人参枣仁颗粒改善睡眠功能的实验研究

杨 铭，于德伟，赫 慧，杨 明

(吉林省中医药科学院·吉林 长春 130012)

人参枣仁颗粒是根据中医对失眠的治疗经验及中药的特点和组方规律，选取可用于保健食品的药食两用中药材人参、酸枣仁、天麻等，配伍制成的保健食品。本研究依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003 年版)相关内容[1]，观察其改善睡眠功能，并对相关作用机制进行初步探讨，为将人参枣仁颗粒开发成为改善睡眠功能保健食品提供药理学依据。

1 材料

1.1 药物 人参枣仁颗粒：由吉林省中医药科学院新药研究开发中心化学室提供，批号：20180401，10 g/袋；临用时用蒸馏水配制成每1 mL含生药量为0.68、0.23、0.12 g浓度。

1.2 动物 健康成年ICR小鼠，SPF级，雌性，体质量19～21 g，购自辽宁长生生物技术有限公司，生产许可证号：SCXK(辽)2015-0001。饲养环境：屏障环境动物观察室，温度：21～25 ℃，相对湿度：40%～70%。饲料均购自北京科奥协力饲料有限公司，许可证号：京饲证(2018)06073。

1.3 试剂 小鼠谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)、5-羟色胺(5-HT) ELISA 试剂盒：购自长春晶美生物科技有限公司；戊巴比妥钠、巴比妥钠：Sigma公司。

1.4 仪器 FA2204B型电子天平(d=0.1 mg)：上海精密科学仪器有限公司；DT100型电子天平(d=0.1 g)：熟双杰电子天平有限公司；T6 紫外可见分光光度计：北京普利生有限公司；TGL-16B 高速离心机：上海安亭科学仪器厂；HC-3618R高速冷冻离心机：安徽中科中佳科学仪器有限公司；ST-360酶标仪：上海科华实验系统有限公司；ZZ-6小鼠自主活动测试仪：成都泰盟科技有限公司。

2 方法

2.1 动物分组及给药 实验分4 批进行。每批48 只小鼠按体质量随机分4组，每组12只。分别为空白对照组和人参枣仁颗粒高(10 g/kg)、中(3.3 g/kg)、低(1.7 g/kg)(分别相当于成人每日用量的30、10、5 倍)3个剂量组；每日以蒸馏水配置不同浓度样品，以20 mL/kg灌胃给药，空白对照组予同体积蒸馏水。每天灌胃1 次，连续灌胃30 d。

2.2 观察指标及测定方法

2.2.1 对小鼠直接睡眠和自主活动的影响 末次给药后30 min，将小鼠放入小鼠自主活动仪内适应 5 min，记录5 min 内小鼠的自主活动次数；并观察给药1 h内各组入睡动物数及睡眠时间。睡眠以翻正反射消失为指标。

2.2.2 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验 小鼠末次给药30 min后，各组动物腹腔注射47.5 mg/kg戊巴比妥钠，注射体积为10 mL/kg，以翻正反射消失为指标，观察记录动物入睡时间和觉醒时间，计算睡眠时间。

2.2.3 戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验 小鼠末次给药30 min后，各组动物腹腔注射27.5 mg/kg戊巴比妥钠，注射体积为10 mL/kg，动物置24～25 ℃安静环境下，观察动物以翻正反射消失达1 min以上为入睡动物，记录每组30 min内入睡动物数。

2.2.4 巴比妥钠睡眠潜伏期实验 小鼠末次给药20 min后，各组动物腹腔注射250 mg/kg巴比妥钠，注射体积为20 mL/kg，观察注射巴比妥钠后，以翻正反射消失达1 min以上为入睡指标，记录动物入睡时间，计算睡眠潜伏期。

2.2.5 小鼠脑内GABA、5-HT及Glu含量测定 2.2.1 实验小鼠测试观察完毕后，脱颈椎处死，冰浴开颅取全脑后，在冰平皿上分离大脑，用冰生理盐水冲洗血液，滤纸拭干，大脑称重后，加9倍量的冰生理盐，4 ℃条件下匀浆，取浆液至 2 mL离心管中离心(3 000 r/min，15 min，4 ℃)，取上清液，按照试剂盒相关操作步骤测定样品中GABA、5-HT、Glu的OD 值，并带入标准曲线回归方程式，计算样品中GABA、5-HT、Glu的含量。

3 结果

3.1 人参枣仁颗粒对小鼠直接睡眠和自主活动的影响 给药后，各剂量组未见睡眠动物，对直接睡眠无影响。高剂量组、中剂量组小鼠自主活动次数减少，与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。结果见表1。

表1 各组小鼠直接睡眠和自主活动的比较

3.2 人参枣仁颗粒对延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响 见表2。由表2可见，高剂量组和中剂量组均能明显延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间，与空白对照组比较有显著性差异(P<0.05)。低剂量虽能增加小鼠睡眠时间，但差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 各组小鼠延长戊巴比妥钠诱导小鼠 睡眠时间的比较

3.3 人参枣仁颗粒对戊巴比妥钠阈下剂量催眠的影响 见表3。由表3可见，各剂量组睡眠动物增加，但与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表3 各组小鼠戊巴比妥钠阈下剂量小鼠睡眠发生率比较

3.4 人参枣仁颗粒对小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期的影响 见表4。由表4可见，高剂量组和中剂量组均能明显缩短巴比妥钠小鼠睡眠潜伏期，与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。低剂量虽能减少小鼠睡眠潜伏期，但差异无统计学意义(P>0.05)。

表4 各组小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期比较

3.5 人参枣仁颗粒对小鼠脑GABA、5-HT及Glu含量的影响 见表5。由表5可见，与空白对照组比较，高、中剂量组均能明显升高小鼠脑内GABA和5-HT含量，有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。各剂量组对Glu含量有一定的降低作用，但差异无统计学意义(P>0.05)。

表5 各组小鼠脑组织GABA、5-HT及Glu含量比较

4 讨论

人参枣仁颗粒，由人参、酸枣仁、天麻、龙眼肉、远志、茯苓组成。君药人参，甘温补益，补力雄厚，补脾养心，滋阴养血，善补一切气血亏虚；心血足则神自安，心气强则善思多智，故心脾两虚、气血不足之不寐即可除之。臣药酸枣仁，养心安神，甘补酸收，既能补心养肝而宁心安神，又可收敛营阴而止虚烦，可用于心脾两虚、神失所养的失眠、惊悸之症，以助君药安神之功。佐药远志、茯苓、龙眼肉、天麻，远志辛散苦泄温通，使心肾互济而安神定志，肺宣痰化窍开神宁，故可安神益智，拂郁化痰，而痰消寐复；茯苓补益心脾，养心安神，以助君臣安神；龙眼肉甘润平和，营养心脾，称为营养之佳品，有补心脾、益气血之功，对思虑过度，劳伤心脾而致失眠堪有良效；天麻可定惊息风、镇惊安神。诸药合用补心脾、益气血、神安宁、寐可复，共奏补脾养心，补血安神之功。现代药理学研究表明，人参对不同类型的神经衰弱患者均有一定的治疗作用，能消除失眠症状[2]；天麻能对中枢神经有明显的药理作用，具有镇静、安眠作用[3-4]；酸枣仁有镇静、催眠药理作用[5]。研究结果表明，与空白对照组比较，人参枣仁颗粒对动物无直接睡眠作用；能明显减少小鼠自主活动次数，有镇静作用；能延长阈上剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间，缩短巴比妥钠小鼠睡眠潜伏期；表明人参枣仁颗粒有改善睡眠作用明显。

睡眠觉醒与很多神经递质密切相关，如乙酰胆碱、谷氨酸、GABA、食欲素、褪黑素、组胺、腺苷等。不同的神经递质相互联系，互相影响，共同维持着睡眠觉醒节律[6]。5-羟色胺(5-HT)是脑内一种重要的单胺类神经递质，对睡眠的调节起到关键作用，脑内5-HT水平的减少可引起失眠，脑内 5-HT 浓度升高，会产生睡意[7]。GABA 作为一种中枢神经系统抑制性神经递质，其分解代谢产物γ-羟基丁酸(GHB)可通过作用细胞膜上的GHB特异性受体、GABA-B 受体或 5-羟色胺能神经系统等途径，发挥对中枢神经系统兴奋性神经元的抑制作用，进而对机体产生镇静催眠等效果[8]；或可影响失眠障碍患者昼夜节律，而改善睡眠[9]。Glu是大脑中主要的兴奋性神经递质，在觉醒时的神经活动中起着基础作用。一般认为失眠的发生与中枢神经系统内抑制性氨基酸的兴奋性下降和兴奋性氨基酸的兴奋性升高有关[10]。研究结果表明，人参枣仁颗粒能显著升高小鼠脑中5-HT 与GABA浓度，对Glu影响不明显。可能与处方中人参、酸枣仁的活性成分调节5-HT与GABA有关[11-12]。提示人参枣仁颗粒能通过增加脑中主要的抑制性神经递质5-HT和GABA含量，发挥镇静和改善睡眠作用。中药作用机制具有多成分、多靶点的特点，人参枣仁颗粒改善睡眠作用机制有待于通过神经内分泌、细胞因子、基因蛋白等领域进一步深入探究。