HPLC 法同时测定杏苏止咳糖浆中5种成分

李 运 白贺明 邱国玉 石晓峰 戴 忠

（1.兰州市食品药品检验检测研究院／甘肃省种植中药材外源性污染物监测工程研究中心，甘肃 兰州730000； 2.甘肃省医学科学研究院，甘肃 兰州730050； 3.中国食品药品检定研究院，北京100050）

杏苏止咳糖浆具有宣肺散寒、止咳祛痰之功效，用于治疗风寒感冒咳嗽、气逆等［1］。方中苦杏仁润肺化痰，降气止咳，紫苏叶疏风散寒，解表宣肺，一升一降，以恢复肺的宣发肃降功能，共为君药；前胡降气止咳、疏散肺热，桔梗宣肺化痰，共为臣药；陈皮理气化痰，为佐药；甘草调和诸药，为使药，全方共奏宣肺化痰、降气止咳之效。

中药复方制剂在质量控制方面大多采用中药整体控制模式［2⁃3］，常遴选处方中一种或几种药材中的主成分作为指标建立其定性定量检测方法［4⁃9］，但2020年版《中国药典》 一部仅针对杏苏止咳糖浆中的橙皮苷含量进行控制，另外张世勇等［10］建立HPLC 法测定其中苦杏仁苷含量；蒋亚南等［11］对其中甘草苷、橙皮苷、甘草酸的含量进行分析。近年来，前胡受生长环境、田间管理等因素的影响，存在品质下降问题，因此，本实验采用HPLC法同时测定杏苏止咳糖浆中苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量测定方法，以期为更好地控制该制剂质量提供参考。

1 材料

1.1 仪器 Waters e2695 高效液相色谱仪，配置四元泵、2998 PDA 检测器、自动进样器、Empower 工作站（美国Waters 公司）；SBL⁃10DT超声波恒温清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；5424型高速离心机（德国艾本德公司）；GM⁃1.0A型隔膜真空泵（天津市津腾实验设备有限公司）；Milli⁃Q IQ7000型超纯水机（美国默克密理博公司）；XSE205DU型电子天平（瑞士梅特勒⁃托利多公司）。

1.2 试剂与药物 苦杏仁苷（批号110820⁃201506，纯 度93.4%）、甘草苷（批号111610⁃201106，纯度93.7%）、甘草酸铵（批号110731⁃201619，纯度93.0%）、白花前胡甲素（批号111711⁃200602，纯度100%）、白花前胡乙素（批号111904⁃201804，纯度98.9%）对照品均由中国食品药品检定研究院提供。杏苏止咳糖浆共10 批（其中Y1 厂家3 批，编号为Y1⁃1、Y1⁃2、Y1⁃3；Y2～Y8 厂家产品各1 批，分别编号为Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y8）。乙腈、甲醇均为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水自制超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 CAPCELL PAK C18MG 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相水（含0.05%磷酸）（A）⁃乙腈（B），梯度洗脱（0～15 min，92%～90% A；15～20 min，90%～85% A；20～35 min，85%～80% A；35～44 min，80%～70% A；44～53 min，70%～25%A；53～66 min，25%～8%A；66～67 min，8%～92% A；67～70 min，92%A）；体积流量1.0 mL／min；检测波长210 nm（0～21 min，苦杏仁苷）、237 nm（21～53 min，甘草苷、甘草酸）、321 nm（53～70 min，白花前胡甲素）；柱温30 ℃；进样量10 μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸铵、白花前胡甲素对照品适量，置于10 mL量瓶中，甲醇溶解并定容，即得（苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸铵、白花前胡甲素、白花前胡乙素质量浓度分别为1.493、1.383、1.576、1.492、1.152 mg／mL），4 ℃下保存备用。

2.2.2 供试品溶液 精密量取糖浆2.00 mL，置于10 mL 量瓶中，精密加入80%甲醇4 mL，超声（40 kHz、300 W）提取5 min，取出，放冷至室温，80%甲醇定容至刻度，摇匀，5 000 r／min 离心10 min，取上清液，经0.22 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液 按照处方工艺，分别制得缺苦杏仁、缺甘草、缺前胡的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验 取“2.2”项下对照品、供试品、阴性样品溶液各10 μL，在“2.1”项色谱条件下进样测定，结果见图1。由此可知，各成分分离度理想，阴性无干扰，表明该方法专属性良好。

图1 各成分HPLC 色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of various constituents

2.3.2 线性关系考察 精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液适量，置于10 mL 棕色量瓶中，甲醇稀释定容，摇匀，制备成系列质量浓度，在“2.1”项色谱条件下进样10 μL 测定。以对照品质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行回归，结果见表1，可知各成分在各自范围内线性关系良好。

表1 各成分线性关系Tab.1 Linear relationships of various constituents

2.3.3 精密度试验 取“2.3.2”项下对照品溶液（苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡乙素质量浓度分别为149.3、34.99、39.22、19.99、14.75 μg／mL），按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定6 次，测得苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡乙素峰面积RSD分别为2.3%、2.3%、2.2%、2.3%、2.2%，表明仪器精密度良好。

2.3.4 重复性试验 取同一批糖浆（编号Y1⁃1），按“2.2.2”项下方法平行制备6 份供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，测得苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡乙素含量RSD分别为0.36%、1.20%、1.51%、0.75%、1.96%，表明该方法重复性良好。

2.3.5 稳定性试验 取同一批糖浆（编号Y1⁃1），按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，于0、4、8、12 h 在“2.1”项色谱条件下进样测定，测得苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡乙素峰面积RSD分别为0.31%、0.44%、0.43%、1.83%、2.05%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.3.6 加样回收率试验 精密量取各成分含量已知（苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡 乙素分别为0.980、0.580、0.735、0.120、0.007 mg／mL）的同一批糖浆（编号Y1⁃1）1.00 mL，共6 份，按“2.2.2”项下方法平行制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，计算回收率，结果见表2。

表2 各成分加样回收率试验结果（n＝6）Tab.2 Results of recovery tests for various constituents（n＝6）

2.4 样品含量测定 取10 批糖浆，每批2 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，外标法计算含量，结果见表3。

表3 各成分含量测定结果（mg／mL， n＝2）Tab.3 Results of content determination of various constituents（mg／mL， n＝2）

3 讨论

3.1 色谱条件优化

3.1.1 流动相 本实验考察了不同比例甲醇⁃水［12⁃13］、甲醇⁃水（含磷 酸）［14］、乙腈⁃水（含磷酸）［15］对各成分的分离效果，发现以乙腈⁃水（含0.05%磷酸）为流动相时基线平稳，相邻峰达到基线分离，峰形较好。

3.1.2 检测波长 本实验采用二极管阵列检测器对各成分进行全波长扫描，发现苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡乙素最佳检测波长分别为207、237、321 nm，故采用波长分段切换法，进行含量测定，此时灵敏度较好，干扰较弱。

3.2 含量分析 同一厂家不同批杏苏止咳糖浆中各成分含量较接近，但不同厂家差异较大，仅Y1中同时检测出白花前胡甲素、白花前胡乙素，Y7中均未检测到两者，其余厂家仅检出白花前胡甲素，间接反映了方中前胡投料情况。因此，对杏苏止咳糖浆质量的整体控制方法亟待进一步完善，从而为临床用药安全提供保证。

4 结论

本实验建立HPLC 法同时测定杏苏止咳糖浆中苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量，该方法简便准确，重复性、稳定性良好，可用于该制剂的质量控制。