牙周炎伴慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者相关牙周指标和龈沟液指标的研究

庄贤文，陈展泽，兰 倩，罗海玲

1.广东省佛山市口腔医院(佛山市牙病防治指导中心)检验科，广东佛山 528000；2.广东省佛山市第一人民医院检验科，广东佛山 528000；3.广东省佛山市口腔医院(佛山市牙病防治指导中心)牙周病科，广东佛山 528000

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是较为常见的一种呼吸系统疾病，具有不完全可逆、进行性加重的特点[1]，可进一步发展为肺源性心脏病和呼吸衰竭。全球每年约300万人死于COPD，约占全球总死亡人数的5%[2]，目前我国COPD患病率约占40岁以上人群的13.7%，位列全球死亡原因的第4位[3]。牙周炎是由牙菌斑中细菌侵犯牙周组织引起的一种慢性破坏性疾病[4]，可与全身疾病相关，研究表明牙周炎对COPD发病、发展有一定的促进作用[5-6]，牙周状况较差的患者COPD急性发作的频率会升高[7]。本研究通过检测牙周炎伴慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者相关的牙周指标和龈沟液指标，探讨其临床诊治意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年1-12月到广东省佛山市口腔医院(以下简称该院)就诊的30例单纯慢性牙周炎(CP)患者作为CP组，其中男18例、女12例，平均(37.5±13.2)岁；选取同期到佛山市第一人民医院就诊的30例单纯AECOPD患者作为AECOPD组，其中男16例、女14例，平均(40.2±10.3)岁；选取同期到该院和佛山市第一人民医院就诊的30例中重度CP伴AECOPD患者作为CP+AECOPD组，其中男18例、女12例，平均(39.2±12.4)岁；另选取同期到该院检查的30例全身及牙周健康体检者作为对照组，其中男15例、女15例，平均(36.3±9.5)岁。入选标准：(1)所有AECOPD患者符合中华医学会呼吸病学分会修订的《慢性阻塞性肺疾病诊治指南(2013年版)》中COPD的相关诊断标准[8]；(2)所有CP患者临床诊断为中重度CP，全口余留牙≥20个；(3)患者及其家属对本研究知情并同意。排除标准：(1)合并有严重器质性疾病如心、肝、肾功能不全者或内分泌、血液疾病者；(2)有其他可能与牙周炎有关的全身性疾病；(3)3个月内使用抗菌药物或含漱液者，6个月内进行牙周治疗者。各组研究对象的年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05)，有可比性。

1.2方法 对所有研究对象的4个牙(12、11、21、22)进行牙周检查和龈沟液采集，记录牙周指标包括出血指数(BI)、探诊深度(PD)、临床附着丧失(CAL)、菌斑指数(PLI)。将待取样牙的龈上菌斑和软垢清除并待牙面吹干后，用Whatman滤纸(2 mm×10 mm)插入龈沟底30 s进行标本采集，取出滤纸浸入含0.2 mL 磷酸盐缓冲液(PBS)的EP管中充分振荡摇匀，以3 000 r/min离心10 min取上清液[9]备用，使用酶联免疫吸附试验检测龈沟液中白细胞介素(IL)-6、IL-8、C反应蛋白(CRP)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。IL-6、IL-8、TNF-α使用罗氏诊断产品有限公司提供的全自动免疫分析仪及配套试剂盒进行检测，CRP使用深圳国赛生物技术有限公司提供的特定蛋白分析仪(Astep PLUS)及配套试剂盒进行检测。所有操作均严格按照试剂盒说明书操作方法进行，并采用同一批号的试剂检测，排除非特异性干扰，以保证检测结果的稳定性和可比性。采用基于16S rRNA基因的高通量测序方法检测CP组和CP+AECOPD组各30份标本的细菌组成。将所有标本送至深圳华大基因股份有限公司进行检测，获得两组标本的细菌分析数据。

1.3观察指标 分别对所有研究对象的龈沟液炎症因子(IL-6、IL-8、TNF-α、CRP)，以及牙周指标(BI、PD、CAL、PLI)和细菌群落相对丰度进行检测。

2 结 果

2.1各组牙周指标比较 与对照组比较，CP组和CP+AECOPD组BI、PD、CAL、PLI明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；与CP组比较，CP+AECOPD组PLI明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组牙周临床检测指标对比

2.2各组龈沟液中的炎症因子对比 与对照组比较，CP组和CP+AECOPD组CRP、TNF-α、IL-6、IL-8水平显著升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；与CP组比较，CP+AECOPD组CRP、TNF-α、IL-6、IL-8水平明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 各组龈沟液中的炎症因子比较

2.3两组患者龈沟液在门水平细菌群落的相对丰度比较 在门水平，CP+AECOPD组在厚壁菌门、拟杆菌门、梭杆菌门和变形菌门的相对丰度明显高于CP组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 两组患者龈沟液在门水平细菌群落的相对丰度比较[ M(P25～P75)]

2.4两组患者龈沟液在属水平细菌群落的相对丰度比较 在属水平，CP+AECOPD组在纤毛菌属、棒杆菌属、链球菌属和普氏菌属的相对丰度显著高于CP组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 两组患者龈沟液在属水平细菌群落的相对丰度比较[ M(P25～P75)]

3 讨 论

CP主要通过以下方式影响COPD患者的疾病进展[10]：(1)牙周组织是炎性介质储存库；(2)龈下菌斑是细菌储存库；(3)CP和COPD危险因素相似。同时，牙周炎和COPD在疾病发展过程中会释放多种炎性介质，如IL-6、IL-8等，各种炎性介质相互影响，在疾病发生、发展过程中发挥作用[11-12]。本研究通过检测CP伴AECOPD患者相关牙周指标和龈沟液炎症因子及细菌指标水平，探讨其临床诊治意义。

CP患者普遍发生牙龈出血、牙齿松动及附着丧失等情况，本研究中CP组和CP+AECOPD组患者BI、PD、CAL、PLI显著高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；CP+AECOPD组和CP组患者BI、PD、CAL相比差异均无统计学意义(P>0.05)，CP+AECOPD组PLI高于CP组，差异有统计学意义(P<0.05)。研究表明，COPD患者口腔健康状况较差，COPD和CP之间存在一定相关性，随着牙周附着丧失的增加，COPD患者肺功能逐渐减弱[13]。

CP不仅与糖尿病、心脑血管疾病、类风湿关节炎、肥胖、早产低出生体质量儿有密切关系，与呼吸系统疾病的关系也日益受到关注[14]。IL-6、IL-8等炎症因子相互作用，在CP和COPD两者的发生、发展中相互影响，IL-6、IL-8等炎症因子在呼吸系统炎症过程中过度产生与聚集，通过气道及血源等途径进入口腔，加剧牙周组织破坏[15]。本研究中，CP组和CP+AECOPD组龈沟液CRP、TNF-α、IL-6、IL-8水平明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；CP+AECOPD组龈沟液CRP、TNF-α、IL-6、IL-8水平均显著高于CP组，差异均有统计学意义(P<0.05)。其中，在启动和加剧炎性反应过程中IL-6和IL-8起关键作用，两者均参与牙槽骨的破坏和吸收，减弱牙周组织修复能力，而且过度产生的IL-8会激活大量粒细胞，进一步破坏牙周组织并影响炎性反应进程。IL-6和IL-8作为远端细胞因子，在近端细胞因子刺激肺泡巨噬细胞时大量产生，可导致瀑布式炎性反应，最终造成肺过度损伤[16-17]。COPD患者体内细菌或病毒中所含抗原及代谢产物激活局部肺泡巨噬细胞，生成TNF-α等炎症因子，而TNF-α反作用于COPD患者诱导产生中性粒细胞，提高蛋白溶解酶活性。

口腔菌群不仅数量巨大，而且种类十分丰富，由于口腔与呼吸道相通，研究发现健康人群肺部菌群与口腔菌群具有高度的相似性，在牙周常规检出的细菌也可出现在下呼吸道中[18]。有研究表明，感染是COPD急性加重的主要原因，其中细菌感染最常见[4]。本研究中发现，在CP+AECOPD患者龈沟液中细菌的主要门类为厚壁菌门、拟杆菌门、梭杆菌门和变形菌门，主要属类为纤毛菌属、棒杆菌属、链球菌属和普氏菌属，与相关研究结果相类似[19]。从研究结果上看，CP+AECOPD组患者的部分细菌门类、属类群落相对丰度均高于CP组，但不同患者间的细菌门类、属类分布仍存在较大差异，需要扩大样本量，减少取样偏差再次分析。

综上所述，牙周炎伴AECOPD患者牙周损伤程度高于单纯牙周炎患者，CRP、TNF-α、IL-6、IL-8等炎症因子水平增高以及细菌种类与牙周炎存在密切关系，可为牙周炎患者诊治提供重要依据。通过检测上述指标可对治疗方案进行优化调整。本研究存在一定的局限性，样本量相对较少，且AECOPD的影响因素较多。在后续研究中将进一步加大样本量，根据牙周及龈沟液阳性指标构建相关预测模型，用于临床危险评估干预。