羊红膻二氯甲烷部位的化学成分研究

郝晶晶，张府君，甄会贤，冯 贞

（1.山西药科职业学院，山西 太原030031；2.山西省食品药品检验所，山西 太原030006）

羊红膻是双子叶植物药伞形科茴芹属植物缺刻叶茴芹的根或全草，为多年生草本植物。别名羊洪膻、六月寒［1］。产地分布在东北、陕西、内蒙古、河北、山西、台湾、广东、山东等地。夏秋季采集，洗净，切段，晒干备用或鲜用。药理研究表明其具有降压、降低心肌耗氧量，增加心、脑、肾血流量，预防外源性甘油三酯升高的作用，并且有显著增强体力的功效［2］。临床观察中也发现羊红膻对治疗慢性气管炎及克山病有良好疗效，并且在心电图上也有一定的改善［3］。本文对羊红膻二氯甲烷部分进行化学成分研究。

1 试剂与器材

1.1 试剂

二氯甲烷（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；硫酸、甲醇、二氯甲烷、石油醚（60-90）、乙酸乙酯、甲酸、冰乙酸、盐酸及氢氧化钠均为AR。

1.2 药材

羊红膻药材的药用部位为全草或根，本实验对羊红膻全草进行研究，采购于陕西省黄安县，经由山西药科职业学院杨红教授鉴定为羊红膻药材。

1.3 材料

AB－8大孔吸附树脂（批号：HG 2-885-76，天津市光复精细化工研究所），80～100目硅胶（青岛海洋化工厂分厂），200～300目硅胶（青岛邦凯高新技术材料有限公司），硅胶G板（30×100 mm，50×100 mm，100×100 mm，青岛海洋化工厂分厂），Sephadex LH-20凝胶（GE Healthcare）。

1.4 仪器设备

分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司），旋转蒸发仪（SY-5000，上海亚荣生化仪器厂），循环水式真空泵（SHZ-D（Ⅲ），巩义市予华仪器有限责任公司），层析柱（24 mm×670 mm，10 mm×200 mm，20 mm×350 mm），超声波清洗机（SB-5200 DTDN，宁波新芝生物科技股份有限公司），点样毛细管（0.3 mm，长城科学仪器商店经销）。

2 方法

2.1 馏分的制备

羊红膻药材阴干，粉碎成粗粉，称取药材5 kg，加60%乙醇，浸泡12小时，加热回流提取，浓缩得浸膏1 401 g。分别用石油醚、二氯甲烷、水饱和正丁醇对混悬液依次进行萃取，萃取至无色，回收有机溶剂，得到二氯甲烷部位A 43 g，石油醚部位B 32 g，正丁醇部位C 65 g。A部位用少量二氯甲烷溶解，进行硅胶柱层析，用二氯甲烷、二氯甲烷：甲醇（100∶1、80∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1）依次梯度洗脱。每500 mL（柱体积1 800 mL）收集一份馏分，流速3～5 mL／min，浓缩之后装到10 mL西林瓶内。

2.2 大孔树脂吸附法100∶1馏分除色素

将50 mm×500 mm层析柱洗净、干燥，垂直固定在铁架台上；AB-8大孔树脂用无水乙醇浸泡约24 h后装柱，用80%乙醇冲至树脂表面平整后，使洗脱剂液面降低至高于树脂表面1～2 cm处；用80%乙醇溶解样品，用滴管缓慢加入，附在柱壁上的使用80%乙醇沿壁缓慢冲洗；待样品吸附2～3 h后，用80%乙醇洗脱，待所接溶液泛绿时停止操作，回收乙醇。

2.3 化合物的分离与精制

用薄层色谱进行跟踪检测，显色剂为10%硫酸-乙醇，显色后根据馏分的斑点情况，合并相近馏分。本实验选择合并馏分100∶1中11～17进行进一步纯化分离。取层析柱（24 mm×670 mm），将硅胶湿法装柱，样品拌样，上样，以二氯甲烷：乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱。通过反复硅胶柱层析、凝胶柱层析分离得到化合物Ⅰ和化合物Ⅱ。

2.4 化合物Ⅰ和化合物Ⅱ的流程图（图1）：

图1 羊红膻二氯甲烷部分提取分离纯化流程图

3 结果

3.1 化合物Ⅰ的检识及鉴定

3.1.1 化合物Ⅰ的薄层鉴别 三种展开剂系统下（二氯甲烷∶乙酸乙酯 ＝1∶1；石油醚∶乙酸乙酯 ＝1∶1；二氯甲烷∶甲醇＝80∶1；显色剂：10%硫酸－乙醇）化合物均为一个黄色斑点。

3.1.2 化合物Ⅰ的鉴定 化合物Ⅰ：无色液体，极易溶于二氯甲烷，微溶于甲醇，10%硫酸－乙醇（95%）显色后呈黄色斑点。1H NMR（600 MHz，CD2Cl2）：δ7.16（d，J＝8.4 Hz，2H，C2，6－H），6.79（d，J＝8.4 Hz，2H，C3，5－H），4.11（d，J＝4.9 Hz，1H，C1′－H），3.91（m，1H，C2′－H），3.39（dd，J＝9.4，7.1 Hz，2H，C1″－H），1.17（t，J＝7.0 Hz，3H，C2″－H），1.08（d，J＝6.4 Hz，3H，C3′－H），7.288（宽短峰，Ar－OH），13 C NMR（151 MHz，CD2Cl2）δ156.28（C1），129.48（C2，6），115.58（C3，5），130.96（C4），85.58（C1′），71.28（C2′），64.84（C1″），18.44（C3′），15.52（C2″）经碳谱和氢谱综合分析，并参考文献确定化合物为4-（1′-乙氧基-2′-羟基丙基）苯酚（结构式见图2）［2］。

图2 化合物Ⅰ的结构式

3.2 化合物Ⅱ的检识及鉴定

3.2.1 化合物Ⅱ的薄层鉴别 三种不同展开系统下（二氯甲烷∶甲醇 ＝30∶1；二氯甲烷∶乙酸乙酯 ＝1∶1；石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1。显色剂为10%硫酸－乙醇。）化合物均为一个橘黄斑点。

3.2.2 化合物Ⅱ的鉴定 化合物Ⅱ：无色液体，易溶于二氯甲烷，微溶于甲醇，10%硫酸－乙醇（95%乙醇）显色后为橘黄色。1H NMR（600 MHz，CD2Cl2）：δ7.37（m，3H），7.05（dd，J＝8.6，3.4 Hz，3H），4.63（d，J＝4.3 Hz，1H），3.95（dd，J＝6.4，4.4 Hz，1H），2.43（d，J＝7.1 Hz，1H），1.81（d，J＝13.7 Hz，1H），1.62（s，1H），1.27（d，J＝7.0 Hz，4H），1.07－0.99（m，11H），13C NMR（151 MHz，CD2Cl2）：δ175.66（C1″），150.90（C1），138.78（C2），128.20（C3，5），121.85（C6），77.46（C1′），71.66（C2′），41.58（C2″），26.31（C3″），22.58（Ar－CH3），17.61（C3′），16.74（C4″），11.79（C5″），53.84（CD2CL2）。经过碳谱和氢谱综合分析，并参考文献确定化合物为2-甲基丁酸-4-甲基-2-（1′，2′-二羟基丙基）苯酚酯（化合物结构式见图3）［3］。

图3 化合物Ⅱ的结构式

4 讨论

4.1 葡聚糖凝胶装柱

本实验中化合物溶于二氯甲烷中，凝胶装柱时使用洗脱剂为二氯甲烷，凝胶较二氯甲烷轻，浮于上层，凝胶装柱时若保留洗脱剂高于凝胶面6～7 cm时，总有一部分凝胶浮于上层，需加较厚的一层棉花将其压下，保证凝胶沉降完成。

4.2 薄层鉴别

本次实验中当用展开系统为二氯甲烷∶甲醇＝60∶1时，两种化合物斑点颜色及Rf均相同，但换展开系统为二氯甲烷∶乙酸乙酯＝1∶1时，两种化合物虽斑点颜色相近，但比移值却相差甚远。

4.3 化合物分子量的测定

在本次实验中，曾使用ESI-HRMS测定两种化合物的精确分子量，但在实验条件下，两种化合物均无响应，说明化合物的极性较小。因此如需测定这两种化合物的分子量需采用APCI-MS进行。