超高效液相色谱法测定牛奶中的纽甜含量

李肖斐 李鹏 勇艳华 刘怡君 胡侠

（大连产品质量检验检测研究院有限公司，辽宁 大连 116630）

纽甜是一种新型、高效、非营养型甜味剂，其甜度为砂糖8000 倍左右，可供糖尿病人食用；由于其甜度大，稳定性高，安全，被广泛应用于食品中，国内产品中的乳饮料中有标签标识添加纽甜，《中华人民共和国食品安全国家标准 食品添加剂使用标准GB2760-2014》中对调制乳和风味发酵乳中的纽甜限量要求分别为0.02g/kg 和0.1g/kg。对国内外文献检索，纽甜的测定方法较少，且复杂基质的净化较复杂或者不做净化，效率低且不易定性，本方法建立了用新型固相萃取净化杂质的检验方法，步骤简单，回收率高，检出限低，非常适合大批量的样品处理。

一、实验部分

（一）仪器与试剂与材料

Agilent 1260 高效液相色谱仪（配有二极管阵列检测器）；高速冷冻离心机；涡旋振荡器；氮吹浓缩仪；分析天平；乙腈、甲醇、醋酸铵（色谱纯）；试验用水为超纯水；Waters oasis PRIMe HLB 固相萃取柱：6mL、200mg；纽甜标准品：纯度≥99%；0.22μm 尼龙膜。

（二）标准品配制：

纽甜标准储备液：准确称取一定量的纽甜标准品，加水定容至100mL，使溶液纽甜含量为1.00mg/mL。

（三）样品前处理

准确称取液体奶1g 于10mL 具塞塑料离心管中，加入4mL 的乙腈，旋涡震荡3min，超声10min 后，以10000r/min 离心3min，上清液倒入固相萃取柱中（固相萃取柱不需要活化），收集流出液，待样品全部流出后，将收集液氮气吹干，1mL 流动相定容，涡旋，0.45μm 滤膜过滤后，供液相色谱仪分析。

（四）基质标准曲线的制作

准确吸取一定量的标准储备液，加入空白样品中，按照1.3 的前处理步骤进行前处理，所得的上机溶液作为标准曲线溶液。

（五）仪器条件

色谱柱：poroshell 120 EC-C18 3.0×50mm 2.7μm

流动相：25%乙腈（0.01mol/L醋酸铵溶液）0.01mol/L醋酸铵溶液的配制：称取2.64g 醋酸铵，用超纯水定容至1L。

流速：1.0mL/min

波长：218nm

进样量：20μL

（六）试样溶液的测定

将试样溶液注入液相色谱仪中，以保留时间定性，同时记录峰面积，根据标准曲线得到待测液中纽甜的浓度，试样溶液中纽甜含量的响应值应在仪器的检测线性范围内。

二、结果与分析

（一）标准曲线与线性范围

以标准曲线溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，相关性系数R2=0.99949，纽甜在此0～50μg/mL 线性范围内，线性关系良好。

（二）回收率与精密度

在空白样品基质中添加2、5、10、20mg/kg 水平的纽甜标准溶液，按本实验的前处理方法，平行测定4 次，进行分析，测得数据与RSD 如下表：

表1.

（三）流动相的选择

通过比对不同有机相的比例，25%乙腈（10mmol/L 醋酸铵）目标物保留时间合适，与样品中的杂质的分离度也很好。

（四）色谱柱的选择

选择小粒径的色谱柱，实现UPLC，具有高的分离度、灵敏度，实现高效率。