产前O型血孕妇抗体效价及IgG亚型分型联合检测对ABO-HDN诊断价值研究

钱永生 杨 劲 何安华

ABO血型抗体效价是指自身为O型血其丈夫为非O型血的孕妇，在孕期16周以上针对预防新生儿ABO新生儿溶血病（ABO-HDN）发生的一种检测，可以用标准红细胞或者丈夫的红细胞进行检测。大多数文献[1-2]认为产前抗体效价≥1:64为异常，异常的产前抗体效价可能对胎儿造成伤害[3-4]。国内外均有文献[5-6]报道IgG亚型分型中的IgG1和IgG3抗体存在抗体依赖的细胞介导的细胞毒性效应（ADCC）与IgG2和IgG4存在补体依赖的细胞介导细胞毒性效应（CDC）新生儿溶血病发生上有明显的差异，可能是因为IgG1和IgG3可以通过胎盘进入胎儿体内，发挥ADCC导致红细胞破裂溶血。本次研究通过用微柱凝胶法检测IgG1和IgG3抗体联合 ABO血型抗体效价进行综合分析，为临床预防、诊治ABO-HDN提供参考依据，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年5月-2019年4月在本医院产科门诊检测产前抗体效价O型血其丈夫为非O型血孕妇388例（本次研究使用的是丈夫红细胞），符合入组标准的84例。84例孕妇年龄21~40岁，检测时孕期16~30周，胎次1~2次，孕次1~4次。

1.2 入组标准 ①孕妇16~30周在我院门诊产科检测抗丈夫红细胞抗体效价，同时检测IgG1、IgG3抗体。②在我院产科住院生育新生儿。③孕妇在孕产期无重大疾病（如肿瘤、自身免疫性疾病等），新生儿无早产或其他遗传疾病。④孕妇RhD抗原为阳性，其不规则抗体为阴性。⑤孕妇产前24 h检测抗丈夫效价与孕期效价变化不大于2个滴度。⑥孕期内无服用降效价中药。

1.3 试剂与仪器 ①试剂：抗A抗B血型正定型试剂、人ABO血型反定型红细胞、抗体筛查红细胞、RhD-IgM定型试剂和样品释放剂（2-巯基乙醇）来自上海血液生物医药有限公司；IgG1、IgG3抗体微柱凝胶法检测卡、新生儿溶血检测试剂、HDN母体IgG效价检测卡和相关检测质控试剂来自长春博迅生物技术有限公司。所有试剂均在生产效期内使用。②仪器：LC-10C型血库专用离心机来自于安徽中科中佳医用仪器公司；TD-A型卡式医用离心机和FYQ型试剂卡孵育器来自于长春博研科学仪器有限责任公司。

1.4 方法

1.4.1 ABO血型正反定型、RhD抗原检测、不规则抗体检测、新生儿溶血病检测（直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验和抗体释放试验）均严格按照说明书与相关规范和文献进行[7]。

1.4.2 抗丈夫红细胞效价检测 首先用样本释放剂对孕妇血浆进行IgM灭活，灭活后用中性胶检测IgM是否被完全灭活。再用生理盐水将丈夫红细胞稀释到0.8%取50 μL，与灭活后的孕妇血浆（1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128及1:256）50 μL，加入到HDN母体IgG效价检测卡中孵育15分钟，离心判读结果。

1.4.3 孕妇IgG1、IgG3抗体检测 首先用样本释放剂对孕妇血浆进行IgM灭活，灭活后用中性胶检测IgM是否被完全灭活。在IgG分型卡中每孔分别加入浓度0.8%父亲或与父亲同型红细胞悬液50 μL，再每孔分别加入灭活后血浆50 μL，用微柱凝胶孵育器37 ℃孵育15分钟，孵育完成后用血型血清学专用离心机离心，判读结果。

1.5 结果判读 上述试验按照《免疫血液学》[8]、《全国临床检验操作规程》[9]进行判读结果。

1.6 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件（中文版）进行数据处理，计数资料采用卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 孕妇IgG1、IgG3抗体同时存在在诊断新生儿ABO-HDN的诊断价值 以孕妇IgG1、IgG3抗体同时存在分组：同时存在组47例重发生ABOHDN17例，发生率为36.2%；剩余组37例重发生ABO-HDN 3例，发生率为8.1%，两组间差异有统计学意义（χ2=8.987，P=0.003），见表1。

表1 孕妇16~30周IgG1、IgG3抗体与ABO-HDN发生关系

2.2 孕妇IgG1、IgG3抗体同时存在联合红细胞抗体效价在新生儿ABO-HDN的诊断价值 ①以孕妇IgG1、IgG3抗体同时存在且红细胞效价≥1:64分组，同时存在且效价≥1:64组40例发生ABOHDN 14例，发生率35%；剩余组44例，发生ABOHDN 6例，发生率13.6%，两组间差异有统计学意义（χ2=5.271，P=0.022）。②以孕妇IgG1、IgG3抗体同时存在且抗丈夫红细胞效价≥1:128分组，同时存在且效价≥1:128组27例中发生ABO-HDN 7例，发生率为25.9%；剩余组57例中发生ABOHDN 13例，发生率为22.8%，两组间差异无统计学意义（χ2=0.098，P=0.754），见表2和表3。

表2 孕妇16~30周IgG1、IgG3抗体联合红细胞抗体效价≥1:64与ABO-HDN发生关系

表3 孕妇16~30周IgG1、IgG3抗体联合红细胞抗体效价≥1:128与ABO-HDN发生关系

3 讨 论

ABO-HDN是一种母婴不合发生的胎儿或新生儿的疾病，可以导致新生儿黄疸、贫血及水肿，严重时可以发展为核黄疸、死胎或者新生儿死亡[10-11]。新生儿溶血病的发生与许多因素有关，如新生儿红细胞抗原的强弱；孕妇抗A(B)或丈夫红细胞抗体效价；血型物质通过胎膜屏障的能力；孕妇IgG亚型等。目前在新生儿溶血病的预估中最多使用的是检测孕妇抗A（B）或抗丈夫红细胞抗体效价[12]，但在2018年7月第八版的妇产科学[13]的孕妇产前检查已经不在提及孕妇抗A(B)效价，所以孕妇产前检出高效价未必导致ABO-HDN的发生。

有文献报道[14-15]Rh新生儿溶血病（Rh-HDN）的发生与IgG亚型IgG1、IgG3抗体含量有关，IgG1和IgG3容易通过胎膜屏障，进入胎儿血液循环与胎儿的红细胞上抗原发生反应，导致Rh-HDN并且新生儿病情与IgG1和IgG3抗体的含量呈正相关。但ABO-HDN发生与IgG1和IgG3抗体有关的文献较少，本次研究使用微柱凝胶法检测IgG1和IgG3抗体联合抗丈夫红细胞效价按三种不同的分析方法与ABO-HDN的关系。

本次研究的84例孕妇中IgG1和IgG3抗体同时存在的48例，发生ABO-HDN 16例与其他IgG1抗体单独存在和无IgG1和IgG3抗体存在有明显的差异。说明IgG1和IgG3抗体同时存在与ABOHDN密切相关与马印图等[16]报道用微柱凝胶法检测IgG亚型结论一致。本次研究发现发生新生儿高胆红素血症在与IgG1单独存在没有差别（共发生18例其中IgG1和IgG3抗体同时存在9例，发生率为18.8%；IgG1单独存在10例，发生率为28.6%，与夏爱军等[17]报道不相符，说明IgG1和IgG3抗体同时存在在诊断ABO-HDN的特异性高于新生儿高胆红素血症。

综上所述，在孕妇产前用微柱凝胶法检测IgG1和IgG3抗体在预估ABO-HDN发生的特异性是产前检测方法上最高的。IgG1抗体单独存在在84例孕妇中有83例，发病率为24.1%。如果IgG3同时存在发病率可以增加到36.2%，但IgG3单独存在没有发现，可能IgG3单独存在不会发生ABO-HDN，致病关系还是与IgG1有关，IgG3可以起到介导和递进效应。建议ABO血型效价异常的孕妇进行IgG1、IgG3抗体检测，二胎及多胎的孕妇也应完善IgG1、IgG3抗体检测，早发现早预防，从而可以减少ABO-HDN的发生。