日粮中添加NCG对蛋鸡抗氧化能力及蛋黄脂肪酸组成的影响

马 巍， 王金凤， 鲁 怡， 王春强， 李德生

（锦州医科大学畜牧兽医学院，辽宁锦州121000）

精氨酸（Arg）在动物体内发挥着重要作用，但在家禽体内无法合成，只能由饲粮添加，因此在家禽的饲养中容易出现精氨酸的缺乏。N-氨甲酰谷氨酸（NCG）作为精氨酸内源合成激活剂，不仅化学合成方便，而且价格仅为精氨酸的10%，因此越来越受到人们的关注（林丽花等，2012）。NCG是N-乙酰谷氨酸（NAG）类似物，可替代NAG参与到动物体内尿素循环过程中，能激活肠细胞中二氢吡咯-5-羧酸合成酶（P5CS）和氨甲酰磷酸合成酶-1（CPS-1）的活性，促进谷氨酰胺或者脯氨酸合成瓜氨酸，从而合成内源性精氨酸（Wu等，2004）。NCG通过促进精氨酸内源合成，能增强动物的繁殖力，促进动物生长和发育（孙红暖等，2013）。Zhang等（2020）研究发现，在孵化后期对鸡胚进行羊膜注射NCG处理后，可提高育成鸡肌肉的过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性，丙二醛（MDA）含量降低，从而增强肌肉的抗氧化能力。Xiao等（2016）研究发现，饲粮中添加NCG能显著提高CAT活性和GSH含量，降低MDA含量，可以有效提高氧化应激下大鼠空肠的抗氧化状态，并维持其形态结构。Cao等（2016）研究在氧化应激下补充精氨酸和NCG对大鼠肝脏和血浆抗氧化状态的影响发现，补充1%水平的精氨酸和0.1%水平的NCG可以部分保护肝脏和血浆免于氧化应激，并且0.1%水平的NCG能更有效地减轻大鼠的氧化应激。

目前，对NCG的研究多集中于哺乳动物，对于家禽中应用的研究较少；蛋鸡养殖在我国的畜禽生产中分布较为广泛，但由于饲养管理以及环境因素等问题的影响，使得蛋鸡的产蛋高峰期较短，这也严重影响了养殖效益，如何延长产蛋高峰，或对于产蛋后期蛋鸡如何饲养，成为了蛋鸡生产的一个研究热点。因此，本试验旨在研究饲粮中添加NCG对产蛋后期蛋鸡抗氧化指标以及蛋黄脂肪酸组成的影响，以期为NCG在蛋鸡生产中的应用提供新的思路和参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料 选取180只45周龄健康且体重相近的京红1号商品蛋鸡。基础日粮组成及营养水平见表1。试验所使用NCG（纯品）由安徽普盛药业有限公司提供。

表1 日粮组成及营养水平（干物质基础）

1.2 试验设计与饲养管理 将180只蛋鸡随机分为4组，对照组（C组）和3个水平的NCG处理组（N1、N2、N3组），每组3个重复，每个重复15只鸡。C组饲喂基础饲粮，NCG处理组分别饲喂添加0.08%、0.12%、0.16%NCG的试验饲粮。 试验鸡采用舍内单笼饲养，定量采食（每只鸡120 g/d），自由饮水，光照（16 L：8D）。试验期共计14周，第1周为预试验，第2周开始正式试验。在试验第14周，收集各组鸡蛋，对蛋黄的成分进行分析，主要测定蛋黄中脂肪酸、甘油三酯（TG）和总胆固醇（T-CHO）的含量。在试验结束后，各组随机选取4只蛋鸡进行屠宰，采集血液、肝脏和肠道组织用于抗氧化能力的测定。

1.3 样品采集

1.3.1 血浆样品采集 试验结束后，各组随机选择4只鸡用于血样的采集。翅下静脉采血后离心，分离血浆置于液氮中冷藏备用。

1.3.2 肝脏及肠道样品采集 试验结束后，各组随机选取4只母鸡进行屠宰，立即分离肝脏和各个肠段，分别采集2 g肝脏组织和2 g肠道（十二指肠、盲肠）黏膜组织，立即置于液氮中保存备用。

1.4 指标测定及方法

1.4.1 抗氧化能力测定 采用硝酸还原酶法测定血浆、肝脏、十二指肠和盲肠的NO含量；比色法测定血浆和肝脏NOS活性；羟胺法测定血浆、十二指肠和盲肠T-SOD活性；钼酸铵法测定肝脏CAT活性；比色法测定肝脏GSH-PX活性；试验所用试剂盒均购自南京建成科技有限公司。

1.4.2 蛋黄脂肪酸组成及含量测定 通过对蛋鸡抗氧化水平及课题组前期研究中生产数据的综合分析，发现饲粮中添加0.08%水平的NCG（N1组）对产蛋后期蛋鸡抗氧化水平和生产性能的促进作用最为明显，故本试验利用气相色谱法对N1组和C组的蛋黄脂肪酸进行测定。

1.4.3 蛋黄TG、T-CHO含量的测定 采用GPOPAP酶法测定蛋黄中TG含量，采用COD-PAP法测定蛋黄中T-CHO含量，所用试剂盒均购自南京建成科技有限公司。

1.5 统计分析 各项指标检测至少重复3次，结果用SPSS 21.0软件对试验数据进行单因素方差分析，并多重比较，数据以“平均值±标准差”表示，P＜0.05时表示具有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 NCG对产蛋后期蛋鸡抗氧化能力的影响

2.1.1 NCG对产蛋后期蛋鸡血浆抗氧化指标的影响 由表2可知，N2组血浆中NO含量较对照组提高108.62%（P＜0.05），N2组和N3组血浆中NOS活力分别较对照组提高14.75%、18.48%（P＜0.05）；N1组血浆中T-SOD的活力较对照组提高18.51%（P＜0.05），其余各组无显著差异（P＞0.05）。

表2 NCG对产蛋后期蛋鸡血浆抗氧化指标的影响

2.1.2 NCG对产蛋后期蛋鸡肝脏抗氧化指标的影响 由表3可知，N2组肝脏中NO含量较对照组提高77.96%（P＜0.05），N1组肝脏NOS活力略高于对照组，N2组和N3组NOS活力略低于对照组（P＞0.05）；处理组肝脏中CAT的活力均略高于对照组，且随着NCG浓度的增加而增加（P＞0.05）；处理组肝脏中GSH-PX的活力均略低于对照组（P＞0.05）。

表3 NCG对产蛋后期蛋鸡肝脏抗氧化指标的影响

2.1.3 NCG对产蛋后期蛋鸡肠道抗氧化指标的影响 由表4可知，N2组和N3组十二指肠NO含量分别较对照组降低31.35%、20.32%（P＜0.05）；N3组十二指肠T-SOD的活力较对照组降低5.64%（P＜0.05）；N1组和N3组盲肠NO的含量分别较对照组提高256.45%、132.26%（P＜0.05），N2组盲肠T-SOD的活力较对照组降低20.16%（P＜0.05）。

表4 NCG对产蛋后期蛋鸡肠道抗氧化指标的影响

2.2 NCG对产蛋后期蛋鸡蛋黄脂肪酸组成的影响

2.2.1 NCG对产蛋后期蛋鸡蛋黄中饱和脂肪酸（SFA）组成及含量的影响 由表5可知，蛋黄中共检测出17种SFA，其中N1组蛋黄中的辛酸（C8:0）含量较对照组提高140.00%（P＜0.05），N1组珍珠酸（C17:0）的含量较对照组降低17.72%（P＜0.05），其他SFA含量在两组间差异均不显著（P＞0.05）。

表5 NCG对产蛋后期蛋鸡蛋黄中SFA含量的影响 %

2.2.2 NCG对产蛋后期蛋鸡蛋黄中不饱和脂肪酸（UFA）组成及含量的影响 由表6可知，蛋黄中共检测出18种UFA，其中N1组十七碳烯酸（C17:1）的含量较对照组降低14.29%（P＜0.05），而N1组中共轭亚油酸（C18:3 n6）、α-亚油酸（C18:3 n3）、二十碳二烯酸（C20:2）、花生四烯酸（C20:4 n6）、廿碳五烯酸（C20:5）、二十二碳二烯酸（C22:2）、二十四（碳）烯酸（C24:1）和二十二碳六稀酸 （C22:6）的含量分别较对照组提高38.04% 、42.33% 、24.04% 、7.49% 、75.00% 、625.00%、8.70%和27.11%（P＜0.05），其他UFA在两组间差异均不显著（P＞0.05）。

表6 NCG对产蛋后期蛋鸡蛋黄中UFA含量的影响 %

2.2.3 NCG对产蛋后期蛋鸡蛋黄中总脂肪酸含量的影响 通过对蛋鸡蛋黄中脂肪酸含量的测定发现，蛋黄中含量最高的5种脂肪酸为油酸（C18:1）、十 六（烷）酸（C16:0）、亚 油 酸（C18:2）、十 八（烷）酸（C18:0）和棕榈油酸（C16:1），且浓度从高到低依次排列，其中两种为SFA，三种为UFA。由表7可知，N1组蛋黄中SFA总含量略低于对照组，UFA总含量略高于对照组，但均无显著差异（P＞0.05）。

表7 NCG对产蛋后期蛋鸡蛋黄中总脂肪酸含量的影响 %

2.3 NCG对产蛋后期蛋鸡蛋黄中TG、T-CHO水平的影响 由表8可知，处理N1、N2、N3组蛋黄中TG的含量分别较对照组提高32.18%、27.41%、31.12%（P＜0.05）；处理组各组和对照组间蛋黄中T-CHO的含量差异均不显著（P＞0.05），其中N2组的T-CHO含量略高于对照组。

表8 NCG对产蛋后期蛋鸡蛋黄TG、T-CHO水平的影响 mmol/g prot

3 讨论

3.1 NCG对产蛋后期蛋鸡抗氧化能力的影响动物在氧化反应及环境等因素的影响下，机体会产生一些不稳定“自由基”，过量会危害动物的健康。抗氧化是指抗氧化自由基，即以低浓度存在便能有效抑制自由基氧化反应的物质，动物机体的抗氧化水平则是衡量动物健康的重要指标。在家禽体内，NO发挥着重要的作用，有研究表明，其在鸡炎症的发病机制中起着关键作用，并且与内毒素所致的组织损伤密切相关（Inkanuwat等，2019）。鸡血液中NO和硝酸盐的稳定浓度是NO合成和清除代谢废物（氧化、其他组织消耗和排泄）之间动态平衡的结果，由于NO的氧化主要发生在血液中，因此在其他组织中，NO供体的分解和NO的氧化也决定了这些组织的性质，特别是NO生理靶点的存在（Titov等，2020）。本试验测定了产蛋后期蛋鸡血浆NO、NOS、T-SOD等指标的含量和活力，发现NCG能影响产蛋后期蛋鸡血浆中NO含量及抗氧化能力，但存在剂量和部位依赖效应，因为精氨酸是NO的合成底物，所以也间接说明相较于对照组，处理组蛋鸡体内精氨酸的含量增多，这与张桂杰等（2015）的研究结果相类似。本试验结果表明，N2组血浆中NO含量较对照组提高108.62%（P＜0.05），处理组肝脏中CAT活力与对照组均差异不显著，但处理组肝脏中CAT的活力随NCG浓度增加而增加。N2组和N3组十二指肠NO含量分别较对照组降低31.35%、20.32%（P＜0.05），N1组和N3组盲肠NO的含量分别较对照组提高256.45%、132.26%（P＜0.05）。说明饲粮添加NCG能提高产蛋后期蛋鸡肝脏和血浆抗氧化水平，但对肠道，尤其是对十二指肠的抗氧化水平有一定的抑制作用，其作用机制有待进一步研究。

3.2 NCG对产蛋后期蛋鸡蛋黄中脂肪酸、TG和T-CHO水平的影响 脂肪酸是细胞中一类重要的脂质分子，参与体内诸多生物学过程。研究证明，人类膳食中脂肪酸组成是影响其机体健康的重要因子，饱和脂肪酸和胆固醇的摄入量过多会引发炎症反应和胰岛素抵抗（张蓉等，2019）。而多不饱和脂肪酸（PUFA）则具有正向的生物学功能。近年来研究成果表明，饲粮中添加一定浓度NCG对哺乳动物体内脂肪酸具有一定调控作用，但NCG对禽类的影响少有研究。Ye等（2017）研究发现低蛋白质水平饲粮中添加NCG能有效增加猪背最长肌的肌肉面积，减少背部脂肪的积聚，并生产出具有高亮氨酸含量的功能性猪肉，但对肥育猪的肌肉脂肪酸状况没有负面影响。本试验就NCG对蛋黄脂肪酸的影响进行了研究，结果表明，添加0.08%水平的NCG处理组蛋黄中的共轭亚油酸（C18:3 n6）、α-亚油酸（C18:3 n3）、二十碳二烯酸（C20:2）、花生四烯酸（C20:4 n6）、廿碳五烯酸（C20:5）、二十二碳二烯酸（C22:2）、二十四（碳）烯酸（C24:1）和二十二碳六稀酸（C22:6）的含量分别较对照组提 高38.04%、42.33%、24.04%、7.49%、75.00%、625.00%、8.70%和27.11%（P＜0.05）。蛋黄中不饱和脂肪酸含量增高，因此推测NCG在一定程度上对蛋黄营养成分进行了有利的调控，为后续改善鸡蛋脂肪酸组成的研究提供参考。

李佳佳等（2014）研究发现，高脂血症是指由于脂肪代谢或转运异常使血浆中的一种或几种脂质高于正常值的现象。TG是人体内含量最多的脂类，卫雅芳等（2005）研究发现，一定量的TG对人体具有有益影响，体内大部分组织均可以利用TG的分解产物来提供能量，且可以调节身体机能、维持体温和保护内脏器官。本试验结果表明，处理N1、N2、N3组蛋黄中TG的含量分别较对照组提高32.18%、27.41%、31.12%（P＜0.05），说明饲粮中添加NCG可以提高产蛋后期蛋鸡蛋黄中TG的含量，影响鸡蛋中的营养成分，从而向更有利于人体健康的方面发展，而其中具体的作用机制还有待进一步研究。

4 结论

NCG能提高产蛋后期蛋鸡血浆和肝脏的NO水平及抗氧化能力，但存在剂量和部位依赖效应；0.08%水平NCG能显著提高产蛋后期蛋鸡蛋黄中不饱和脂肪酸和甘油三酯的含量，降低饱和脂肪酸和胆固醇含量。