60%环嗪酮·敌草隆可湿性粉剂的高效液相色谱分析

孙新(江苏蓝丰生物化工股份有限公司，江苏 新沂 221400)

0 引言

60%环嗪酮•敌草隆可湿性粉剂是江苏蓝丰生物化工股份有限公司(以下称“我公司”)最近几年新开发的一种新型田间除草剂。该产品由环嗪酮(Hexazinone)敌草隆(Diuron)两种除草剂混配而成，具有高效、广谱、低残留的特点。经查阅相关资料，环嗪酮、敌草隆两种成分分别用气相色谱法和液相色谱方法分析，操作复杂，分析时间长，目前尚没有统一的两种组分同时测定的方法[1-2]。为了方便快捷的同时测出两种成分，经过多次反复的实验、验证对比，最后确定用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）可以同时测定该产品中两种组分的含量。该方法操作简单、易于掌握，而且分析时间短，分析成本低。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪(安捷伦-1260，带DAD二极管阵列检测器)，超声波振荡器；甲醇(HPLC级)，水(新蒸二次蒸馏水)；环嗪酮标准品 含量≥98.0%，敌草隆标准品 含量≥98.0%。

1.2 实验方法

1.2.1 标准品溶液、样品溶液的制备

准确称取环嗪酮0.013 0 g(精确至0.2 mg)左右的标准品和敌草隆0.047 0 g(精确至0.2 mg)左右的标准品，于一个50 mL容量瓶中，加入20 mL左右的甲醇，放入超声波振荡器中超声振荡5 min，取出冷却至室温，再甲醇定容至刻度，然后用5.00 mL的移液管移取5 mL该溶液于一个50 mL容量瓶中，用流动相稀释定容至刻度，摇匀备用[3]。

准确称取0.1 g左右(精确至0.2 mg)待测样品于一个50 mL容量瓶中，加入20 mL左右的甲醇，放入超声波振荡器中超声振荡5 mL，取出冷却至室温，再甲醇定容至刻度，然后用5.00 mL的移液管移取5 mL该溶液于一个50 mL容量瓶中，用流动相稀释定容至刻度，摇匀备用[4]。

1.2.2 色谱分析操作条件

色谱柱：Agilent SB-C18 150×4.60 mm 5 μm；柱温：35 ℃，检测波长：254 nm；流动相：甲醇+水＝60+40(V/V)，流速：1.0 mL/min。

1.2.3 测定

按上述色谱分析操作条件，待仪器稳定后，连续进几针标准品溶液，待相邻两针溶液中环嗪酮、敌草隆的峰面积响应值变化分别＜1.0%时，按标准溶液、样品溶液、样品溶液、标准溶液的顺序分别进样，分别记录相应的色谱图，并计算各个溶液中环嗪酮、敌草隆的峰面积，色谱图详如图1和图2所示。

图1 样品谱图峰1[前]为环嗪酮标准品谱图，峰2[后]为敌草隆标准品谱图

图2 标准品谱图

1.3 数据处理

出峰后分别用面积归一法计算各标准样品、待测样品中环嗪酮、敌草隆的峰面积，按下式计算60%环嗪酮·敌草隆可湿性粉剂中环嗪酮、敌草隆的质量百分含量：

式中：A2为待测样品溶液中环嗪酮或敌草隆的峰面积；A1为标准品溶液中环嗪酮或敌草隆的峰面积；M1为标准溶液中环嗪酮或敌草隆的质量(g)；M为样品的质量(g)；P为环嗪酮或敌草隆标准品的质量百分含量(%)。

2 结果与讨论

2.1 流动相及检测波长的选择

在分析过程中为了保证样品中环嗪酮、敌草隆及杂质能够完全分离，采用不同比例的甲醇+水，分别进行试验，最后确定以甲醇+水=60+40(v/v)作为流动相，流速1 mL /min，作为最佳分析的流动相比例及流速，既能保证定量分析要求的分离度，又能做到分析样品时快速的目的[5-6]。在波长选择时，分别对环嗪酮和敌草隆进行波长扫描，环嗪酮在258 nm处吸光度最大，敌草隆在245 nm处吸光度最大，综合考虑两个组分的吸光度，选择254 nm作为测定波长，在此波长下环嗪酮和敌草隆都有比较大的吸收，可以满足定量分析的要求[7]。

2.2 线性回归方程及相关系数的确定

分别准确称取敌草隆0.047 0 g、环嗪酮0.013 0 g于一个50 mL容量瓶中，加入20 mL 左右的甲醇溶解，放超声波中超声振荡5 min，取出冷却至室温，再用甲醇定容至刻度，然后用5 mL的移液管，分别移取该溶液5.00 mL 分别于10 mL、20 mL、50 mL、100 mL、500 mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，环嗪酮和敌草隆的浓度范围分别为0.5～0.01 g/L和0.13～0.002 6 g/L[8]，在上述色谱条件下分别进样，测量其峰面积，实验数据如表1所示。以峰面积为纵坐标，以进样质量为横坐标绘制标准工作曲线，如图3和图4所示。

表1 线性相关性测定数据

图3 环嗪酮标准曲线

根据实验数据及图3、图4确定方法的线性回归方程及相关系数分别为：环嗪酮线性回归方程：Y=2.01×106X-13 822；相关系数：0.999 9；敌草隆线性回归方程：Y=2.08×106X+154 881；相关系数：0.999 5。

图4 敌草隆标准曲线

2.3 方法的准确度与精密度

称取5个60%环嗪酮·敌草隆可湿性粉剂样品，按分析方法测得敌草隆平均含量为47.0%，计算出方法的标准偏差为0.052，变异系数为0.11%；测得环嗪酮平均含量为13.2%，计算出方法的标准偏差为0.07，变异系数为0.53%。

在已知含量的样品中分别加入不同质量的环嗪酮和敌草隆配成5个已知样，在相同色谱条件下进行测定并计算方法的回收率；环嗪酮和敌草隆的平均回收率分别为98.9%和99.6%，实验数据如表2所示。

表2 回收率实验数据

3 结语

从上述实验数据可以得出：该高效液相色谱法可以适用于60%环嗪酮·敌草隆可湿性粉剂样品的分析，分析结果准确，可信度高，线性好，分析时间短，宜用于该两项产品的质量控制。