CD4+效应型记忆性T细胞及NLR与特发性面神经麻痹的相关性研究

杨婷婷 黄小雨 李凤展 刘 坛 王莹莹 耿德勤 张 勇

特发性面神经麻痹又称贝尔麻痹，是一种常见的颅神经病变，为非特异性炎症导致的周围性面瘫[1]。研究表明面部表情肌的瘫痪往往对患者的生活质量及心理健康造成很大的影响[2,3]。因此，积极寻找发生特发性面神经麻痹的早期预测指标对特发性面神经麻痹患者的管理及预防具有十分重要的意义。目前该疾病病因尚不十分明确，可能与免疫系统失衡密切相关[4]。记忆性T细胞(memory T cell，Tm)是参与机体免疫防御和抗原清除的一类重要免疫细胞亚群，可以针对外来及异种抗原产生迅速且高效的免疫应答，一直以来在抗感染及疫苗研制领域受到广泛关注[5]。然而，目前关于记忆性T细胞亚群在特发性面神经麻痹中的研究较少。本研究旨在探究特发性面神经麻痹患者外周血CD4+记忆性T细胞亚群表达变化，并分析其对特发性面神经麻痹的诊断价值。

对象与方法

1.对象：选取2017年8月～2020年10月徐州医科大学附属医院神经内科住院的53例特发性面神经麻痹患者作为实验组。实验组纳入标准：①符合中国特发性面神经麻痹诊治指南2016版的诊断标准[6]；②所有患者发病在1周以内。排除标准：①近3个月有活动性耳科疾病者；②颅内占位、吉兰巴雷等引起的继发性面神经麻痹；③中枢性面神经麻痹；④高血压、糖尿病、心力衰竭、肝脏、肾脏功能损害；⑤近期细菌感染；⑥合并结缔组织病等自身免疫病患者。选择同时期的50例健康对照者作为对照组。对照组纳入标准：①各项体检指标无异常；②半年内无外伤及其他疾病史；③无其他合并症。本研究经徐州医科大学附属医院医学伦理学委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。

2.方法：所有研究对象均于入院第2天清晨空腹抽取2ml EDTA抗凝静脉血，采用人淋巴细胞分离液(天津灏洋生物公司)通过密度梯度离心法分离得到外周血单个核细胞(PBMC)，经PBS洗涤离心后加入鼠抗人CD3-APC-Cy7抗体、鼠抗人CD4-APC抗体、鼠抗人CD45RA-V450抗体、鼠抗人CCR7-BV510抗体(美国BD公司)，同时设同型对照管，室温避光孵育15min后，采用LSRF ortessa型流式细胞仪(美国BD公司)检测CD4+TCM及CD4+TEM细胞，其表型分别为CD3+CD4+CD45RA-CCR7+和CD3+CD4+CD45RA-CCR7-[7]。同时收集患者血常规检验中淋巴细胞、中性粒细胞及血小板计数，计算NLR与PLR值。

结 果

1.一般资料比较：实验组与对照组性别、年龄、血小板计数、淋巴细胞计数及PLR比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较，实验组中性粒细胞计数及NLR值更高，差异有统计学意义(P<0.05，表1)。

表1 实验组与对照组一般资料比较

2.实验组与对照组外周血CD4+记忆性T细胞亚群比较：实验组CD4+TCM细胞百分率为30.06%±9.48%，对照组CD4+TCM细胞百分率为33.06%±8.53%，两组比较差异无统计学意义(t=1.686,P=0.095)；实验组CD4+TEM细胞百分率为55.70%±12.63%，对照组CD4+TEM细胞百分率为34.57%±8.80%，两组比较差异有统计学意义(t=-9.896,P=0.000，图1)。

图1 实验组与对照组外周血CD4+TCM细胞及CD4+TEM细胞百分率比较A.CD4+CD45RA-CCR7+中央型记忆T淋巴细胞(CD4+TCM)及CD4+CD45RA- CCR7-效应型记忆T淋巴细胞(CD4+TEM)流式细胞术设门图；B.实验组与对照组外周血CD4+TCM细胞及CD4+TEM细胞百分率柱状图分析

3.特发性面神经麻痹的危险因素分析：单因素Logistic回归分析，影响特发性面神经麻痹的危险因素包括CD4+TEM细胞、NLR及中性粒细胞计数(P<0.05，表2)。将上述因素代入多因素Logistic回归方程，结果显示，CD4+TEM细胞及NLR是影响特发性面神经麻痹的独立危险因素(P<0.05，表3)。

表2 特发性面神经麻痹的单因素Logistic回归性分析

表3 特发性面神经麻痹的多因素Logistic回归性分析

4.CD4+TEM细胞及NLR两指标对特发性面神经麻痹的预测价值分析：ROC曲线分析显示CD4+TEM细胞及NLR的曲线下面积分别为0.910(95%CI: 0.851～0.969，P=0.000)和0.783(95%CI: 0.690～0.875，P=0.000，图2)。其中CD4+TEM细胞的曲线下面积大于NLR(Z=2.255，P=0.024)。

图2 CD4+TEM细胞及NLR两指标对特发性面神经麻痹的诊断价值A.CD4+TEM细胞；B.NLR

讨 论

近年来研究显示，特发性面神经麻痹发病主要归因于循环免疫细胞介导的免疫炎性反应，其中CD4+T细胞已被证实与特发性面神经麻痹密切相关[4,8]。然而，CD4+T细胞在特发性面神经麻痹中的研究尚不深入，具有一定的局限性，其诊断阳性率有待进一步提高。鉴于特发性面神经麻痹患者恢复过程缓慢，部分患者甚至出现不可逆的面部表情功能丧失，严重影响患者的生活质量。因此，寻找新的指标预测特发性面神经麻痹发生对提高特发性面神经麻痹患者的临床治疗疗效及预后有着极其重要的临床意义。

CD4+记忆性T细胞是机体免疫防御和抗原清除系统的重要组成部分，可以针对外来及异种抗原产生迅速且高效的免疫应答，一直以来在抗感染及疫苗研制领域受到广泛关注[9～12]。Sallusto等[13]首次根据Tm细胞的迁移能力及功能不同分为CD4+的中央型记忆性T细胞(TCM)和效应型记忆性T细胞(TEM)。TCM细胞主要存在于淋巴器官,具有自我更新的能力。在机体受到抗原刺激后，TCM细胞能够迅速转化为TEM细胞，并长期存在于外周中，产生IFN-γ、IL-17等炎性因子发挥效应功能[9，10,14]。目前，在结核、病毒等感染性疾病中已有研究报道CD4+TEM表达增加，并且有望成为临床诊断该类感染性疾病的新型观察指标[15, 16]。然而尚无关于CD4+Tm细胞亚群在特发性面神经麻痹患者中的表达研究。

本研究对特发性面神经麻痹患者外周血CD4+TCM和CD4+TEM细胞进行了比较分析，发现特发性面神经麻痹患者与健康对照组比较，CD4+TEM细胞表达明显增加，而CD4+TCM细胞表达两组比较差异无统计学意义，提示CD4+TEM细胞与特发性面神经麻痹密切相关。除了检测CD4+Tm细胞亚群表达水平，本研究还分析比较了两组患者NLR及PLR情况，与既往研究报道一致[17]。本研究发现特发性面神经麻痹患者中性粒细胞计数及NLR显著高于健康对照组，差异有统计学意义，而两组PLR比较差异无统计学意义。上述指标经Logistic回归分析显示CD4+TEM细胞、NLR为影响特发性面神经麻痹的危险因素。此外，本研究还进一步通过绘制ROC曲线发现CD4+TEM细胞及NLR对特发性面神经麻痹具有较好的预测价值，其中CD4+TEM细胞预测效果更佳。因此早期进行CD4+TEM细胞检测，同时联合NLR，有利于特发性面神经麻痹的早期识别，从而早期干预以改善患者的预后。

综上所述，本研究发现特发性面神经麻痹患者和健康对照组外周血CD4+TEM细胞、NLR比较差异有统计学意义，且对特发性面神经麻痹具有较好的诊断价值，为特发性面神经麻痹的临床诊断与治疗提供一定的理论依据。