HLA-DQB1和HLA-DRB1基因多态性与龋病相关性的系统评价与Meta分析

陈越，吴泽钰，貊燕丽，敬英豪，刘奕杉，3

1.新疆医科大学第一附属医院（附属口腔医院）儿童口腔科-口腔预防科，新疆维吾尔自治区 乌鲁木齐（830054）；2.新疆医科大学第一附属医院（附属口腔医院）牙体牙髓病科，新疆维吾尔自治区 乌鲁木齐（830054）；3.新疆维吾尔自治区口腔医学研究所，新疆维吾尔自治区 乌鲁木齐（830054）

龋病是以细菌为主的多因素作用下，牙体硬组织发生的慢性进行性破坏［1-2］。随着龋病病因学的深入研究，遗传因素在龋病病因学中的作用被逐渐重视，基因多态性与龋病相关性的研究也越来越多被报道。人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）主要包括高度多态性的HLAⅠ类和HLAⅡ类基因［3］。HLA超级基因座是染色体位置6p21的一个基因组区域，它编码6个经典的HLA基因和至少132个蛋白质编码基因，这些基因在免疫系统等调控中具有重要作用［4］。HLA-DR单倍型由多个编码和非编码HLA-DR基因的拷贝组成。高度多态性的DRB1等位基因存在于所有单倍型中［5］。人类基因组的这一小部分已与100多种不同疾病相关，如糖尿病、系统性红斑狼疮和各种其他自身免疫性疾病［6-7］。近年关于HLA与龋病相 关 性 的 研 究 被 广 泛 报 道［8-11］，Valarini等［12］对15～19岁学生进行了对比分析，按照DMFT>1和DMFT＝0进行分组：结果证实HLA基因与龋病的发生密切相关。但HLA-DQB1和HLA-DRB1基因多态性与龋病的相关性未能达成统一结论，笔者通过Meta分析探讨HLA-D基因多态性与龋病的相关性，为龋病的早期预防提供理论依据及数据支持。

1 资料和方法

1.1 注册

使用系统综述和荟萃分析首选报告条目（preferred reporting items for systematic reviews and metaanalyses，PRISMA）检查表作为指南。本Meta分析在国际前瞻性系统综述登记研究PROSPERO数据库中登记。登记编号：CRD42021224938，https：//www.crd.york.ac.uk/prospero/display_record.php?ID＝CRD42021224938。

1.2 检索策略

检索截至2020年12月之前发表在英文电子数据库（Cochrane Library、Embase、PubMed、Scopus和Web of science）及中文电子数据库（知网、万方、维普和中国生物医学文献数据库）中的文献。使用“Dental Caries”和“HLA-D Antigens”为检索词，在PubMed中检索Mesh主题词，以Mesh主题词+自由词检索方式进行检索。对性别、年龄和研究人群的语言、种族和地区没有限制。同时对检索到的文章的参考文献进行交叉检索，以避免遗漏任何研究。

1.3 纳入标准

1.3.1 研究对象 病例组人群为DMFT≥1，临床诊断为龋病的患者。对照组为DMFT＝0的健康人群。

1.3.2 暴露因素 HLA-DQB1和HLA-DRB1等位基因多态性。

1.3.3 结局指标 龋病的发病风险。

1.3.4 研究类型 HLA-DQB1和HLA-DRB1基因多态性与龋病相关性的病例-对照研究。

1.4 排除标准

①未使用DMFT＝0的健康人群作为对照组的文献；②病例组患者除有龋病外，还有糖尿病等其他慢性疾病史；③数据不充分的研究；④重复发表的文章；⑤基础科学或动物研究；⑥综述、病例报告和病例系列、会议摘要、给编辑的信函以及定性研究。

1.5 文献筛选、资料提取和偏倚风险评估

根据文献纳入和排除标准，在选择文献时，隐去对筛选者可能产生影响的文章信息（期刊名、作者、作者单位、发表年份、资金资助情况），并且由2名研究者采用盲法独立进行。若存在分歧，进行复核，并请专家评议。从纳入的每篇文献中提取以下信息：第一作者的姓名、发表文章的日期、国家、检测样本类型、种族、年龄、HLA-DQB1和HLADRB1基因分型和等位基因的频率、研究的等位基因数量、基因检测方法及病例组和对照组的样本量。根据Newcastle–Ottowa量表评估偏倚风险，由2名研究者使用相同的标准对纳入的每篇文献进行打分。

1.6 统计学分析

使用R 4.0.2软件对提取的数据进行合并。通过Z检验测定了ORs值和95%CIs，以评价HLADQB1和HLA-DRB1等位基因与龋病风险的相关性。通过Cochran Q检验和I2检验检查研究间的异质性。I2取值越大，异质性越大。当I2<50%时，选用固定效应模型计算ORs值和95%CIs；当I2>50%时，选用随机效应模型合并效应量以减小部分异质性对结果的影响。按不同国家进行亚组分析以探讨异质性来源。测量漏斗图不对称的大小，以评估发表偏倚。采用敏感性分析评价结果的稳定性。

2 结果

2.1 文献筛选流程及结果

初检得到52篇文献，经过筛选，最终有10篇纳入本篇Meta分析。筛选流程见图1。

Figure 1 Literature screening procedure and results图1 文献筛选流程及结果

2.2 纳入研究的基本特征及偏倚风险评价

各研究的基本信息如表1所示。10项研究中，7项采集唾液进行检测，仅3项采集血液进行检测。除此之外，所有研究均采用WHO标准，即dmft/DMFT记录口腔情况，并进行分组。

表1 纳入研究的基本特征Table 1 Characteristics of the studies in the meta-analysis

2.3 Meta分析的结果

2.3.1 HLA-DQB1等位基因家族多态性与龋病关系的Meta分析结果 纳入的研究中，确定了5个HLA-DQB1等位基因（HLA-DQB1*02、HLA-DQB1*03、HLA-DQB1*04、HLA-DQB1*05和HLA-DQB1*06）与龋病的相关性（表2）。结果显示仅HLADQB1*02（OR＝0.52，95%CI＝0.29～0.93，P＝0.03）差异有统计学意义，是龋保护因素（图2）。

表2 HLA基因多态性与龋病相关性的Meta分析结果Table 2 Meta-analysis of the correlation between HLA gene polymorphisms and dental caries

Figure 2 Forest plot of the correlation between HLA-DQB1*02 and caries图2 HLA-DQB1*02与龋病相关性的森林图

2.3.2 HLA-DRB1等位基因家族多态性与龋病关系的Meta分析结果 共对13个HLA-DRB1等位基因进行了分析，探讨多态性与龋病之间的相关性（表2）。以下7个等位基因与龋病的相关性无统计学意义：HLA-DRB1*01、HLA-DRB1*03、HLADRB1*04、HLA-DRB1*08、HLA-DRB1*10、HLADRB1*12、HLA-DRB1*15和HLA-DRB1*16。仅观察 到HLA-DRB1*09（OR＝0.34，95%CI＝0.21～0.58，P<0.001）是龋保护因素（图3）。相反，HLADRB1*13（OR＝2.96，95%CI＝2.03～4.33，P<0.001）和HLA-DRB1*14（OR＝2.01，95%CI＝1.36～2.97，P<0.001）增加龋病发病风险（图4、图5），是龋易感因素。HLA-DRB1*07亚组分析结果显示：在中国人群中是龋保护因素；HLA-DRB1*11亚组分析结果显示：在唾液组中为龋易感因素。

Figure 3 Forest plot of the correlation between HLA-DRB1*09 and caries图3 HLA-DRB1*09与龋病相关性的森林图

Figure 4 Forest plot of the correlation between HLA-DRB1*13 and caries图4 HLA-DRB1*13与龋病相关性的森林图

Figure 5 Forest plot of the correlation between HLA-DRB1*14 and caries图5 HLA-DRB1*14与龋病相关性的森林图

2.3.3 亚组分析 对HLA-DRB1*07和HLA-DRB1*11进行亚组分析，分析结果显示HLA-DRB1*07在中国人群中是龋保护因素（图6）；HLA-DRB1*11在唾液组中为龋易感因素（图7）。

2.4 敏感性分析与发表偏移

Figure 6 Forest plot of the correlation between HLA-DRB1*07 and caries in populations from different countries图6不同国家人群中HLA-DRB1*07与龋病相关性的森林图

Figure 7 Forest plot of the correlation between HLA-DRB1*11 and caries in different samples图7 不同样本中HLA-DRB1*11与龋病相关性的森林图

在分析HLA-DRB1*04多态性与龋病的相关性时，在排除张瑞涵等［16］的研究后，异质性从54%下降到20%（图8），合并ORs未发生实质性变化，表明结果具有统计学稳健性。在分析HLA-DQB1*02多态性与龋病的相关性时，在排除Bagherian等［9］的研究后，异质性从59%下降到0%（图9）。漏斗图的形状在所有基因中基本对称（以HLA-DRB1*04为例，图10），表明本次Meta分析结果的发表偏倚较低。

Figure 8 Sensitivity analysis of the correlation between HLA-DRB1*04 and dental caries图8 HLA-DRB1*04与龋病相关性的敏感性分析

3 讨论

随着经济的发展，龋病发生率逐年升高［18］，在拉美、中东和东南亚国家最常见［19］。龋病的发生除了四联因素以外，遗传和环境因素也起到共同作用［20］。多种基因与龋病相关性的研究已被报道，Sharifi等［21］通过Meta分析证实釉蛋白（ENAM）rs3796704的G等位基因和GG基因型与龋病风险增加相关。龋病相关的HLA区域有HLA-DQB1和HLA-DRB1位点，目前已发表的HLA-DQB1、HLADRB1等位基因家族多态性与龋病之间相关性的研究结果并不一致。Bagherian等［9］研究发现HLADRB1*04是龋保护因素；Yildiz等［15］研究表明龋病患者的HLA-DRB1*04和HLA-DRB1*07等位基因频率显著高于无龋组；张瑞涵等［16］报道龋病患者的HLA-DRB1*04和HLA-DRB1*07等位基因频率均显著低于无龋组。本研究通过Meta分析评估了HLA-DQB1和HLA-DRB1与龋病的相关性。

Figure 9 Sensitivity analysis of the correlation between HLA-DQB1*02 and dental caries图9 HLA-DQB1*02与龋病相关性的敏感性分析

Figure 10 Funnel plot of the correlation analysis between HLA-DRB1*04 and dental caries图10 HLA-DRB1*04与龋病相关性分析的漏斗图

在18个特异性等位基因中，HLA-DRB1*13和HLA-DRB1*14等位基因是龋易感因素；HLADQB1*02和HLA-DRB1*09则是龋保护因素，该结果与所纳入研究结果一致。

HLA-DQB1*02等位基因异质性过高，敏感性分析排除Bagherian等［9］的文献后，I2＝0%；发现Bagherian等［9］与Fahad等［8］的结论恰好相反，出现这种情况的原因可能与样本的采集方法及样本的分类有关，Bagherian等［9］采集的是血液样本，而Fahad等［8］采集的是唾液样本。

结论有争议的等位基因包括HLA-DRB1*04、HLA-DRB1*07和HLA-DRB1*11。对于HLADRB1*04，张瑞涵等［16］、Bagherian等［9］及Fahad等［8］认为其是龋保护因素；而Yildiz等［15］和郭冉等［10］认为其是龋易感因素；余下纳入研究均认为其与龋病无相关性；经Meta分析（病例组459例和对照组561例）发现差异没有统计学意义，进行敏感性分析排除张瑞涵等［16］的研究后，合并ORs为1.48（1.00，2.18），P＝0.008。HLA-DRB1*04与龋病无相关性，分析原因，除遗传因素外，龋病的发生、发展还依赖于其他的因素，如牙齿解剖结构、饮食和整体健康状况以及所处地域医疗环境等；目前尚需更多的研究来阐明两者间的关系。

对于HLA-DRB1*07，共纳入6篇文献，张瑞涵等［16］报导其为龋保护因素，而Yildiz等［15］报导其在土耳其人群中是龋易感因素；经Meta分析（病例组314例和对照组483例）发现并没有统计学意义（I2＝56%，P＝0.4）。按照研究人群所处国家进行亚组分析发现差异具有统计学意义（I2＝47%，P＝0.04）；提示地域差异性可能是异质性的来源。

对于HLA-DRB1*11，共纳入4篇文献，经Meta分析发现差异并没有统计学意义（I2＝85%，P＝0.4）。根据采集样本的不同进行亚组分析，在唾液组样本中HLA-DRB1*11是龋保护因素（I2＝0%，P<0.001），而在血液组样本HLA-DRB1*11是龋易感因素。分析差异原因，对于样本采集，目前尚无统一的标准，无法排除采样时的混杂因素；其次血液组样本量过少（病例组16例，对照组49例），结果仅具有参考性。后期应扩大样本量进行分析，进一步验证所得结果。

本研究局限性在于：纳入人群的年龄范围较大，同时包括了乳牙列、混合牙列及恒牙列，可能存在混杂偏移；生活、饮食习惯对龋病的发生也有一定的影响，HLA基因多态性与龋病之间的关系还需高质量的研究来进一步验证。本文的优势在于：纳入的10篇文献NOS评分均为6～8分，属于高质量文献，一定程度上减小了发表偏移；本篇Meta分析从样本的种类、种族、地域等方面对HLADQB1和HLA-DRB1基因多态性与龋病相关性进行分析，为龋病的预防提供依据。

综上，本Meta分析研究结果显示，HLA-DRB1*13和HLA-DRB1*14等位基因是龋易感因素，HLADQB1*02和HLA-DRB1*09是龋保护因素。

【Author contributions】 Chen Y，Wu ZY analyzed the data and wrote the article；Mo YL，Jing YH assisted in the data analysis，Liu YS revised the article.All authors read and approved the final manuscript as submitted.