HPLC测定小儿清热止咳口服液中苯甲酸的含量

尕藏卓玛 杨丽琼 达娃卓玛

【摘 要】 目的：用HPLC法测定全国范围30家生产企业57批次小儿清热止咳口服液中苯甲酸的含量。方法：Inertsustain C18（5 μm， 250 mm×4.6 mm） 柱，柱温35 ℃;流动相：乙腈-0.02 mol/mL乙酸铵溶液（5∶95）;流速：1.0mL/min;检测波长：240 nm。结果：苯甲酸在6.1350～184.0488 μg/mL线性关系良好（r>0.9998）;平均回收率102.94%。结论：30家企业57批次样品均检出苯甲酸，且各企业样品中苯甲酸含量差异很大。

【关键词】 小儿清热止咳口服液;苯甲酸;测定

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2021）13-0050-04

Abstract：Objective Using the HPLC to check the benzoic content in the children's oral liquid clearing heat and relieving cough in 30 enterprises. The specific method is， Inertsustain C18 （5 μm， 250 mm × 4.6 mm） column， column temperature is 35 ℃; mobile phase： acetonitrile -0.02 mol/ammonium acetate solution （5∶95）; current velocity： 1.0 mL/min; detection wavelength： 230 nm.Result Benzoic acid shows great in the linear relation of 6.1350～184.0488 μg/mL （r>0.9998）; average recovery rate should be 102.94%. Conclusion we have checked the benzoic acid in 60 times of samples in 30 enterprises， and the benzoic acid content is different from different enterprises.

Keywords：Children's Oral Liquid for Clearing Heat and Relieving Cough; Benzoic Acid; Checking

小儿清热止咳口服液原方来自我国汉代名医张仲景的《伤寒杂病论》的麻杏石甘汤。麻杏石甘为麻黄、苦杏仁、石膏、甘草。本品现收载于《中国药典》（2015年版）一部，具有清热宣肺、平喘、利咽的功效，用于小儿外感风热所致的感冒，症见发热恶寒、咳嗽痰黄、气促喘息、口干音哑、咽喉肿痛。该方由麻黄、炒苦杏仁、石膏、甘草、黄芩、板蓝根、北豆根七味药组成，辅料为蜂蜜、蔗糖、苯甲酸钠[1]。已发表的文献主要报道了该制剂中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、黄芩苷及总黄酮的含量[2-5]。关于小儿清热止咳颗粒中辅料苯甲酸的质量控制未见文献报道。苯甲酸又称安息香酸，适量的苯甲酸防腐剂能抑制微生物的生长和繁殖，延长药品的保存期[6-7]。但过量的苯甲酸会对人体产生极大危害，对胃、皮肤和粘膜有一定的刺激性，对于敏感人群， 较多地摄入苯甲酸及其盐会引起过敏反应， 例如哮喘、荨麻疹、代谢性酸中毒和抽搐等症状[8-9]，过少起不到防腐效果。因而对小儿清热止咳颗粒中的防腐剂苯甲酸的用量应该严格控制。为保证用药安全，本实验对该制剂中苯甲酸的HPLC含量测定进行方法学研究，并对30家企业各2批次的苯甲酸含量进行测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC-2030高效液相色谱仪（Labsolution工作站），自带检测器，瑞士Mettler XP205型（精密度为十万分之一）和Mettler XP504（精密度为万分之一）电子天平。

1.2 试药 苯甲酸，购于中国食品药品检定研究院，批号为（100419-201302），纯度大于99%。乙腈（色谱纯，美国Fisher Scientific公司）;水（娃哈哈纯净水）。

2 色谱条件

色谱柱Inertsustain C18（5 μm， 250 mm × 4.6 mm） 柱，柱温35℃;流动相：乙腈-0.02 mol/mL乙酸铵溶液（5∶95）;流速：1.0 mL/min;检测波长：240 nm;進样量：20 μL。

3 结果与讨论

3.1 检测波长的确定 用二极管阵列检测器对标准溶液在190 ～ 700 nm 范围内进行波长扫描，发现苯甲酸在223 nm处有最大吸收，如图1所示。根据样品特征及前处理过程中试剂的干扰情况，选择检测波长为240 nm。

3.2 对照品溶液的制备 取苯甲酸对照品适量，精密称定，置于50 mL的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，制成浓度为1.8044 mg/mL的对照品溶液。对照图谱如图2所示。

3.3 供试品溶液的制备 对30家企业57批次样品进行检验。精密吸取0.2 mL于10 mL的容量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀。供试品图谱如图3所示。

3.4 标准曲线绘制 精密量取苯甲酸对照品母液6.8 mL于50 mL的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，制成245.3984 μg/mL的目标溶液。再分别精密量取0.25、0.5、1.0、2.5、5.0、7.5 mL分别置于10 mL的容量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀。在上述色谱条件下分析，以对照品溶液的浓度为横坐标，其对应的纵坐标为峰面积进行线性回归，苯甲酸对照品在一定范围内与峰面积呈良好的线性关系，结果见表1和图4。

3.5 检出限 取对照品溶液，稀释至对照品色谱峰高达到3倍信噪比，得到苯甲酸的检出限为9.816 ng/mL。

3.6 精密度 精密量取浓度为245.3984 μg/mL的苯甲酸对照品2.5 mL置于10 mL的容量瓶中，以流动相稀释至刻度，连续进样6次，测得苯甲酸峰面积RSD为0.053%，表明仪器精密度很好。

3.7 重复性 精密量取供试品溶液0.2 mL共6份，分别置于10 mL量瓶中，以流动相稀释至刻度，以0.45μm微孔滤膜过滤后进样分析，RSD 为1.81%。

3.8 稳定性 取同一供试品溶液，按上述方法提取后在室溫下放置0、2、4、8、12、24 h在上述色谱条件下分析，测得苯甲酸峰面积RSD为0.412%，表明样品在室温下24 h内稳定。

3.9 加样回收试验 精密量取供试品溶液0.1 mL共6份，分别置于10 mL的容量瓶中，精密加入溶液浓度为245.3984 μg/mL的苯甲酸对照品1.0 mL，以流动相稀释至刻度。在上述色谱条件下进行分析，结果见表2。

3.10 耐用性 精密量取供试品溶液0.2 mL共两份分别置于10 mL的容量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀。采用不同色谱柱对同一样品在上述色谱条件下进行分析，色谱柱①岛津柱子InertSustain C18（5 μm， 250 mm × 4.6 mm）、②waters柱子XSELECT CSH C18（5 μm， 250 mm × 4.6 mm）③Agilent柱子 EcLipse XDB-C18（5 μm， 250 mm × 4.6 mm） 。不同柱子测得的结果RSD为1.48%，表明样品耐用性良好。见表3。

3.11 样品的测定 对于口服液体制剂，《中国药典》2015年版一部明确规定，苯甲酸含量不得超过0.3%[10]，对以上30家企业57批次样品的苯甲酸含量进行测定，结果显示，大部分厂家苯甲酸含量均匀，都在合格范围之内，个别企业苯甲酸含量很低，几乎为零，也有个别厂家的苯甲酸含量已超出合格范围。见表4。

4 结论

苯甲酸本身毒性较大，故针对儿童药，世界上有许多国家已经禁止使用。但本次抽样的30家企业57批次样品均以苯甲酸为防腐剂，从检测结果来看，部分企业苯甲酸用量已经超标，这对消费者的健康而言具有较大的威胁，尤其小儿清热止咳口服液是儿童药，对于免疫系统和排毒代谢能力较弱的儿童来说，过量的防腐剂会对自身健康造成更大的危害[11]。故生产企业在生产过程中不能只考虑产量、销量，应该把消费者的健康利益放在首位。

参考文献

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（收稿日期：2020-11-23 编辑：程鹏飞）