BMI与IVF/ICSI-ET术后自然流产胚胎染色体核型异常的关系

吴 军， 崔云静， 郭飞波， 杨艳华

(湖北省天门市第一人民医院妇产科， 湖北 天门 431700)

体外受精/卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection-embryo transfer，IVF/ICSI-ET)术后自然流产是指在非人为目的、自然状态下所发生的流产[1]。IVF/ICSI-ET术后自然流产的原因除胚胎质量及子宫内膜容受性外，最主要的原因在于胚胎染色体出现异常，且一般是遗传因素导致[2]。术后自然流产给患者和家庭带来严重的心理和精神负担，使患者的生活质量严重下降。目前产前诊断和筛查等均无法准确预测IVF/ICSI-ET术后自然流产发生的风险，染色体检查可能能作为术前筛查的辅助指标[3]。体质量指数(body mass index，BMI)值影响IVF/ICSI-ET术后自然流产的可能机制是通过降低IVF/ICSI-ET治疗中的获卵数、卵子率，从而负面调控妊娠结局，也有研究表明高BMI值患者体内糖代谢发生异常，从而对染色体核型造成影响，进而造成患者IVF/ICSI-ET术后自然流产[4]。胚胎染色体核型异常及BMI值均能增加IVF/ICSI-ET术后自然流产的风险，然而目前关于BMI与IVF/ICSI-ET术后自然流产胚胎染色体核型异常关系的研究仍较少。因此，本研究通过检测IVF/ICSI-ET术后自然流产患者胚胎染色体核型异常的情况，并探讨BMI与IVF/ICSI-ET术后自然流产胚胎染色体核型异常的关系。以期为降低IVF/ICSI-ET术后自然流产风险及胚胎移植失败率提供新思路。

1 资料与方法

1.1一般资料:回顾性分析2018年1月至2020年7月期间于天门市第一人民医院妇产科就诊的280例IVF/ICSI-ET术后自然流产患者，其中96例胚胎染色体核型正常患者(正常核型组)，不孕年限平均(5.24±1.57)年；184例胚胎染色体核型异常患者(异常核型组)，不孕年限平均(4.98±1.86)年。不孕的主要因素是男方精子少或弱、女方输卵管阻塞，均经男方精液检查及子宫输卵管造影。两组不孕年限等比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。查阅门诊病历，收集了解患者一般资料，包括年龄、BMI值、不孕年限、不孕原因、不孕类型、助孕方式、促性腺激素(gonadotropins，Gn)用量、Gn使用天数、基础卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，FSH)、获卵数、移植日内膜厚度、移植胚胎数目、移植优质胚胎数目等。其中BMI值<21.4 kg/m2或>24.2 kg/m2患者98例，BMI值21.4 kg/m2～24.2 kg/m2患者182例；流产年龄≥36岁患者116例，流产年龄<36岁患者164例；流产次数>2次患者84例，流产次数≤2次患者196例。纳入标准：①患者均符合IVF/ICSI-ET术后自然流产的相关诊断标准，主要是B超提示胚胎停止发育(不能见到胎芽、无心管搏动)；②病历资料齐全者；③孕期未接触有害物质及未有感染史者；④基础内分泌正常、月经规律者。排除标准：①女方出现卵巢衰竭或为多囊卵巢综合征、子宫内膜异位症、子宫肌瘤者；②伴有恶性肿瘤及血液疾病者；③伴高血压、先天性心脏病等心血管疾病者；④伴有糖尿病等内分泌疾病或严重妇科疾病者。本研究中所有患者均由两名及以上主治医师明确诊断，本试验经医院伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书，并自愿参加。

1.2方 法

1.2.1样本采集及培养:无菌条件下清宫，于手术过程中采集胚胎组织，解剖镜下对绒毛进行分离，分离后置于生理盐水中漂洗，除去凝血块。加入1.5～2.0mL 1.5% EDTA-胰酶(批号：SH30042.01，购自上海研谨生物科技有限公司)，于37℃、5%CO2温箱中消化15min。消化后接种于GIBICO培养基(批号：C12571，购自广州市穗禾生物科技有限公司)中继续培养5～7d，观察到梭形细胞克隆后换液，继续培养2～3d。

1.2.2细胞收获及染色体制备:将细胞混匀后按1×106细胞密度接种于盖玻片上原代培养，7～9d后记录细胞生长状况。细胞铺满80%后加入1滴浓度50μg/mL的秋水仙素，培养2h后提取细胞，G显带制片后进行染色体观察。核型分析每例计数30个分裂相，分析3个核型，出现嵌合体时计数加倍，使用染色体分析系统拍照保存。

2 结 果

2.1两组一般资料比较:两组不孕年限、不孕原因、不孕类型、助孕方式、Gn用量、Gn使用天数、基础FSH、获卵数、移植日内膜厚度、移植胚胎数目、移植优质胚胎数目比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组一般资料比较

2.2IVF/ICSI-ET术后自然流产患者胚胎染色体核型的情况分析:IVF/ICSI-ET术后自然流产患者正常核型组的比例为34.29%，异常核型组的比例为65.71%，其中异常核型组中以非整倍体为主(占41.07%)，异常核型组中染色体结构异常主要以不平衡易位为主(占4.29%)。见表2。

表2 280例IVF/ICSI-ET术后自然流产患者胚胎染色体核型的情况分析n(%)

2.3患者BMI与IVF/ICSI-ET术后自然流产胚胎染色体核型异常的关系:BMI值<21.4kg/m2或>24.2kg/m2IVF/ICSI-ET术后自然流产患者的异常核型比例显著高于BMI值21.4 kg/m2～24.2 kg/m2的患者(P<0.05)。见表3。

表3 BMI与IVF/ICSI-ET术后自然流产胚胎染色体核型异常的关系n(%)

2.4患者流产年龄与IVF/ICSI-ET术后自然流产胚胎染色体核型异常的关系:流产年龄≥36岁IVF/ICSI-ET术后自然流产患者的异常核型比例显著高于流产年龄<36岁的患者(P<0.05)。见表4。

表4 患者流产年龄与IVF/ICSI-ET术后自然流产胚胎染色体核型异常的关系n(%)

2.5患者流产次数与IVF/ICSI-ET术后自然流产胚胎染色体核型异常的关系:流产次数>2次IVF/ICSI-ET术后自然流产患者的异常核型比例显著高于流产次数≤2次的患者(P<0.05)。见表5。

表5 患者流产次数与IVF/ICSI-ET术后自然流产胚胎染色体核型异常的关系n(%)

2.6影响IVF/ICSI-ET术后自然流产患者胚胎染色体核型异常的多因素Logistic回归分析:将IVF/ICSI-ET术后自然流产患者是否出现胚胎染色体核型异常作为因变量，以BMI、流产年龄、流产次数为自变量进行Logistic回归分析，结果显示BMI是影响IVF/ICSI-ET术后自然流产患者出现胚胎染色体核型异常的独立危险因素(P<0.05)。见表6。

表6 影响IVF/ICSI-ET术后自然流产患者胚胎染色体核型异常的多因素Logistic回归分析

3 讨 论

随目前胚胎移植技术发展及辅助生殖技术成熟，不孕患者妊娠率大幅提高，但仍有许多IVF/ICSI-ET术后患者发生自然流产及胚胎移植反复失败，其主要原因是由于胚胎染色体发生异常所致[5]。据调查显示，IVF/ICSI-ET术后自然流产风险会与接触有毒有害物质、患者年龄、产次等存在一定的联系，且严重者可能会出现反复流产[6,7]。因此，需高度重视临床IVF/ICSI-ET术后自然流产，建议患者可及时进行染色体核型分析，有利于降低术后自然流产再次发生风险。

BMI影响患者IVF/ICSI-ET术后自然流产的可能机制是，通过瘦素水平影响下丘脑-垂体-性腺轴的功能，造成促性腺激素分泌不足，进一步造成卵巢激素分泌量降低，进而使子宫内膜调节作用发生异常，增加患者流产风险[8,9]。许定飞等[10]研究表明BMI升高，IVF/ICSI-ET患者晚期流产率也随之逐渐升高。本研究结果显示，IVF/ICSI-ET术后自然流产患者正常核型组的比例为34.29%，异常核型组的比例为65.71%，其中异常核型组中以非整倍体为主(占41.07%)，异常核型组中染色体结构异常主要以不平衡易位为主(占4.29%)。提示IVF/ICSI-ET术后自然流产患者染色体核型异常发生率显著高于正常核型发生率，胚胎染色体核型异常是IVF/ICSI-ET术后自然流产的主要原因，且非整倍体核型异常占首位。进一步提示术后自然流产患者卵母细胞内纺锤体聚合检验点蛋白表达量下降，进而造成细胞内减数分裂发生异常[11]。BMI值<21.4 kg/m2或>24.2 kg/m2IVF/ICSI-ET术后自然流产患者的异常核型比例显著高于BMI值21.4 kg/m2～24.2 kg/m2的患者。提示孕妇BMI值是引起胚胎染色体异常的高危因素之一，BMI值过高的孕妇体内染色体核型异常发生率增加，进一步促进自然流产的发生。分析BMI值过高的患者其体内血糖、胰岛素水平等发生异常，进而导致糖代谢异常，而研究表明，糖代谢异常与染色体核型有密切联系[12]。此外，本研究结果发现，流产年龄≥36岁、流产次数>2次IVF/ICSI-ET术后自然流产患者的异常核型比例显著高于流产年龄<36岁、流产次数≤2次的患者。提示女性高龄及自然流产次数也是影响胚胎染色体异常的因素，临床应针对高龄孕妇及习惯性自然流产孕妇提出合理有效的解决措施。进一步研究发现，BMI是影响IVF/ICSI-ET术后自然流产患者出现胚胎染色体核型异常的独立危险因素。提示女性高龄及自然流产次数虽然对胚胎染色体核型异常有一定的影响，但BMI与染色体核型异常联系最为密切，临床中应密切关注孕妇BMI值，对于BMI值过高的孕妇应采取积极有效的措施，可考虑通过控制其体内胰岛素及血糖等水平，降低BMI值，进而降低自然流产发生率，改善孕妇的妊娠结局，以达到优生优育的目的。

综上所述，胚胎染色体核型异常是IVF/ICSI-ET术后自然流产的主要原因，BMI值过高是引起胚胎染色体核型异常的高危因素。为了明确IVF/ICSI-ET术后自然流产的原因及避免再次发生妊娠失败及术后自然流产，需对孕前患者及时进行染色体核型分析，同时配合患者自身情况采取合理有效的措施，控制患者BMI值。但本研究受地域、实验条件、样本量等因素影响，需进一步深入研究。