平及临床意义

邓江，黎相照

1.深圳市龙岗区第二人民医院病理科，广东 深圳 518112；2.南方医科大学南方医院病理科，广东 广州 510515

结直肠癌为消化系统的常见恶性肿瘤[1]，近年来结直肠癌的发病呈年轻化趋势，且发病率不断增加，严重危及患者生命与健康。最新研究报道，早期结直肠癌的生存率显著高于晚期患者[2]。因此早发现、早治疗对结直肠癌患者预后有非常重要的影响。热休克因子1 (heat shock factor 1，HSF1)是机体重要的转录因子，可调节肿瘤间质细胞生成，参与恶性肿瘤发生[3]。临床研究已证实HSF1在多种肿瘤中呈高表达，是评价肿瘤发展和恶化的重要指标[4]。氨基末端激酶(amino terminal kinase，c-Jun)属原癌基因，其可参与细胞增殖及分化，从而参与肿瘤的发生及发展。二氢嘧啶脱氢酶(dihydropyrimidine dehydrogenase，DPD)为嘧啶分解代谢酶，其在结直肠癌的中表达能够影响化疗效果[5]。本研究主要探讨结直肠癌中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表达水平及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集南方医科大学南方医院2018 年1 月至2019 年12 月 收治的114 例结直肠癌患者的临床资料。纳入标准[6]：经病理检查确诊为结直肠癌；手术前未经放化疗等治疗；病例资料完整。排除标准：其他恶性肿瘤病史者；肝肾功能严重不全者；卡氏评分低于70分，预计生存时间＜3个月者；严重恶液质者；结直肠癌复发者。114例结直肠癌患者中男性77 例，女性37 例；年龄38～71 岁，平均(55.71±4.43)岁；肿瘤部位：直肠54例，左半结肠33例，右半结肠27例；肿瘤大小：瘤体直径＜5 cm 45例，≥5 cm 69例；肿瘤区域淋巴结远处转移(TNM)：Ⅰ+Ⅱ期56 例，Ⅲ+Ⅳ期58 例；分化程度：低分化41 例，中、高分化73 例；淋巴结转移：阴性56 例，阳性58 例。均进行为期1 年的随访，记录期间死亡例数。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂 鼠抗人HSF1 单克隆抗体，批号：20170512，厂家：亚诺法生技股份有限公司；鼠抗人c-jun 单克隆抗体，批号：20170903，厂家：京中杉生物技术有限公司；鼠抗人p-c-jun 单克隆抗体，批号：20170718，厂家：京中杉生物技术有限公司；鼠抗人DPD 单克隆抗体，批号：20171006，厂家：广州万孚生物技术股份有限公；通用免疫组织化学SP 试剂盒，批号：20170419，厂家：北京中世普为生物科技有限公司；DAB 免疫组织化学显色试剂盒，批号：20171105，厂家：北京酷来搏科技有限公司。

1.2.2 检测方法 收集结直肠癌患者癌组织(肿瘤组织均取自无坏死区域、肿瘤生长良好区域)和癌旁组织(采集距离肿瘤≥5 cm 区域)，选用免疫组化染色依据SP 试剂盒，采用免疫组织化学-链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结染色法，检测HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 表达情况。标本经10%中性福尔马林液固定，常规自动病理组织脱水机脱水透明浸蜡。组织经石蜡包埋后，按3 μm 层厚连续切片，取硅化玻片捞片并70℃高温烤片，常规脱蜡水洗，用高压锅高压修复抗原，免疫组化染色依据SP 试剂盒说明书进行。

1.3 结果判读 HSF1、c-Jun、p-c-Jun阳性判定于细胞核内出现棕褐色或者棕黄色颗粒，DPD阳性判定于细胞质内棕褐色或者棕黄色颗粒。染色强度评分：棕褐色、棕黄色、浅黄色、无色分别统计为3、2、1、0分。随机抽取每张切片组织的5个高倍镜视野(×400)，各计数500个细胞，阳性细胞百分比为其平均值，＞76%、51%～75%、26%～50%、6%～25%、＜5%分别统计为4、3、2、1、0分。最后评分取染色强度评分与阳性细胞百分比乘积，≥4分表示阳性，0分表示阴性[7]。

1.4 统计学方法 应用SPSS20.0 统计软件进行数据分析，计量资料符合正态分布，以均数±标准差()表示，计数资料比较采用χ2检验，采用Log-rank 检验分析并比较生存情况，采用Kaplan-Meier 法绘制生存曲线图，相关性分析采用Spearman 分析，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 结直肠癌组织与癌旁组织中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表达水平比较 HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD 在结直肠癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 结直肠癌组织与癌旁组织中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表达水平比较[例(%)]

2.2 不同临床病理特征结直肠癌患者的HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 表达水平比较 HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD阳性表达率与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小无明显相关(P＞0.05)；Ⅲ+Ⅳ期、低分化、淋巴结转移阳性者HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 阳性表达率明显高于Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、淋巴结转移阴性者，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2、表3。

表2 不同临床病理特征结直肠癌患者的HSF1、c-Jun表达水平比较[例(%)]

表3 不同临床病理特征结直肠癌患者的p-c-Jun及DPD表达水平比较[例(%)]

2.3 不同预后结直肠癌患者的HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 表达水平比较 HSF1 阳性者1 年生存率低于HSF1 阴性者，c-Jun 阳性者1 年生存率低于c-Jun 阴性者，p-c-Jun 阳性者1 年生存率低于p-c-Jun 阴性者，DPD 阳性者1 年生存率低于DPD 阴性者，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表4，生存曲线见图1。

表4 不同预后结直肠癌患者的HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 表达水平比较(%)

图1 结直肠癌患者的生存曲线分析

2.4 结直肠癌患者HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD表达的相关性 结直肠癌患者HSF1 与c-Jun、p-c-Jun及DPD 均呈正相关(r=0.391、0.415、0.376，P＜0.05)；c-Jun 与p-c-Jun 及DPD 呈正相关(r=0.427、0.402，P＜0.05)；p-c-Jun与DPD呈正相关(r=0.428，P＜0.05)。

3 讨论

结直肠癌为危害人类生命安全的主要恶性肿瘤之一，尽管目前结直肠癌的治疗方式不断改善，但患者5年生存率仍较低。目前有关结直肠癌的预后评价缺乏灵敏指标，主要从病理组织类型、肿瘤临床分期等方面进行判定，有一定局限性[8]。

肿瘤的发生发展为多因素的复杂过程。近年来研究报道，HSF 能够参与及稳定肿瘤的异常增殖反应，在肿瘤发生发展中有重要作用[9]。胡娟等[10]研究发现，HSF 一方面可诱导抑癌基因及癌基因产物的表达，另一方面HSF的高表达能够提高肿瘤细胞抵抗凋亡的作用，促进其无限增殖。临床研究报道，HSF1在多种肿瘤疾病中呈阳性表达，且和肿瘤预后及分期有一定关系[11]。另有研究发现，HSF1 和肿瘤耐药有一定关系，HSF1 在多种耐药肿瘤和细胞株中出现过表达[12]。本研究中，结直肠癌患者癌组织中HSF1阳性表达率显著高于癌旁组织，提示HSF1 能够参与结直肠癌的发生。浸润转移为恶性肿瘤的主要生物学特征，也是影响患者治疗效果及预后的主要因素。本研究发现，临床分期较晚、有淋巴结转移及低分化型结直肠癌中的HSF1阳性表达率分别高于无淋巴结转移及中、高分化型者，提示随着结直肠癌淋巴结的转移和分化程度的降低，HSF1的表达相应增加，进一步提示HSF1 能够参与结直肠癌的进展。另外本研究中，HSF1 阳性表达者的生存率低于HSF1 阴性表达者，表明HSF1 表达能够评估结直肠癌患者预后情况。宋旭等[13]研究也认为，HSF1高表达和前列腺癌发生、发展有明显相关性，且阳性表达者的预后较差。

抑癌基因及癌基因表达失衡为肿瘤发生发展的基础，原癌基因是参与细胞增殖及凋亡的基因，机体正常状态下呈低表达，其过度表达能够导致细胞发生恶性转化，引起肿瘤发生。c-Jun 为机体常见原癌基因，c-Jun 受到刺激后可立即表达并生成转录因子，调节其他基因转录和表达，影响正常细胞生长、发育及分化，导致细胞发生恶性转化[14]。本研究中，c-Jun、p-c-Jun可在结直肠癌及癌旁组织中表达，且结直肠癌组织中的阳性表达率更高，提示c-Jun、p-c-Jun 在结直肠癌组织组织中高表达，其异常表达能够导致细胞周期异常，引起肿瘤发生。随着结直肠癌临床分期及组织分化程度的加重，c-Jun、p-c-Jun阳性率随之上升，且与淋巴结转移有明显相关性，提示c-Jun、p-c-Jun 异常表达可能和肿瘤的转移、侵袭性有关。考虑与c-Jun能够避免肿瘤细胞发生凋亡及生长监控，抑制异常增殖，刺激结直肠癌组织的发生发展。同时本研究显示，c-Jun、p-c-Jun 在结直肠癌组织中阳性表达者的预后相对较差。

有研究发现，DPD高表达的恶性肿瘤患者的肿瘤分期越晚，更容易发生转移[15]。又有研究报道，DPD活性缺乏能够影响5-FU在体内的清除，延长半衰期，增加细胞毒性反应[16]。本研究结果显示，DPD在结直肠癌组织中的阳性表达率显著上调，且随着肿瘤恶性程度的加重而增加，和肿瘤的恶性生物学行为有明显相关性，表明DPD 能够促进细胞恶性增殖，参与结直肠癌发生发展。且DPD 阴性表达的结直肠癌患者预后优于DPD 阳性表达者，考虑与DPD 活性较高能够加快5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil，5-FU)在机体的代谢，降低5-FU的抗癌效应，影响肿瘤组织对相关药物的吸收效果，从而影响预后。有关研究发现，HSF1能够和c-Jun 中HSE 结合，促进c-Jun 的转录翻译[17]。另有研究表明，HSF1能够和p-c-Jun结合，产生新型的异源二聚体，并可刺激DPD 转录，增加机体DPD 活性，导致5-FU 耐药[18]。本研究发现，结直肠癌组织中HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 的表达均有一定相关性，提示此类指标能够共同参与结直肠癌的发生发展。

综上所述，结直肠癌组织中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表达明显上调，能够反映肿瘤的临床生物学行为及预后情况。但本研究随访时间较短，HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD对结直肠癌患者预后的影响，有待更多大规模的长期研究进一步论证和分析。