不同糖化血红蛋白临床检验方法检测结果的相关性和一致性评价

朱秀霞 （第一作者），潘晓芳 （第一作者），吴静标，张润锋，黄宇哲，钟乘坊 （通信作者）

1广东省医疗器械质量监督检验所 （广东广州 510663）；2江西省赣州市赣县区人民医院（江西赣州 341100）

糖化血红蛋白（glycosylated hemoglobin，HbA1c）是典型的糖基化蛋白，能够反映受试者测定前120 d的平均血糖水平，可用于糖尿病早期诊断和病后血糖监测［1－3］。与血糖相比，HbA1c具有生物学变异性小、不易受血糖波动影响、无需空腹或特定时间取血、分析前稳定性高等特点。WHO糖尿病学会和许多国家的糖尿病学会均将HbA1c作为诊断糖尿病的首选指标［3］。

《体外诊断试剂注册管理办法》（原国家食品药品监督管理总局令第5号）第十七条规定，根据产品风险程度的高低，将体外诊断试剂依次分为第三类、第二类、第一类产品。HbA1c检测试剂（盒）属于第二类产品中的第4小类，按二类产品进行管理［4］。目前，临床实验室普遍采用的HbA1c检验方法主要有基于HbA1c与非HbA1c所带电荷不同的离子交换层析法和电泳法，以及基于HbA1c与非HbA1c结构不同的免疫法、亲和层析法及酶法［3］。不同检验方法所依据的原理各不相同，所测组分亦不同，如离子交换色谱法测定的为HbA1c，亲和层析法测定的为总HbA1c，国际临床化学与医学实验室联盟 （International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine，IFCC）及“美国国家HbA1c标准化计划（National Glycohemoglobin Standardization Program，NGSP）” 均规定以“HbA1c”结果报告［3］。

NGSP将高效液相色谱法作为测定HbA1c的参考方法，其也是测定HbA1c的指定比对方法［5］。ARKRAY Factory，Inc.公司的高效液相色谱系统已被广泛应用于我国大型医院中，在国内具有较高的市场占有率，检测HbA1c的效果较好［6－8］。基于此，本研究以ARKRAY Factory，Inc.检测系统为对照系统，分析高效液相色谱法、硼酸亲和色谱层析法、免疫比浊法与ARKRAY Factory，Inc.检测系统测定HbA1c结果的相关性及一致性，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 仪器和试剂

高效液相色谱法（A考核系统）：仪器为全自动糖化血红蛋白分析仪（广东优尼德生物科技有限公司，型号：HA－120），试剂均由广东优尼德生物科技有限公司提供，分别为HbA1c洗脱缓冲液A试剂盒（高效液相色谱法）和HbA1c洗脱缓冲液B试剂盒（高效液相色谱法）、HbA1c溶血剂、HbA1c校准品、HbA1c质控品。

硼酸亲和色谱层析法（B考核系统）：仪器为特定蛋白分析仪（广东优尼德生物科技有限公司，型号：UNT5000），试剂均由广东优尼德生物科技有限公司提供，分别为HbA1c检测试剂盒 （硼酸亲和色谱层析法）、HbA1c质控品。

免疫比浊法（C考核系统）：仪器为全自动生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，型号：迈瑞BS800M），试剂均由广东优尼德生物科技有限公司提供，分别为HbA1c测定试剂盒（酶法）、HbA1c校准品、HbA1c质控品。

ARKRAY Factory，Inc.检测系统（D对照系统）：仪器为全自动糖化血红蛋白分析仪（ARKRAY Factory，Inc.，型号：HA－8180），试剂均由ARKRAY Factory，Inc.提供，分别为洗脱缓冲液ELUENT 80A（高效液相色谱法）和洗脱缓冲液ELUENT 80B（高效液相色谱法）、HbA1c溶血剂、HbA1c校准品、HbA1c质控品。

1.2 样本和方法

选取118份静脉全血样本（来自糖尿病患者和普通血糖测试者）作为检测样本，分别采用A、B、C考核系统和D对照系统单次检测所有样本，操作均按照对应仪器的说明书开展，检测前，确保仪器已经校准且室内质控在控，检测后，分别计算A、B、C考核系统和D对照系统检测的HbA1c含量。

2 检验原理

2.1 高效液相色谱法

依据样本中各组分蛋白所带电荷不同，分离HbA1c与其他蛋白组分。不带正电荷的HbA1c首先被快速洗脱下来，带正电荷的非糖基化血红蛋白（non－glycated hemoglobin，HbA0）最后被洗脱下来。不同血红蛋白组分经比色计检测得到对应的吸光度值，根据Lambert－Beer定理，便可计算各成分的含量，从而计算HbA1c占总血红蛋白的百分比。

2.2 硼酸亲和色谱层析法

样本与红细胞裂解液反应后，红细胞发生裂解，蓝色的硼酸盐化合物与HbA1c的顺式二醇配合物相结合形成蓝色HbA1c，其余的血红蛋白转变为红色沉淀，使用分析仪分别检测蓝色（HbA1c）和红色（血红蛋白）的颜色强度进行定量分析，从而测定样本中HbA1c占总血红蛋白的百分比。

2.3 免疫比浊法

样本中的HbA1c与胶乳、HbA1c特异性单克隆抗体结合形成胶乳－HbA1c－HbA1c特异性单克隆抗体的复合物，此复合物由于羊抗鼠lgG抗体而形成凝集，凝集量与胶乳表面固相化的HbA1c的量有关，样本吸光度代入HbA1c校准曲线后，可反推出样本中HbA1c占总血红蛋白的百分含量。

3 结果

参照《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》、《北京市第二类体外诊断试剂临床试验指导原则（2016版）》、EP9－A《Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples》等法规性文件［9－11］，对A、B、C考核系统和D对照系统测定HbA1c的结果进行线性相关性和Bland－Altman分析。

3.1 线性相关性分析

依据《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》［9］，以A与D、B与D、C与D两两检测系统为一组研究对象，用EXCEL 2013作散点图［11］（见图1），由图1可知，R2（A与D为0.9763、B与D为0.9995、C与D为0.9848）均＞0.95，表明A与D、B与D、C与D两两检测系统间的检测结果均具有良好的线性关系。

图1 A与D、B与D、C与D两两检测系统间检测HbA1c结果的散点图

3.2 Bland－Altam分析

以A与D、B与D、C与D两两检测系统检测结果比值的均值为横坐标，比值为纵坐标，用MedCalcv19.0.7医学统计软件进行分析和作图［12］，结果见表1和图2。A与D、B与D、C与D分别只有0、4.24% （5／118）、1.69% （2／118）的点（均＜5%）在95%一致性界限以外，大多数检测结果均在d－1.96SD～d＋1.96SD以内。A与D、B与D、C与D 的95% 一致性界限分别为 （0.920，1.084）、（1.030，1.057）、（0.942，1.079），均在LoA的可信区间范围内，即对于大多数样本，A与D、B与D、C与D的测量结果相差8.0%～8.1%、3.0% ～5.7%、5.2% ～7.9%，此差异在临床上均可接受，因此，A与D、B与D、C与D两两检测系统的检测结果一致性良好，检测结果可以互换。

表1 Bland－Altam分析数据

图2 A与D、B与D、C与D检测系统间HbA1c检测结果的Bland－Altman图

4 结论

A与D、B与D、C与D检测系统的检测结果具有良好的线性相关性和一致性，A、B、C考核系统均可代替ARKRAY Factory，Inc.分析系统检测HbA1c，但因不同分析系统采取的检测原理不同，干扰因素亦不同，临床上应根据可能存在的干扰因素，选择合适的分析系统，以获得准确的检测结果，为临床工作提供更好的支持。