黄连-厚朴配伍抑制PI3K/Akt信号通路改善TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎研究

杨显娟，付 尹，王佳俊，王 建*，肖琳萱，徐 卓，王立映，龚道银

1.成都中医药大学药学院，四川 成都 611137

2.成都中医药大学附属医院，四川 成都 610075

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种炎症性肠病，发病部位仅限于结肠和直肠，病因尚不明确[1]。据统计，全球UC 总患病率为0.4%[2-4]。黄连、厚朴为2 种传统的中草药，具有抗菌、抗氧化、止泻和消炎的作用，临床常将2 药配伍联用，厚朴制约黄连苦寒药性，二者又可协同增效，且安全性更高。现代药理学研究表明，黄连的主要活性成分小檗碱对UC 具有抗炎、调节免疫、保护肠黏膜屏障和维持肠道菌群平衡的作用[5-6]；厚朴的主要活性成分厚朴酚对UC 也具有较好的保护作用[7]。本课题组前期研究发现，黄连、厚朴单独或配伍使用对UC 均具有保护作用[8]。本研究采用生物信息学分析技术预测黄连-厚朴活性成分与活动性UC 之间复杂的网络关系，系统性地评估黄连与厚朴治疗UC的生物学过程和可能调控的信号通路，并结合实验验证，为阐明黄连-厚朴配伍的作用机制提供依据。

1 方法

1.1 网络药理学分析

1.1.1 靶点预测 从GEO 数据库（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）[9]下载GSE75214 基因表达谱数据，以P＜0.05 且|log2FC|≥1 为标准，筛选差异基因，其中log2FC≥1 代表上调的差异表达基因，log2FC≤−1 代表下调的差异表达基因。

通过中医药系统药理学平台（TCMSP，https://tcmspw.com/tcmsp.php）[10]收集黄连、厚朴的活性成分，根据口服利用度（oral bioavailability，OB）≥30%且类药性（drug likeness，DL）≥0.15筛选活性成分，同时利用SwissTargetPrediction 数据库（http://www.swisstargetprediction.ch/）[11]预测活性成分的作用靶点。

1.1.2 蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction，PPI）网络的构建和功能富集分析 利用R 语言将黄连-厚朴活性成分靶点与UC特异性差异基因取交集，绘制韦恩图，采用STRING 数据库（https://string-db.org）[12]构建 PPI 网络。采用CytoScape 软件[13]对交集靶点进行基因本体（gene ontology，GO）功能及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析。

1.2 实验验证

1.2.1 动物 SPF 级SD 大鼠48 只，雌雄各半，8周龄，体质量（220±20）g，购自成都达硕实验动物有限公司，动物合格证号SCXK（川）2020-030。动物于成都中医药大学实验动物中心适应性饲养5 d，温度（25.0±0.5）℃、湿度50%，通风良好，保持明暗交替，自由进食饮水。动物实验经成都中医药大学实验动物临床委员会批准（批准号TCM-2016-312）。

1.2.2 药材 黄连、厚朴购自成都荷花池中药材市场，经成都中医药大学李敏教授鉴定分别为黄连Coptis chinensisFranch.的干燥根茎、厚朴Magnolia officinalisRehd.et Wils.的干燥干皮、枝皮及根皮。采用高效液相色谱法（HPLC）测得黄连中小檗碱质量分数为7.44%（以盐酸小檗碱计），厚朴中厚朴酚与和厚朴酚的总质量分数为3.19%，均符合《中国药典》2020年版规定。

1.2.3 药品与试剂 2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS，批号P2297）购自美国Sigma 公司；柳氮磺胺吡啶肠溶片（批号09180709，0.25 g/片）购自上海信宜天平药业有限公司；白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）检测试剂盒（批号YX-091201R）、IL-6 检测试剂盒（批号YX-091221R）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）检测试剂盒（批号YX-201406R）、髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）检测试剂盒（批号YX-131615R）购自上海优选生物科技有限公司；BCA 蛋白定量试剂盒（批号202001）购自北京索莱宝科技有限公司；β-actin抗体（批号T0022）购自美国Affinity 公司；蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）抗体（批号4685S）、剪切型半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）抗体（批号9661S）购自美国CST 公司；磷酸化Akt（p-Akt）抗体（批号AB38449）、磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）抗体（批号AB182651）购自英国Abcam 公司；B 淋巴细胞瘤2（B-cell lymphoma 2，Bcl-2）抗体（批号109683）购自美国GeneTex 公司；HRP 标记的山羊抗兔IgG抗体（批号143146）购自美国Jackson Immuno Research 公司。

1.2.4 仪器 L3-5K 型高速离心机（湖南可成仪器设备有限公司）；电泳仪（美国Bio-Rad 公司）；XD30型显微镜（日本Olympus 公司）；DG5032 型酶标仪（上海珂淮仪器有限公司）；TSY-B 型摇床（天津市莱玻特瑞仪器设备有限公司）；JB-P5 型包埋机（常州派斯杰医疗设备有限公司）；RM2235 型石蜡切片机（德国Leica 公司）。

1.2.5 造模、分组与给药 SD 大鼠禁食不禁水24 h后，取40 只大鼠采用TNBS/乙醇法[14]制备UC 模型。聚乙烯软管经石蜡润滑后插入大鼠直肠，深度约8 cm，向聚乙烯软管中缓慢注入的TNBS/乙醇溶液（1 mL/kg），为防止药液停留在软管中，药液注入完毕后，继续注入0.4 mL 空气，并将大鼠倒立，保持肛门高位2 min，以防止药液倒流，使药液均匀分布在直肠中；取8 只大鼠作为对照组，注入等体积0.9%氯化钠溶液。黄连、厚朴和黄连-厚朴配伍水提物的制备及剂量设置参照本课题组前期研究方法[8]，将造模成功的40 只大鼠随机分为模型组、黄连（2 g/kg）组、厚朴（2 g/kg）组、黄连-厚朴配伍（4 g/kg）组和柳氮磺胺吡啶（0.4 g/kg，相当于临床等效剂量）组，每组8 只。造模24 h 后，各给药组ig 相应药物（10 mL/kg），对照组和模型组ig 等体积0.9%氯化钠溶液，1 次/d，持续6 d。

1.2.6 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平和MPO 活性的影响 末次给药24 h 后，称定大鼠体质量，深度麻醉，腹主动脉取血，3500 r/min离心10 min，收集上清液，按试剂盒说明书检测血清中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平和MPO 活性。

1.2.7 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠质量/长度、脾脏指数和肠黏膜损伤指数（colon macroscopic damage index，CMDI）评分的影响 大鼠腹主动脉取血后，取结肠和脾脏组织，称定质量，将结肠平铺在方格纸上测量结肠长度，并进行CMDI评分[15]：0 分为黏膜无损伤、充血；1 分为局部黏膜充血水肿，但无糜烂、溃疡形成；2 分为黏膜有溃疡形成、充血，但炎性反应与溃疡仅显点状不显著；3 分为在2分的基础上，黏膜溃疡、充血范围直径超过4 mm，炎性反应显著；4 分为在3 分的基础上，黏膜溃疡、充血、炎性反应更严重，并有结肠增厚现象；5 分为在4 分的基础上，溃疡面积直径超过1 cm，结肠明显充血、增厚；6 分为在5 分的基础上，溃疡形成超过2 cm 且糜烂，结肠增厚。

1.2.8 黄连-厚朴配伍对UC大鼠结肠组织病理变化的影响 各组大鼠取靠近直肠的结肠组织，于4%多聚甲醛中固定48 h，经脱水、透明、包埋、切片、贴片、烤片后，进行苏木素-伊红（HE）染色，于显微镜下结肠组织病理变化，并进行病理损伤程度评分，评分标准见表1。

表1 结肠组织病理损伤评分标准Table 1 Scoring criteria of colonic histopathological damage

结肠组织病理损伤评分＝(炎性细胞浸润＋组织结构的完整性)/2

1.2.9 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠组织PI3K、Akt 和cleaved Caspase-3 表达的影响 取各组大鼠结肠组织，包埋后切片（厚2 μm），脱蜡、水化、抗原修复、阻断、封闭后，分别滴加Akt 抗体（1∶100）、PI3K 抗体（1∶100）、cleaved Caspase-3 抗体（1∶400），4 ℃孵育过夜；加入HRP 标记的山羊抗兔IgG 抗体孵育，于显微镜下观察并拍照，使用Image J 软件分析结肠组织PI3K、Akt 和cleaved Caspase-3 表达情况。

1.2.10 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠组织p-Akt、Bcl-2 和cleaved Caspase-3 蛋白表达的影响 取大鼠结肠组织，加入预冷的RIPA 裂解液（含磷酸酶抑制剂和蛋白酶抑制剂），提取蛋白，采用BCA 蛋白定量试剂盒测定蛋白质量浓度。蛋白样品经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，转至PVDF 膜，封闭后，分别加入p-Akt、Akt、Bcl-2、cleaved Caspase-3 和β-actin 抗体，孵育过夜；加入HRP 标记的山羊抗兔IgG 抗体，孵育后加入ECL 发光液显影，采用Image J 软件分析条带。

1.2.11 统计分析 采用SPSS 26.0 软件进行统计，使用单因素方差分析（One-way ANOVA）结合事后检验进行组间分析。

2 结果

2.1 网络药理学分析

2.1.1 UC 差异基因的表达 GSE75214 基因表达谱数据包括11 例正常结肠组织样本和74 例活动性UC 结肠组织样本，根据P＜0.05 且|log2FC|≥1 共筛选出1243 个差异表达基因，包括794 个表达上调的差异基因和449 个表达下调的差异基因，见图1。

图1 UC 结肠组织差异表达基因的火山图Fig.1 Volcano map of differentially expressed genes in UC colon tissue

2.1.2 PPI 网络分析 如表2 所示，TCMSP 数据库共检索到黄连-厚朴活性成分22 个，其中黄连14 个、厚朴8 个。如图2、3 所示，共预测出260 个靶点，将筛选的黄连-厚朴活性成分靶点与UC差异基因靶点取交集，得到49 个共同靶点。

表2 黄连-厚朴的活性成分Table 2 Active components of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex

图2 黄连-厚朴活性成分靶点与UC 差异基因靶点的韦恩图Fig.2 Venn diagram of targets of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex active components and UC differential genes

2.1.3 GO 功能和KEGG 通路富集分析 GO 功能富集分析如图4 所示，生物过程（biological process，BP）主要集中在对细胞因子介导的信号通路、炎性反应的调节、细胞程序性死亡的正向调节等；细胞 组成（cellular component，CC）主要集中在细胞膜、肥大细胞颗粒、基底外侧质膜等；分子功能（molecular function，MF）主要表现在碳酸盐脱水酶活性、蛋白激酶活性、氧化还原酶活性等。KEGG通路富集分析如图5 所示，主要参与过氧化物酶体增殖物活化受体（peroxisome proliferator-activated receptor，PPAR）信号通路、核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）和PI3K-Akt 信号通路等。

2.2 实验验证

2.2.1 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平和MPO 活性的影响 如表3所示，与对照组比较，模型组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平和MPO 活性显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，各给药组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平和MPO 活性显著降低（P＜0.01），尤其以黄连-厚朴配伍组最佳，提示黄连-厚朴配伍对UC 大鼠的抗炎作用优于单用黄连、厚朴。

2.2.2 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠质量/长度、脾脏指数和CMDI 评分的影响 如表4 所示，与对照组比较，模型组大鼠结肠质量/长度、脾脏指数和CMDI 评分均显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，各给药组结肠质量/长度、脾脏指数和CMDI评分均显著降低（P＜0.01），尤其以黄连-厚朴配伍组最佳，提示黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠黏膜的保护作用优于单用黄连、厚朴。

图3 黄连-厚朴活性成分靶点与UC 特征性基因靶点的PPI 网络Fig.3 PPI network of targets of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex active components and UC characteristic genes

图4 GO 功能富集分析Fig.4 GO function enrichment analysis

图5 KEGG 通路富集分析Fig.5 KEGG pathway enrichment analysis

表3 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平和MPO 活性的影响 ( ± s , n=8)Table 3 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on IL-1β, IL-6, TNF-α levels and MPO activity in serum of UC rats ( ± s , n=8)

表3 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平和MPO 活性的影响 ( ± s , n=8)Table 3 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on IL-1β, IL-6, TNF-α levels and MPO activity in serum of UC rats ( ± s , n=8)

与对照组比较：##P＜0.01；与模型组比较：**P＜0.01，下表同##P < 0.01 vs control group; **P < 0.01 vs model group, same as below tables

组别 剂量/(g·kg−1) IL-1β/(pg·mL−1) IL-6/(pg·mL−1) TNF-α/(pg·mL−1) MPO/(U·L−1) 对照 — 447.56±31.04 23.84±1.92 184.50±14.80 306.20±46.31 模型 — 865.38±15.48## 57.93±2.76## 389.28±17.91## 675.79±42.78## 黄连 2 577.95±26.93** 34.89±3.50** 275.14±25.03** 450.71±59.64** 厚朴 2 585.65±26.93** 38.10±3.13** 295.30±15.35** 502.74±34.04** 黄连-厚朴配伍 4 537.26±45.96** 31.72±3.05** 249.44±25.19** 394.63±19.20** 柳氮磺胺吡啶 0.4 623.49±32.17** 45.41±3.21** 318.04±14.72** 546.85±38.44**

表4 黄连-厚朴对UC 大鼠结肠质量/长度、脾脏指数和CMDI 评分的影响 ( ± s , n=8)Table 4 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on colon weight/length, spleen index and CMDI score in UC rats ( ± s , n=8)

表4 黄连-厚朴对UC 大鼠结肠质量/长度、脾脏指数和CMDI 评分的影响 ( ± s , n=8)Table 4 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on colon weight/length, spleen index and CMDI score in UC rats ( ± s , n=8)

组别 剂量/(g·kg−1) 结肠质量/长度/(g·cm−1) 脾脏指数/% CMDI 评分 对照 — 0.12±0.01 0.18±0.04 0.25±0.46 模型 — 0.25±0.04## 0.32±0.04## 5.75±0.46## 黄连 2 0.14±0.01** 0.24±0.02** 2.25±0.46** 厚朴 2 0.15±0.02** 0.25±0.02** 2.38±0.52** 黄连-厚朴配伍 4 0.13±0.01** 0.24±0.04** 1.75±0.46** 柳氮磺胺吡啶 0.4 0.14±0.02** 0.25±0.02** 2.63±1.19**

2.2.3 黄连-厚朴配伍对UC大鼠结肠组织病理变化的影响 如图6 所示，对照组大鼠结肠组织腺体排列整齐，组织结构完整，无充血、坏死和水肿等组织病理损伤变化；模型组大鼠结肠组织出现严重肠上皮损伤、隐窝萎缩或缺失，黏膜坏死，坏死区域原有组织结构消失，细胞水肿并伴有大量的炎性细胞浸润；各给药组大鼠结肠组织上皮损伤和炎性细胞浸润减少，隐窝炎、组织水肿和坏死现象改善，其中黄连-厚朴配伍组大鼠结肠组织仅出现轻度的肠上皮损伤和少量炎性细胞浸润。如表5 所示，与对照组比较，模型组大鼠组织病理损伤评分显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，各给药组组织病理损伤评分显著降低（P＜0.01），尤其以黄连-厚朴配伍组最佳，提示黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠黏膜的保护作用优于单用黄连、厚朴。

图6 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠组织病理变化的影响 (HE, ×100)Fig.6 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on colonic pathological changes in UC rats (HE, × 100)

表5 黄连-厚朴配伍对UC大鼠结肠组织病理损伤评分的影响 ( ± s , n=5)Table 5 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on pathological damage score of colon in UC rats ( ± s , n=5)

表5 黄连-厚朴配伍对UC大鼠结肠组织病理损伤评分的影响 ( ± s , n=5)Table 5 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on pathological damage score of colon in UC rats ( ± s , n=5)

组别 剂量/(g·kg−1) 组织病理损伤评分 对照 — 0.80±0.25 模型 — 5.80±0.12## 黄连 2 3.00±0.16** 厚朴 2 4.00±0.16** 黄连-厚朴配伍 4 2.80±0.25** 柳氮磺胺吡啶 0.4 2.90±0.29**

2.2.4 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠组织PI3K、Akt 和cleaved Caspase-3 表达的影响 如图7～9 和表6 所示，与对照组比较，模型组大鼠PI3K、Akt、cleaved Caspase-3 阳性表达显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，各给药组大鼠PI3K、Akt、cleaved Caspase-3 阳性表达显著降低（P＜0.01）。

图7 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠组织PI3K 表达的影响 (×400)Fig.7 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on PI3K expression in colon of UC rats (× 400)

2.2.5 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠组织p-Akt、Bcl-2 和cleaved Caspase-3 蛋白表达的影响 如图10 和表 7 所示，与对照组比较，模型组大鼠p-Akt/Akt 和cleaved Caspase-3 蛋白表达水平显著升高（P＜0.01），Bcl-2 蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）；与模型组比较，各给药组大鼠p-Akt/Akt 和cleaved Caspase-3 蛋白表达水平显著降低（P＜0.01），Bcl-2 蛋白表达水平显著升高（P＜0.01）。

3 讨论

UC 是一种慢性非特异性炎性疾病[16]，主要病理特征为结肠黏膜的炎性反应[17]，其病因可能与遗传、免疫、环境刺激等多种因素有关[18-20]。治疗UC的主要药物包括5-氨基水杨酸药物、类固醇和免疫抑制剂等[21-22]，但长期使用不良反应大且费用昂贵，因此需要寻找新的治疗策略。黄连-厚朴配伍源自《普济方》中的“黄连厚朴汤”，方中仅有黄连、厚朴2 味药，对胃肠道疾病具有确切的疗效。本研究结果显示，黄连、厚朴单独或配伍使用均能够显著降低TNBS 诱导的UC 大鼠结肠质量/长度、CMDI评分、脾脏指数和组织病理评分，且黄连-厚朴配伍疗效最佳。本研究结合基因组学和生物信息学分析方法，构建生物信息学和实验药理学的集成模型，从全基因组层面和网络药理学层面对药物与疾病相互关系进行系统全面的分析[23]，从而阐明黄连-厚朴配伍对TNBS 诱导的UC 大鼠的作用机制。结果显示，通过GEO 数据库的基因表达谱数据筛选活动性UC 与健康人结肠组织之间的差异表达基因，共确定了794 个上调的差异表达基因和449 个下调的差异表达基因；KEGG 通路富集分析显示，黄连-厚朴配伍主要通过作用于PPAR 信号通路、NF-κB信号通路和PI3K/Akt 信号通路治疗UC。

图8 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠组织Akt 表达的影响 (×400)Fig.8 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on Akt expression in colon of UC rats (× 400)

图9 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠组织cleaved Caspase-3 表达的影响 (×400)Fig.9 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on cleaved Caspase-3 expression in colon of UC rats (× 400)

表6 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠组织PI3K、Akt 和cleaved Caspase-3 表达的影响 ( ± s, n = 3)Table 6 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on expressions of PI3K, Akt and cleaved Caspase-3 in colon of UC rats ( ± s, n = 3)

表6 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠组织PI3K、Akt 和cleaved Caspase-3 表达的影响 ( ± s, n = 3)Table 6 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on expressions of PI3K, Akt and cleaved Caspase-3 in colon of UC rats ( ± s, n = 3)

组别 剂量/(g·kg−1) A 值 PI3K Akt cleaved Caspase-3 对照 — 1.13±0.80 2.21±0.16 0.54±0.05 模型 — 10.03±1.67## 7.77±0.68## 2.81±0.55## 黄连 2 4.13±0.98** 4.11±0.05** 1.61±0.18** 厚朴 2 5.00±0.53** 5.02±0.33** 2.10±0.10** 黄连-厚朴配伍 4 2.42±0.11** 3.09±0.40** 1.11±0.08** 柳氮磺胺吡啶 0.4 4.18±0.78** 4.13±1.09** 1.81±0.13**

图10 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠组织p-Akt、Bcl-2 和cleaved Caspase-3 蛋白表达的影响Fig.10 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on expressions of p-Akt, Bcl-2 and cleaved Caspase-3 proteins in colon of UC rats

表7 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠组织p-Akt、Bcl-2 和cleaved Caspase-3 蛋白表达的影响 ( ± s , n=6)Table 7 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on expressions of p-Akt, Bcl-2 and cleaved Caspase-3 proteins in colon of UC rats ( ± s , n=6)

表7 黄连-厚朴配伍对UC 大鼠结肠组织p-Akt、Bcl-2 和cleaved Caspase-3 蛋白表达的影响 ( ± s , n=6)Table 7 Effect of Coptidis Rhizoma-Magnoliae Officinalis Cortex on expressions of p-Akt, Bcl-2 and cleaved Caspase-3 proteins in colon of UC rats ( ± s , n=6)

组别 剂量/(g·kg−1) 蛋白相对表达量 p-Akt/Akt Bcl-2/β-actin cleaved Caspase-3/β-actin 对照 — 0.21±0.08 7.63±1.66 0.23±0.12 模型 — 1.00±0## 1.00±0## 1.00±0## 黄连 2 0.46±0.19** 2.41±0.59** 0.28±0.07** 厚朴 2 0.54±0.22** 3.99±1.90** 0.26±0.13** 黄连-厚朴配伍 4 0.28±0.12** 7.38±2.23** 0.19±0.07** 柳氮磺胺吡啶 0.4 0.24±0.14** 4.79±1.84** 0.11±0.14**

炎性细胞因子的释放和中性粒细胞的分泌是UC 的重要特征，常用于评估UC 的疾病活动[24]。促炎细胞因子如TNF-α、IL-6 和IL-1β 的分泌在UC的发展中起着重要作用[25]。本研究结果显示，黄连、厚朴单用及配伍均能够显著抑制UC 大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β 水平和MPO 活性，且黄连-厚朴配伍疗效最佳，表明黄连-厚朴配伍能够抑制促炎细胞因子和相关炎性标志物的表达。细胞因子的释放与PI3K/Akt 信号通路密切相关[26-27]。PI3K 由催化结构域P110 和调节结构域P85 组成，活化后进一步磷酸化Akt，从而发生信号转导[28-30]。本研究结果显示，黄连、厚朴单用及配伍能够抑制大鼠结肠组织中PI3K、Akt 的阳性表达，并抑制p-Akt 蛋白表达水平。PI3K/AKT 参与细胞凋亡、自噬和增殖等多种生物学过程[31-32]。本研究结果显示，黄连、厚朴单用及配伍能够上调Bcl-2 蛋白表达水平，降低cleaved Caspase-3 蛋白表达水平，从而发挥抗凋亡作用。

综上所述，本研究发现黄连、厚朴单用或配伍使用能够通过抑制PI3K/Akt 信号通路，从而发挥对UC 大鼠的肠黏膜保护、抗炎和抗凋亡作用，其中黄连-厚朴配伍疗效最佳，体现了中药“相使”增效的配伍关系。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突