2020年宁夏地区沙门氏菌病原学特征及耐药性分析

李惠娟，魏 琼，张燕飞

沙门氏菌(Salmonella)是一种常见的食源性致病菌[1-2]，能够引起患者高热、恶心、呕吐、腹痛等临床症状，主要存在于各类肉及肉制品、蛋及其制品中。据报道，全球每年大约有9 000多万例的沙门氏菌感染事件，并导致大约15万感染者死亡[3]，在我区食源性疾病致病因子中也以沙门氏菌感染为首[4]。近年来，食源性疾病成为公共卫生关注的焦点，食品安全面临着严重挑战，同时抗生素的耐药性也成为威胁公共卫生和食品安全的全球性问题。因此，本文旨在分析2020年沙门氏菌在食品中的污染情况，食源性疾病中发病率、耐药性及不同来源菌株之间的相关性，为食源性疾病的防控提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料：收集2020年银川市、吴忠市、石嘴山市、固原市、中卫市疾控中心分离培养的沙门氏菌；药敏试验大肠埃希氏菌ATCC25922及过程质控菌株大肠埃希氏菌ATCC25922、PFGE分型用标准菌株H9812均来自中国疾病预防控制中心传染病所提供。

1.2 试剂和仪器：沙门氏菌分离培养用麦康凯、克氏双糖等购自北京路桥生物有限技术公司；生化鉴定API20E购自梅里埃生物公司；诊断学清购自宁波天润有限公司；药物敏感性实验药敏纸片购自BD公司；金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌ATCC25922质控菌株来自中国疾控中心。限制性内切酶XbaⅠ购自大连宝生物；脉冲场凝胶电泳仪(CHEF-Mapper)、凝胶成像仪(GelDoc 2000) 系统购均自伯乐。

1.3 细菌鉴定和血清分型：沙门氏菌分离培养按照国家标准操作规程，经生化鉴定纯培养后进行血清凝集诊断确定血清型。

1.4 药物敏感性试验：药物敏感性实验室采用肉汤稀释法，挑取纯培养菌落及质控菌株(大肠埃希菌ATCC25922)接种至BHA平板37 ℃培养18 h；挑取新鲜纯菌落数个用4 mL无菌生理盐水充分混匀,调节菌悬液浓度在1.5×108CF U/mL；取100 μl混匀于10 mL CAMHB肉汤中,用8道移液器向96孔药敏板中加入菌悬液,每孔50 μl,加盖置入湿盒中,36 ℃培养18 h,最终浓度约为5×105CFU/mL。

1.5 脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析：按照沙门氏菌PFGE分子分型统一方法操作，包括胶块制作、细菌的裂解、染色体DNA酶切、电泳及成像与电泳图像分析和结果聚类分析。

2 结果

2.1 血清型分布结果：33株可疑株经API20E鉴定为沙门氏菌，采用沙门氏菌多价诊断血清确证，最后用群型血清进行分型。经鉴定分离主要以肠炎沙门氏菌为主，占45.45%；其次鼠伤寒沙门氏菌，占24.24%，见表1。

表1 不同来源沙门氏菌血清学分型结果

2.2 药物敏感性试验结果：33株分离菌株进行6类10种抗生素的药物敏感性试验，结果显示所有菌株均出现不同程度耐药，其中76.5%的菌株对萘叮酸耐药，其次是氯霉素耐药菌株为19.5%，多株菌株产生了多重耐药性，见表2。

表2 沙门氏菌对10种抗生素药物敏感性实验结果

2.3 PFGE结果：沙门氏菌分离株及质控菌株(H9812)采用限制性内切酶Xbal酶切后，脉冲场凝胶电泳分型，分型图谱采用Bionumerics 4.0软件聚类分析，见图1(目录后)。分型结果显示，33株实验菌株的PFGE带型相似性为58.15%～100%。来源于食品的沙门氏菌共分为11个带型，NXSP004为优势带型，来源于病例的菌株分为4个带型，NXJB004为优势带型，见图1(目录后)。

3 讨论

沙门氏菌作为一种常见的肠道致病菌，是导致食物中毒的主要病原之一，对人体造成严重伤害，因此沙门氏菌的监测、检测及溯源分析受到越来越多的关注。本研究对宁夏地区食品及患者中分离的沙门氏菌进行统计分析，结果表明我区食品及患者感染仍然以肠炎沙门氏菌为主，占所有分离株的45.45%(15/33)；其次为鼠伤寒沙门氏菌，占24.24%(8/33)

其他血清型沙门氏菌均匀分布，此次研究结果与刘翔等[5]研究的2007-2011年宁夏地区沙门菌主要血清型基本一致,说明我区沙门氏菌血清型流行趋势趋于稳定，未发生较大的变异变迁。

由于在饲料中加入大量的抗生素添加剂及不同菌株间耐药基因的频繁转移,导致沙门氏菌的耐药性逐渐增强,耐药谱也越来越宽[6]。本试验分离的33株沙门氏菌对6类10种抗生素均产生不同程度的耐药，76.5%的菌株对萘叮酸耐药，其次为氯霉素耐药菌株为19.5%，磺胺甲恶唑及头孢噻肟的敏感率分别为89.8%和88%。综合比较可以发现，2020年度分离株对10种抗生素的耐药性与魏琼等发表的宁夏地区食源性和人源沙门菌耐药性与血清型对比研究结果无明显变化[8]。耐药性的积累是一个长期演化的过程，在短时间内很难达到由量变到质变，本实验对2020年宁夏地区沙门氏菌耐药性的研究，为食源性疾病临床治疗中抗生素的选用提供重要依据。

PFGE可以通过对致病菌DNA的分析，并通过Trannet数据库比对致病菌株间的关联性，从而识别、追踪致病菌来源，有效控制食源性疾病暴发，查明污染食品源头，为疫情防控提供重要依据[7]。本研究对分离的33株均进行PFGE分子分型，共分为15个PFGE型别，其中来源食品沙门氏菌共分为11个带型，NXSP004为优势带型，来源于病例的菌株分为4个带型，NXJB004为优势带型。从分型图谱发现NXSP001和NXJB002同源性为100%，可能存在散在的暴发，应结合流行病学进行追踪溯源。同时其他食品及病例来源菌株的PFGE型别较为分散，同源性较低，说明在本次监测范围内未发生由此类食品引起的食物中毒事件。可能在整个食品运输、加工及后期食用阶段较为规范，避免了中毒事件的发生。