气相色谱-质谱联用仪测定整颗鱼油胶囊中7种邻苯二甲酸酯的含量

◎ 姚少芳

（1.广东省食品工业研究所有限公司，广东 广州 511442；2.广东省食品质量监督检验站，广东 广州 511442；3.广东省食品工业公共实验室，广东 广州 511442）

邻苯二甲酸酯类（PAEs）又称增塑剂，一般指邻苯二甲酸与4～15个碳的醇形成的酯，可降低塑料材料的硬度、脆化温度和软化温度，提高柔韧性和曲挠性[1]，因此在塑料生产中被广泛应用。PAEs与塑料基质间没有形成共价键，当接触到油脂、水等物质时极易溶出，从而扩散到环境或食物中[2]。研究表明，PAEs可能会对人体的神经系统、生殖系统等产生毒性[3]。

鱼油是一种较为特殊的脂肪性食品，大众接受度极高。受原料、生产工艺、包装工艺等因素的影响，PAEs的溶入风险较高，但是鱼油中富含二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）等多种n-3多不饱和脂肪酸，根据GB/T 5009.271—2016[4]的前处理方法并不能得到有效净化。目前文献报道的油脂中的PAEs检测方法有气相色谱法[5]、气相色谱-质谱法[6-8]、气相色谱-串联质谱法[9]、高效液相色谱法[10-12]以及液相色谱-串联质谱法[13-14]等，其中质谱法具有灵敏度高、抗干扰能力强等优点，在PAEs的检测中应用广泛。本研究结合GC-MS对易挥发化合物有优良的定性定量检测性能，通过优化样品前处理方法，建立鱼油胶囊7种PAEs的气相色谱－质谱的检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

鱼油胶囊（市售）。

邻苯二甲酸酯及其内标标准品（纯度均高于95%）：邻苯二甲酸二甲酯（DMP）、邻苯二甲酸二乙酯（DEP）、邻苯二甲酸二异丁酯（DIBP）、邻苯二甲酸二正丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二甲氧乙酯（DMEP）、邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯（DEEP）、邻苯二甲酸二戊酯（DPP）、邻苯二甲酸二甲酯-D4（DMP-D4）、邻苯二甲酸二乙酯-D4（DEP-D4）、邻苯二甲酸二异丁酯-D4（DIBP-D4）、邻苯二甲酸二正丁酯-D4（DBP-D4）、邻苯二甲酸二甲氧基乙酯-D4（DMEP-D4）、邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯-D4（DEEP-D4）以及邻苯二甲酸二戊酯-D4（DPP-D4），均购于德国Dr.Ehrenstorfer公司。

氯化钠（分析纯，广州化学试剂厂）；PSA粉（40～60 μm，天津博纳艾杰尔科技有限公司）；C18粉（40～63 μm，上海安谱仪器公司）；乙腈、正己烷（色谱纯，美国Honeywell公司）。

Agilent 7890B-5977B气相色谱-质谱联用仪（美国Agilent公 司，配EI离 子 源）、SIGMA 3K15台式高速冷冻离心机（德国SIGMA公司）、IKA MS3 basic涡旋混合器（德国IKA公司）、HWS-26电热恒温水浴锅（上海一恒科技有限公司）、ME204E万分之一天平（广州市东南科技创科技有限公司）。

1.2 测定方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱，DB-5MS石英毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；进样口温度260 ℃；传输线温度290 ℃；进样量1 μL；载气：氦气（纯度≥99.999%），流速1 mL·min-1，进样方式：不分流进样；升温程序：60 ℃保持1 min，以20 ℃·min-1升至220 ℃，保持1 min，以5 ℃·min-1升至260 ℃，保持1 min，以20 ℃·min-1升至290 ℃，保持8 min。

1.2.2 质谱条件

电子轰击离子源（EI）：电离能量70 eV，离子源温度230 ℃，四级杆温度150 ℃，溶剂延迟时间5 min；质谱监测方式：选择离子扫描模式（SIM）。7种邻苯二甲酸酯类化合物及其内标的特征离子见表1。

表1 7种邻苯二甲酸酯类化合物及其内标的特征离子表

1.2.3 样品前处理方法

取整颗鱼油胶囊称取质量（精确至0.000 1 g）置于带刻度玻璃比色管中，加水定容至20 mL，60 ℃水浴至完全溶解，取出涡旋混匀，放冷至室温；取2 mL于玻璃离心管中，加5 mL正己烷饱和的乙腈，涡旋1 min，加2 mL乙腈饱和的正己烷和1 g氯化钠，涡旋30 s，4 000 r·min-1离心10 min；取乙腈层于另一玻璃离心管，加2 mL乙腈饱和的正己烷，涡旋30 s，4 000 r·min-1离心5 min，弃去正己烷层，重复以上操作；乙腈层中加入500 mg C18粉、500 mg PSA粉，涡旋1 min，4 000 r·min-1离 心5 min，上 清 液 供GC-MS分析。

中国文化经历了自大、危机、自卑、自觉和自信的曲折过程,让人清楚地看到,科学文化始终充当着中国文化发展的增量,还源源不断地修正作为存量的中国传统文化,为中国文化现代转型保驾护航,理应是当下中国特色社会主义先进文化的不可或缺的组成部分。

1.2.4 混合标准溶液配制

分别称取PAEs及其内标标准品10 mg（精确至0.1 mg），用正己烷定容至10 mL容量瓶，配制成1 000 μg·mL-1的标准储备液，于-18 ℃避光保存。使用前稀释得到0.01 μg·mL-1、0.02 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.1 μg·mL-1以及0.2 μg·mL-1且内标浓度为0.1 μg·mL-1混合标准工作溶液。

2 结果与分析

2.1 鱼油胶囊溶解温度的选择

鱼油胶囊壳的基质大多数为明胶，并添加着色剂、遮光剂、甘油等辅料制成。明胶具有亲水性，用温水溶解以完全释放出样品中的目标物质，如果水温过低，胶囊壳无法充分溶解，如果水温过高，容易损失目标物质[15]。比较了30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃4种温度水浴溶解鱼油胶囊后提取净化的结果，7种邻苯二甲酸酯类化合物及其内标损失均不明显，故采用60 ℃溶解鱼油胶囊。

2.2 试剂的选择

2.2.1 提取试剂的选择

邻苯二甲酸酯水溶性低，易溶于大多有机溶剂。比较了实验室常用的二氯甲烷、乙腈、丙酮、正己烷作为提取试剂的效果，结果表明，由于鱼油内容物杂质过多，丙酮、二氯甲烷提取效果差，采用乙腈提取，正己烷脱脂除杂效果最好。

2.2.2 正己烷脱脂除杂次数的选择

用正己烷进行3次脱脂除杂，比较正己烷脱脂除杂第1次、第2次、第3次后的结果可知，7种邻苯二甲酸酯类化合物及其内标损失均不明显，

DMP、DMP-D4、DEP、DEP-D4、DIBP、DIBP-D4、DMEP、DMEP-D4、DEEP及DEEP-D4分离效果差异不大，但DBP、DBP-D4、DPP及DPP-D4由于鱼油的干扰，随着正己烷除杂次数的增加，其分离效果越好，如图1和图2所示。故采用3次正己烷除杂方式。

图1 DBP和DBP-D4除杂的次数及分离效果图

图2 DPP和DPP-D4除杂的次数及分离效果图

2.2.3 试剂提取使用量的选择

分别使用5 mL、8 mL、10 mL乙腈对阳性样品进行提取，对比其回收率发现提取量影响不大，见表2。

表2 不同用量乙腈对阳性样品进行提取的回收率表

2.3 方法的线性范围和检出限

本方法采用内标法进行定量，建立以各目标化合物的质量浓度为横坐标，响应值为纵坐标的标准曲线，线性范围、检出限、回归方程和相关系数见表3。

表3 7种PAEs的线性范围、检出限、回归方程和相关系数表

由表3可知，线性相关系数均高于0.999。在优化的色谱条件下，对基体进行添加回收试验，按照信噪比（S/N）为3计算7种邻苯二甲酸酯类化合物的方法的检出限（LOD）为0.002 5～0.25 mg·kg-1。

2.4 方法的精密度和准确度测定

按照1.2.3的步骤，选取阴性样品进行加标回收试验，验证方法的精密度和准确度。加标水平分别为0.075 μg、0.15 μg和0.75 μg，每个加标水平重复3次，扣除本底值后计算加标回收率，如表4所示。

表4 不同加标浓度的加标回收率和相对标准偏差表（n=6）

结果显示，7种邻苯二甲酸酯类化合物平均加标回收率为86.4%～108.7%，相对标准偏差（RSD）为0.8%～4.8%（n=6），其精密度和准确度能够满足分析需求。

3 结论

本文采用乙腈提取，3次正己烷脱脂除杂，PSA和C18净化，GC-MS的检测方法同时测定鱼油胶囊中7种邻苯二甲酸酯类化合物，该方法中7种邻苯二甲酸酯类化合物含量在0.01～0.20 μg·mL-1范围内线性关系良好，平均加标回收率为86.4%～108.7%，相对标准偏差（RSD）均不大于4.8%（n=6），方法检出限为0.002 5～0.25 mg·kg-1。