不同产地的芦根提取物中对香豆酸含量测定

◎ 陈炎欢，刘贤钊，江志鹏，黄照荣，邱富源

（无限极（中国）有限公司，广东 江门 529100）

芦根提取物是以禾本科植物芦苇（Phragmites communisTrin.）的新鲜或干燥根茎为原料，经提取、过滤、浓缩、干燥等工序制成的提取物[1-6]。芦根提取物对香豆酸具有清热泻火、生津止渴、除烦、止呕及利尿的作用[7-10]。

目前在国内外均未有芦根提取物相关的质量标准，本研究对9批不同产地的芦根提取物对香豆酸含量进行测定，为鉴别芦根提取物提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备

HP1200型高效液相色谱仪（包括二极管阵列检测器，美国Agilent公司），KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 材料与试剂

芦根提取物由适量芦根药材加8倍量水煎煮3次，合并滤液，70 ℃减压浓缩，经喷雾干燥而得。9批芦根提取物来源于2个厂家，编号1～9。

对香豆酸（CAS号501-98-4，中国食品药品检定研究院，纯度99.3%）；甲醇为色谱纯（德国Merck公司）；其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

1.3 试验方法

1.3.1 对香豆酸的含量测定

（1）对照品溶液制备。精密称取对香豆酸对照品约1 mg于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，即得对照品溶液。

（2）供试品溶液制备。精密称取本品约1.0 g于50 mL小烧杯中，加水20 mL，加热使溶解，冷却至室温后转移至25 mL棕色容量瓶中，加水至刻度，摇匀，用0.45 μm的针式过滤器过滤，滤液即为供试品溶液。

（3）色谱条件。色谱柱：十八烷基键合硅胶柱（150 mm或250 mm×4.6 mm，5 μm）。流动相：以乙腈为流动相A，以0.2%甲酸溶液为流动相B，按18∶82比例（体积比）进行洗脱；波长310 nm；柱温30 ℃；流速1.0 mL·min-1；进样量10 μL；理论塔板数按对香豆酸计不低于5 000。

1.3.2 方法学考察

（1）线性关系考察。精密称取对香豆酸对照品1.411 mg置50 mL容量瓶中，按1.3.1项下（1）制备方法加甲醇溶解制成储备液，再分别精密吸取该储备液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL和10.0 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，按1.3.1项下（3）色谱条件分析，测定峰面积。

（2）精密度试验。精密称取1.3.1项下（1）制备的对香豆酸对照品溶液，重复进样6次，分别计算峰面积及保留时间的RSD值。

（3）稳定性试验。精密称取芦根提取物按1.3.1项下（2）制备的供试品溶液，按1.3.1项下（3）色谱条件分别于0 h、2 h、4 h、6 h、12 h和24 h测定，记录色谱图。

（4）重复性试验。精密称取芦根提取物同一天内按1.3.1项下（2）制备的6份供试品溶液，按1.3.1项下（3）色谱条件测定对对香豆酸含量。

（5）回收率试验。精密称取芦根提取物约0.5 g分别置于9个50 mL小烧杯中。另取对香豆酸对照品1.723 mg置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，分别吸取该对照品溶液2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL，分3组加入含样品的9个50 mL小烧杯中，按1.3.1项下（2）制成供回收率测定用供试品溶液，按1.3.1项下（3）色谱条件测定，计算对香豆酸的回收率。

（6）样品含量测定。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶各10 μL，注入液相色谱仪进行测定。根据所得对照品溶液和供试品溶液色谱图中对香豆酸峰面积计算供试品中待测组分对香豆酸含量。

2 结果与分析

2.1 对香豆酸的含量测定

9批芦根提取物中对香豆酸含量（以干基计）在0.018%～0.026%，地域差异不明显，结果见表1。

“忽闻教堂钟声、工厂汽笛声，以及厂外欢呼声与歌唱声同时并作，余辈惊向何故？始知休战条约已签订，战争从此可以终止矣！此何日也？记之永久不忘之，1918年11月11日也。是日，各种工作各地战事自11点起一律停止……”

表1 芦根提取物对香豆酸含量测定结果表

2.2 方法学考察

2.2.1 线性关系考察

以对香豆酸对照品的浓度（μg·mL-1）为横坐标，峰面积为纵坐标，求得回归方程为y=1.327 9x-0.093 6，相关系数R2=0.999 9，如图1所示。结果表明对香豆酸在2.802 3～28.022 5 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

图1 标准曲线及回归方程图

2.2.2 精密度试验

精密度试验结果见表2，可以看到保留时间和峰面积的RSD值分别为0.04%和0.06%，不对称度（以对香豆酸计）不高于1.2，理论塔板数（以对香豆酸计）约12 000，实验结果表明仪器精密度良好。

表2 精密度试验结果表（n=6）

2.2.3 稳定性试验如表3所示，供试品中对香豆酸峰面积的RSD为

表3 稳定性试验结果表（n=6）

0.43%（n=6），表明样品溶液在24 h内稳定性良好。

2.2.4 重复性试验

重复性试验结果见表4，对香豆酸平均含量为0.018%，RSD为1.88%，分离度大于1.5，实验结果表明该方法重复性良好。

表4 重复性试验结果表

2.2.5 回收率试验

从表5可知，对香豆酸平均回收率为98.09%，RSD值为0.72%，表明该方法准确度良好。

表5 对香豆酸回收率结果表（n=9）

3 结论

研究表明，芦根提取物中对香豆酸含量的高效液相色谱法其系统适应性、精密度、线性关系、准确度等均符合要求，该方法可以作为芦根提取物中对香豆酸的含量测定方法；不同产地的芦根提取物中对香豆酸含量差异不明显，芦根提取物中对香豆酸含量不低于0.01%，为评价芦根提取物的质量提供参考。