阳光玫瑰葡萄组培快繁技术

孙知雨

（华南师范大学生命科学学院，广东 广州 510631）

阳光玫瑰葡萄属欧美杂交种，但具有典型的欧亚种特性。该品种果穗呈圆锥形，果穗质量600 g左右，大穗可达1 800 g，平均单果质量8～12 g；果粒着生紧密，呈椭圆形，黄绿色，果面有光泽，果粉少；果肉鲜脆多汁，有玫瑰香味，可溶性固形物含量在20%左右，最高可达26%；鲜食品质极优，是目前市场上最受欢迎的葡萄品种之一［1］。为了进行优良阳光玫瑰葡萄果苗的快速繁育，并保持该品种的优良特征，宜采用组织培养方式进行繁殖。对葡萄进行组织培养的研究已多有报道［2-10］，但是关于阳光玫瑰葡萄组织培养的论文仅有1篇［11］。为了解影响阳光玫瑰组织培养效果的条件，此试验对阳光玫瑰葡萄的组织培养和快速繁殖技术进行研究，为阳光玫瑰葡萄的快速繁殖提供参考。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料

试验材料选取阳光玫瑰葡萄春季萌发的10 cm长的茎段，在室内去掉叶片，流水冲洗30 min，去掉顶梢最嫩的一段，剪成带1个芽的茎段。将茎段放在超净工作台上，先用70%的酒精浸泡60 s，然后用0.1%氧化汞消毒9 min，再用无菌水涮洗3次，每次5 min。在无菌接种盘或者无菌培养皿上，切掉葡萄带芽茎段两端，然后将茎段接种在启动培养基上。

1.2 启动培养

B5为葡萄外植体芽诱导的基本培养基，培养基中添加植物生长调节剂6-BA和NAA。6-BA的浓度分为4个梯度，分别为0.5 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L和2.0 mg/L，NAA的浓度为0.5 mg/L。此次试验接种30瓶，每瓶1个外植体，设3次重复。外植体生长30 d，调查统计葡萄无菌芽的诱导成功率。

1.3 增殖培养

将诱导成功的葡萄组培苗在用无菌操作条件下切下，接种到预先配制好的增殖培养基上。增殖培养的基本培养基与启动培养的基本培养基相同，6-BA的浓度分为4个梯度，从0.5 mg/L到2.0 mg/L，按照每个梯度增加0.5 mg/L设置，植物生长调节剂IBA的浓度选择0.3 mg/L和0.5 mg/L。接种20瓶，每瓶4株苗，3次重复。生长30 d，调查统计组培苗的平均增殖系数和平均株高，筛选出适合组培苗增殖的6-BA与IBA浓度组合。

1.4 生根培养

将增殖培养基上生长30 d的组培苗，接种到生根培养基上。生根培养基选用1/2B5，IBA浓度设置3个梯度水平（从0.5 mg/L到1.5 mg/L，按照每个梯度增加0.5 mg/L设置），NAA浓度设置3个浓度（从0.1 mg/L到0.3 mg/L）。每处理接种20瓶，每瓶4株，3次重复。生长28 d，调查统计平均每株组培苗的生根数、平均根长和平均生根率，筛选出适合组培苗生根的IBA与NAA浓度组合。

1.5 培养条件

启动培养和增殖培养的培养基均添加白砂糖30 g/L，生根培养基添加白砂糖20 g/L，每升培养基添加琼脂粉6.5 g，培养基pH值调整为6.5。组培苗室的室内温度控制在（25±1）℃，光照时间每天14 h，光照强度为培养架正常两根日光灯管（距离组培瓶40 cm）。

2 结果与分析

2.1 启动培养

在葡萄组培苗诱导过程中，茎段基部先形成愈伤组织，然后腋芽开始萌发，一般15 d可以看到外植体芽长到1 cm左右，25 d外植体芽长到3 cm长，并且整个外植体没有细菌和霉菌污染，就确定为外植体芽诱导成功。从表1可看出，随着植物生长调节剂6-BA浓度的不断升高，芽的诱导率先升高后下降；葡萄成芽率最高为76.7%，此时6-BA的浓度为1.5 mg/L。在6-BA浓度为2.0 mg/L时，茎段基部愈伤组织增多，影响芽的诱导。根据实验结果，筛选出最佳培养基及植物生长调节剂配比为B5+6-BA（1.5 mg/L）+NAA（0.5mg/L）。

表1 葡萄阳光玫瑰的启动培养

2.2 增殖培养

从表2可看出，将经过启动培养的芽接种到增殖培养基上，当IBA浓度为0.3 mg/L时，随着6-BA浓度的升高，阳光玫瑰葡萄的增殖系数不断升高，平均株高先降低后升高再降低；当IBA浓度为0.5 mg/L时，随着6-BA浓度的升高，阳光玫瑰葡萄的增殖系数先升高后降低，平均株高先升高后降低。当6-BA相同时，除了6-BA浓度为2.0 mg/L时，植物生长调节剂IBA浓度为0.3 mg/L的增殖系数高于IBA浓度为0.5 mg/L的增殖系数，其余均为IBA浓度为0.5 mg/L的增殖系数高于IBA浓度为0.3 mg/L的增殖系数。

表2 阳光玫瑰葡萄的增殖培养

2.3 生根培养

在增殖培养基上生长的丛生芽长到3 cm以上时，可以转接到葡萄生根培养基上。葡萄组培苗在生根培养基中10 d有根眼出现，20 d根可长到2 cm左右，根数2～4条。由表3可看出，在IBA相同浓度下，随着NAA浓度的升高，葡萄组培苗的平均生根条数、生根率和平均根长均呈现不断升高趋势；在NAA相同浓度下，随着IBA浓度的不断升高，平均生根条数呈现先升高后降低，平均根长表现为先升高后降低；NAA浓度为0.1 mg/L和0.2 mg/L时，随IBA浓度的不断升高，生根率呈现为不断升高；NAA浓度为0.3 mg/L时，随IBA浓度的升高，生根率呈现为先升高后下降。根据实验结果，1/2B5+IBA（1.0mg/L）+NAA（0.3mg/L）的培养基最适合阳光玫瑰葡萄生根，生根率达到96.5%。

表3 阳光玫瑰葡萄的生根培养

3 结语

通过对阳光玫瑰葡萄当年生茎段进行组培快繁试验发现，最佳外植体芽的诱导培养基为B5添加6-BA（1.5 mg/L）和NAA（0.5 mg/L），最适合的增殖培养基为B5添加植物生长调节剂6-BA（1.5 mg/L）和IBA（0.5 mg/L），最适合的生根培养基为B5添加植物生长调节剂IBA（1.0 mg/L）和NAA（0.3 mg/L）。