微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定注射用盐酸吉西他滨中6 种重金属元素

余师师，王鹏，钟振华，夏红英，王烜，程奇珍

江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029

注射用盐酸吉西他滨，是一种新型抗嘧啶代谢的抗肿瘤化疗药。可以用于晚期的或者转移性的胰腺癌，或者治疗局部晚期或转移性的非小细胞肺癌，以及乳腺癌、膀胱癌，还有其他实体肿瘤［1-4］。由于重金属元素可能会影响药品疗效，导致引起一系列不良反应的发生，同时，重金属在人体易与酶蛋白结合，使蛋白质失去活性，损伤人体组织细胞，过量摄入某些重金属会对人体产生危害［5-6］，故而应将重金属元素控制在可控限度内。

ICH Q3D 元素杂质指南在2014 年12 月开始实施，对元素杂质分类及限度、制剂每日允许暴露量与浓度限度的相互转换等进行详细说明，为药品制定合理的元素杂质控制提供了研究方法和限度依据［7-9］。《中国药典》四部通则陆续增加了“铅、镉、砷、汞、铜测定法”“汞、砷元素形态及价态测定法”以及“中药中铝、铬、铁、钡元素测定指导原则”［10］,可见《中国药典》对药品中重金属元素的控制也越来越重视。

电感耦合等离子体质谱是一种无机多元素分析检测技术。具有高灵敏度、干扰少、低检出限、可进行多种元素分析等优点，在当今前沿技术中具有极高的地位，常应用于化药重金属元素日常分析检验和安全监测领域［11-15］。

本研究采用灵敏性高和准确性高的电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法建立注射用盐酸吉西他滨中Cr、Cu、As、Ag、Cd、Pb 等6 种重金属元素含量的测定方法，并通过完整的方法学验证，保证各重金属元素检测的准确灵敏，为市售注射用盐酸吉西他滨的质量控制和安全性评价提供准确监测数据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

超纯水制水机（Synergguv millipore 密理博中国有限公司）；安捷伦电感耦合等离子体质谱仪（7700 ICP-MS）；赶酸仪（GST26-20）；微波消解仪（MARS-Xpress）。

1.2 试药与对照品信息

硝酸（批号：BCBP0680V，来源：fluka）；混合对照标准品溶液（含铬、铜、砷、银、镉、铅等元素，10 μg/mL），购于安捷伦科技有限公司；内标对照品溶液（含铋、锗、铟、铑、钪等元素，100 μg/mL），购于安捷伦科技股份有限公司 。

1.3 样品信息

本研究共涉及8 家公司生产的29 批次注射用盐酸吉西他滨，样品详细信息见表3。

1.4 仪器条件

射频功率：1 530 W；碰撞气：氦气；载气：氩气；冷却温度：4 ℃；载气流量：1.08 L/min；等离子气流量：15 L/min；积分时间：0.3 s；四级杆真空度：3.04×10-4Pa；采样锥孔径：1.0 mm；截取锥孔径：0.4 mm；入口温度：33.8 ℃；出口温度：41.5 ℃；数据采集重复次数：3 次。

1.5 测定法

测定时以72Ge、103Rh、115In、209Bi、45Sc 作为内标，将标准对照品溶液进样，以53Cr、63Cu、75As、107Ag、111Cd、208Pb 元素浓度为横坐标，仪器响应值为纵坐标，绘制标准曲线。同时进行空白校正。

1.6 溶液的制备

1.6.1 混合内标溶液 精密量取内标对照品溶液1 mL，置100 mL 量瓶中，用2%硝酸定量稀释制成每1 mL中浓度为1 μg 的溶液，即得。

1.6.2 对照品溶液的制备 精密量取混合对照标准品溶液适量，用2%硝酸溶液定量稀释成系列含各金属元素浓度分别为1、4、8、10、20、40、60、80、100、200、400、600 ng/mL 的对照品溶液。

1.6.3 样品的制备 取注射用盐酸吉西他滨1 瓶加水适量（制成40 mg/mL 的样品溶液），精密量取1 mL，置微波消解罐中，加硝酸10 mL，100 ℃预消解1 h，取出，加盖，放入微波消解仪中，190 ℃消解45 min，取出，放冷后，开盖，140 ℃赶酸至罐内硝酸近干，用2%硝酸转移至25 mL 量瓶中并稀释至刻度，摇匀，即得。

2 方法与结果

2.1 线性关系试验

取混合内标溶液与对照品溶液,按“1.5”项下ICP-MS 测定条件同时进样测定，记录仪器响应值（CPS）。以对照品溶液质量浓度（x，ng/mL）为横坐标，仪器响应值（y）为纵坐标进行线性回归，回归方程、线性范围详见表1。

表1 线性关系与检出限试验结果

2.2 精密度试验

取“1.6.2”项对照品溶液（浓度为200 ng/mL），重复进样测定6 次，记录测定结果。结果：Cr、Cu、As、Ag、Cd、Pb 元素仪器响应值的RSD 分别是0.9%、0.5%、0.8%、0.5%、0.4%、0.4%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.3 重复性试验

取注射用盐酸吉西他滨样品（D 公司，批号：20180404），照“1.6.3”方法平行制备6 份样品溶液，作为重现性试验溶液。结果显示：6 份样品中Cr、Cu、As、Ag、Cd、Pb 等测定结果的RSD 分别为1.5%、0.9%、1.1%、1.6%、0.5%、1.0%（n=6），表明本方法重复性好。

2.4 回收率试验

取注射用盐酸吉西他滨2 瓶（D 公司，批号：20180404），各加水5 mL，振摇使溶解，摇匀，精密量取1 mL（n=9），置微波消解罐中，分别精密加入混合对照标准溶液（浓度均为10 μg/mL）0.125、0.125、0.125、0.25、0.25、0.25、0.5、0.5、0.5 mL，加硝酸10 mL，100 ℃预消解1 h，取出，加盖，放入微波消解仪中，190 ℃消解45 min，取出，放冷后，开盖，140 ℃赶酸至罐内硝酸近干，用2%硝酸溶液转移至25 mL 量瓶中并稀释至刻度，摇匀，作为回收试验溶液。回收试验结果详见表2。

表2 回收试验结果

2.5 检出限

取样品空白溶液，连续测定11 次，计算仪器响应值的标准偏差，以测定标准偏差的3 倍为各待测元素的检测限，见表1。

2.6 样品结果与分析

该品种本次抽验中共涉及8 家公司生产的29批次，现对每批样本进行金属元素含量检测。样本信息及重金属元素测定结果详见表3。

表3 样本信息及重金属元素测定结果

3 讨论

对8 家公司市售29 批注射用盐酸吉西他滨进行研究测定，参照ICH Q3D 元素杂质指南对注射用制剂金属元素杂质限度规定［7］，结果表明各元素均低于限度，本品使用时重金属安全风险较低。各重金属元素的分类、限度及注射用盐酸吉西他滨样品中重金属元素含量范围详见表4。

表4 各重金属元素的分类、限度及样品中重金属元素含量范围

本方法采用ICP-MS 法测定注射用盐酸吉西他滨中的Cr、Cu、As、Ag、Cd、Pb 重金属元素，此法操作方便简单，线性关系良好，检出限低，定性定量准确，适用于注射用盐酸吉西他滨中杂质检测分析，为相关风险评价提供依据。