黄芪多糖联合新辅助化疗与新辅助化疗对结直肠癌患者血清外泌体表达水平影响的对比研究

赵媛媛 张楠 孙维义 郅强 杨世发

1)河南中医药大学 郑州 450003 2)河南中医药大学第一附属医院微创腔镜外科 郑州 450046

近年来，我国结直肠癌的发病率和病死率均呈上升趋势[1]。手术、化疗、中医药等多学科综合治疗可提高临床效果。黄芪多糖是豆科植物黄芪的主要活性成分，可通过多种机制诱导肿瘤细胞凋亡、增加免疫功能调节，具有广谱抗肿瘤及增加患者免疫功能等作用[2-3]。外泌体在结直肠癌患者循环血清和HCT-116、SW480等肿瘤细胞株中表达水平均显著增高[4-7]。外泌体标志性蛋白(CD63、TGF-β1)在外泌体蛋白表达谱中高表达[8]，联合CEA等肿瘤标记物检测能为结直肠癌的诊断、预后评估提供有价值的参考。基于此，我们开展了本项小样本前瞻性研究，以初步探讨黄芪多糖联合新辅助化疗与新辅助化疗对结直肠癌患者血清肿瘤标记物水平和外泌体表达水平的影响。

1 资料与方法

1.1一般资料本研究为小样本前瞻性预实验研究。经我院伦理委员会审批，纳入2019-01—2020-01于我院微创腔镜外科收治的结直肠癌患者。纳入标准：(1)均经结肠镜病理学检查确诊为结直肠癌。(2)符合腹腔镜结直肠癌根治术及新辅助化疗的指征[9]。排除标准：(1)临床资料不全和存在严重心、脑、肺系统疾病者。(2)黄芪多糖过敏、有其他肿瘤手术史，以及严重精神疾病患者。(3)患者均签署知情同意书。根据新辅助化疗方法分为黄芪多糖联合新辅助化疗组(观察组)和单纯新辅助化疗组(对照组)。

1.2治疗方法新辅助化疗(FOLFOX6方案)：第1天静脉滴注奥沙利铂85 mg/m2，持续2 h。第1～5天静脉滴注亚叶酸钙200 mg/m2，至少持续2 h；静脉滴注5-氟尿嘧啶400 mg/m2，至少持续6 h。黄芪多糖(批号：Z20040086，天津赛诺制药有限公司)：黄芪多糖250 mg加入0.9%氯化钠注射液500 mL中混匀，静脉滴注，至少持续2.5 h。1次/d，连续用药7 d。停药后实施腹腔镜结直肠癌根治术。

1.3观察指标化疗前1 d及术后第7天分别采集患者的空腹静脉血。由我院临床检验科检验血清肿瘤标记物CEA、CA19-9、CA125水平和WBC计数，以及血清CD63、TGF-β1表达水平。

2 结果

2.1基线资料研究周期内共纳入符合标准的患者40例，每组20例。2组患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤分期差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 2组患者的基线资料比较

2.2血清肿瘤标记物水平及WBC计数化疗前1 d 2组患者的血清CEA、CA19-9、CA125水平，以及WBC计数差异均无统计学意义(P>0.05)。术后第7天，2组患者的血清CEA、CA19-9、CA125水平均显著下降，其中观察组的水平低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组WBC计数较化疗前无明显下降，而对照组显著下降，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 2组患者肿瘤标记物及WBC水平比较

2.3外泌体蛋白表达比较化疗前1 d，2组患者血清CD63和TGF-β1表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。术后第7天，2组患者血清CD63和TGF-β1水平均显著下降，且观察组水平显著低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 2组患者血清CD63和TGF-β1表达水平

3 讨论

黄芪多糖是豆科植物黄芪的主要活性成分，在抗氧化、抗应激、抗衰老、抗病毒、抗肿瘤方面均具有重要作用[10]，尤其是多重抗肿瘤作用效果备受关注。黄芪多糖能通过促进固有免疫、适应性免疫杀伤肿瘤改变肿瘤微环境。外泌体作为细胞间通讯介质在肿瘤微环境中发挥重要作用，是促进肿瘤发生和转移的重要信使。外泌体标志性蛋白CD63和TGF-β1作为液体活检在肿瘤诊断和治疗方面具有重要价值[11-12]。本研究结果显示，黄芪多糖联合新辅助化疗可以降低结直肠癌患者血清CEA、CA19-9、CA125水平，以及外泌体标志性蛋白CD63和TGF-β1表达水平，而且WBC计数下降不明显。表明黄芪多糖可以有效抑制外泌体分泌、改善患者机体免疫功能和减少细胞毒性。

外泌体在肿瘤细胞与肿瘤微环境动态平衡中发挥重要作用，通过促进肿瘤免疫逃逸、肿瘤组织新生血管生成、肿瘤细胞上皮间充质转化等方式增强肿瘤细胞的恶性进展和转移[13]。最近有研究显示[14-15]，外泌体能够促进静息成纤维细胞活化呈肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)，CAFs是肿瘤微环境中最主要的间质细胞，在肿瘤发展的不同阶段均发挥着重要作用。而TGF-β1也能促进正常成纤维细胞向肿瘤相关成纤维细胞转化。同时CAFs也能分泌外泌体作用于恶性肿瘤细胞，影响恶性肿瘤转移[16]。肿瘤细胞、成纤维细胞、基质细胞等可以分泌外泌体，而这些外泌体可以调节肿瘤的增殖和转移；同时外泌体分泌的双链脱氧核糖核酸激活机体炎症反应，导致患者出现化疗耐药和一系列相关的副反应[17]。故外泌体分泌抑制可以改善化疗副反应。本研究结果显示，黄芪多糖联合新辅助化疗可以使血清CD63和TGF-β1表达水平显著下降，表明黄芪多糖可以有效抑制外泌体分泌，其抗肿瘤作用与抑制外泌体分泌密切相关。

骨髓抑制和胃肠道反应是新辅助化疗常见的毒副反应，可严重影响患者的生活质量及预后。张明明等[18]给予胃癌术后患者应用黄芪多糖治疗，可改善患者的WBC计数及血清CRP、PCT、IL-10炎性因子表达水平。本研究将黄芪多糖联合新辅助化疗用于结直肠癌患者，其效果与之相符，亦提示黄芪多糖在抗肿瘤的同时，可减轻化疗所致的骨髓抑制反应，优化患者后期康复。

综上所述，黄芪多糖联合新辅助化疗可有效降低结直肠癌患者血清外泌体分泌水平，增强免疫功能，减轻化疗的毒性反应。但该结论尚需大样本量的前瞻性随机对照研究予以证实。