高效液相色谱法检测蔬菜中吡虫啉残留试验分析

摘要：本文以蔬菜作为主要研究对象，对蔬菜中的吡虫啉残留情况进行针对性的检测。从检测结果中可以看出，高效液相色谱法可以在短时间内快速完成检测，并有效保证检测结果的准确性，对蔬菜中的吡虫啉残留测定非常适合。

关键词：蔬菜;高效液相色谱法;吡虫啉;残留

吡虫啉是国外经多年研究创造出的烟碱类杀虫剂，已经在世界范围内得到广泛的应用，销量位居同类型杀虫剂首位。其在杀虫过程中会对乙酰胆碱体产生一定的作用，对昆虫神经系统产生干扰，使昆虫受到强烈的刺激，堵塞神经通路，最终死亡。吡虫啉具有高效、毒性小的多重特点，可以在果蔬、谷类等作物中广泛应用，也可用来防治害虫。

1 材料与方法

1.1 仪器设备、试剂和样品

选择安捷伦1260型高效液相色谱仪（配备紫外检测器），准备乙腈、二氯甲烷和甲醇等试剂，另准备好吡虫啉标准品。由同一农贸市场采购西红柿、菜豆和结球甘蓝3种蔬菜作为样品。

1.2 试验步骤

1.2.1 提取 使用食品粉碎机粉碎蔬菜样品，用天平称量出试验所需的试样25克，统一放置于250毫升烧杯中，再加入50毫升乙腈，使用高速均浆机进行120秒的匀浆，并将其过滤，放到具塞量筒中，加入4克氯化钠，进行50秒的剧烈振荡后，保持30分钟的静止，将乙腈吸取出10毫升，并放到烧杯中，使用氮气吹干乙腈，配制好甲醇和二氯甲烷混合溶液，使提取物可以被充分溶解。

1.2.2 净化 取supel cleaLC-NH2小柱，对甲醇和二氯甲烷按一定比例配制，先预淋洗supelcleaLC-NH2小柱，再将上述提取液加入柱中，并做两次洗脱，收集洗脱液。将洗脱液收集在定容离心管中，再使用氮吹仪吹干此离心管，取2毫升甲醇溶液加入已吹干的定容离心管中，使用滤膜过滤，为液相色谱分析创造良好的条件。

1.2.3 液相色谱条件 色谱柱：Waters symmetry shieldTMC 18（4.6×250毫米，5微米），温度控制在30℃左右，检测波长275纳米;流动相CH3OH∶H2O∶CH3CN=55∶25 ∶20;流速每分钟0.8毫升;进样量10.0微升。

1.2.4 样品测定 在满足色谱条件下，待仪器恢复到稳定状态后，再次加入吡虫啉标准溶液，进样时需要保证相邻两针的响应值达到相关标准，进样顺序为标准溶液、样品溶液，计算结果需要将两次重复所得面积相加，取平均值。

1.2.5 结果计算 以该公式对样品中吡虫啉农药残留含量进行准确的计算，其中测定样品含量以m2表示，加入的乙腈量以V1表示;V2代表分取体积;最后定容体积以V3表示;进样体积和称样量分别以V4和?L表示;m1称样量。

2 结果与分析

2.1 线性范围

以甲醇为介质稀释吡虫标准品，使其可以成为不同规格的吡虫啉标准溶液，这一系列溶液的规格分别为0.1、0.2、0.5和1.0毫克/升，使用液相色谱仪依次进样测定标准溶液。当标准物质浓度处于0.1以上，不超过1.0毫克/升时，吡虫啉浓度会与仪器响应值面积产生线性相关，并且这种线性相关较好，拥有完整的校正曲线，其相关系数为0.992508。

2.2 最低检出限

稀释后的吡虫啉标准溶液为基线噪音的10倍以上，浓度较高。如果以15克进行取样，其最低检出限为0.01毫克/公斤。

2.3 色谱条件的选择

吡虫啉具有极好的使用效果，可以充分溶解在水中，也可以保留在C18柱上，呈现的峰行非常良好。从试验中可以明确，需要将甲醇、乙腈、水，以55∶20∶25的比例混合，并选择分离试样中的吡虫啉。如图1所示为吡虫啉的准分子离子的色谱图。

2.4 试样前处理方法

2.4.1 选择提取溶剂和洗脱液 在选择样品提取剂时，乙腈、丙酮等都属于首要的选择之一，需要由专业人员提取一定质量浓度的样品，从中能够发现提取效果最佳的是乙腈，其比丙酮、乙酸乙酯等試剂的回收率明显高出很多，在提取操作时也非常便利。不同比例二氯甲烷比甲醇，会直接影响药品洗脱效果。结果表明，当吡虫啉回收率处于稳定状态时，甲醇体积分数为1.0%～9%，但甲醇与二氯甲烷相结合时，只会存在较少的杂质峰。当使用10毫升的洗脱剂时，吡虫啉可以完全回收。

2.4.2 选择净化方法 目前，液液萃取法和固相萃取法是分析农药残留最为常用的方法之一。固相萃取方法可以将提取、收缩等步骤相整合，使操作步骤更加简化，并对溶剂用量进行合理控制，使样品前处理效率得到显著提升，该方法基于这些优势，已经引起了相关人员的关注和重视。本文通过比较后发现，处理效果最好的是氨基小柱。氨基小柱在蔬菜样品前处理时，杂质较少，只会受到较小的干扰，颜色比较浅，回收率与分析测定需求相符合。本试验在处理时应用升C-NH2柱净化方式，可以使试样中的天然色素和糖类大分子得到有效地去除，试验充分证明可以对吡虫啉测定的干扰进行快速消除。

2.5 准确度和精密度试验

将3份西红柿样品称取好，合理利用标准加入法，将0.05、0.10、0.20毫克/公斤的吡虫啉标准品加入到已知含量的吡虫啉标准品中，按照上述方法完成提取，并做好净化，在色谱条件下对吡虫啉含量进行科学地测定，并针对回收率实验展开分析。如表1所示，为计算平均回收率和相对标准偏差。

从表1中可以明确看出，当平均率处于95.4%～106.8%时，其处于0.05～0.20毫克/公斤的添加水平范围内，相对标准偏差可以控制在合理地范围内，与国家标准农药残留需求相符合。

2.6 样品的检测

选取10份来自同一农贸市场的西红柿、菜豆和结球甘蓝，运用此方法进行测定，从测定结果中可以准确确定并没有残留吡虫啉。

3 结论

本文在进行蔬菜中吡虫啉农药残留检测时，对样品进行了规范化地处理，充分发挥高效液相色谱检测方法的优势，顺利完成了检测工作。从检测结果中可以明确看出，当吡虫啉添加水平处于0.05、0.10毫克/公斤时，可以准确计算其相对偏差，与农药残留检测要求相符合。该方法在检测蔬菜样品时花费的时间较少，操作便利性强，并且检测结果精准，可以为测定其他产品的吡虫啉残留量提供借鉴和参考，大力推广。

作者简介：周玲（1992-），女，助理工程师。主要从事农药残留检测工作。