冰冻切片和石蜡切片有啥不同

复旦大学附属肿瘤医院病理科 赵 靓 吕 泓

组织病理诊断在肿瘤治疗的过程当中起到了至关重要的作用，它被称之为诊断的“金标准”，不论是术前的手术方式、术中的手术范围还是术后的后续治疗决策都与组织病理诊断结果息息相关。而常规的组织病理诊断是通过病理切片来实现的。我们常见的病理切片分别是石蜡切片和冰冻切片。

一、什么是冰冻切片？

冰冻切片病理诊断是组织病理诊断的一种形式，是在外科手术过程中，手术医生送检组织标本，病理医生通过组织标本的快速冰冻切片来诊断送检标本的良、恶性或手术切缘是否干净，从而协助临床医生作出下一步治疗的决策。

冰冻切片是一种在低温条件下使组织冷却到一定硬度，然后进行切片的方法因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。

图1 冰冻切片机

二、冰冻切片是怎么制成的？

1.取材：外科医生切下来的人体组织送到病理科，首先要进行取材，一般取材不能取得太厚，理想厚度为1～2 mm，一般不超过3 mm，通常取几块具有代表性的组织进行制片。组织取材好后，要和病理号放置在一起。

2.包埋：为了防止切片的边缘卷起或者产生皱褶，冰冻载物头上先加入少量OCT（冰冻包埋剂），然后放上组织，将组织完全置入OCT内。

3.组织冰冻时间：一般建议当OCT最表面冻到发白或组织表面凝固后就进行修片。建议根据组织性质，组织大小，厚度，机器温度来确定冰冻时间。比如：脑，-15 ℃；肾、肝、脾，-16 ℃；淋巴结，-16 ℃；甲状腺，-18 ℃；卵巢，-18 ℃；乳腺，-20 ℃；子宫，-20 ℃；脂肪，-35 ℃。

4.切片：一般厚度为6～8μm，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍厚切。而且在修片时应调好角度，切除病灶的最大面。

5.固定：要及时将切好的片子放入冰冻固定液中，避免在空气中放置时间过长。

6.染色：固定数秒→水洗→染苏木30～60秒→水洗→1%盐酸酒精分化→水洗→温水中返蓝→伊红染色10～20秒→脱水→透明→中性树胶封固或者酒精脱水后吹风机吹干→封片。

最后当技术人员做好切片之后，由经验丰富的病理诊断医生快速阅片，出具冰冻诊断报告。

但是由于术中冰冻所取的是具有代表性的组织，因此术中冰冻切片的局限性无法避免，但是它对于一些患者的手术术式和范围选择又起到了决定性作用。做完冰冻剩下的组织将用10%福尔马林固定，然后做成常规石蜡切片，成为“冰剩”切片。对于做过冰冻的那几块组织也会制作成石蜡切片，称为“冰对”切片。

三、那什么是石蜡切片呢？

石蜡切片组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法。

四、那石蜡切片又是怎么制成的呢？

1.取材：用10%福尔马林将送来的标本固定6～12 h以上就会进行取材，取材时还需要再次核对送检者姓名、年龄、性别、送检部位等，病理医生拿着尺子、刀子、镊子、剪子、大头针等在大菜板上研究这些被福尔马林浸泡过的各种标本，描述病变、测量大小、切取组织……为了防止病变漏诊。

图2 脱水机

2.脱水、透明、浸蜡：取好标本放入与患者编号的相对应的包埋盒中，包埋盒按顺序放入特殊材质的脱水篮后进入脱水机，经过梯度酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡等步骤，需要花上1个晚上的时间。

3.包埋：就是把从脱水机里取出的标本，放在包埋模具中让石蜡充分包裹着组织，之后将其放在冷台上等到凝固，然后在冰箱里冻上一会，就制成了蜡块。

图3 未包埋的组织

图4 已包埋好的蜡块

4.切片：在切片机上切出3 μm厚薄左右组织蜡片，放入水中，再用载玻璃切片将组织从水中捞出，并贴上与之相对应的病理号标签。

5.烤片：把刚刚切好的切片放在60 ℃的烤箱中烘烤半小时，让组织牢牢地固定在玻璃切片上。

6.染色：把刚刚烤好的片子放入有二甲苯、酒精、苏木素，伊红试剂的染色机中浸泡上色。

7.封片：在刚刚染完的玻璃切片上滴上树胶，盖上盖玻片。此步骤应避免产生气泡。

此时，石蜡切片就制作完成了。病理医生就能在显微镜下看到切片中不同颜色的组织，通过不同放大倍数的镜头放大组织，来观察组织的不同形态，最后得出精确的诊断结果。

也正是由于组织经过这么多道程序的处理，才使组织能以病理切片的形式长期保存。

图5 石蜡切片机

五、哪些组织不适用做冰冻呢？

1.疑为恶性淋巴瘤的病例；

2.过小的标本 (＜0.2 cm)；

3.术前经过活检仍难以明确诊断者；

4.脂肪组织、骨组织和钙化组织；

5.需要依据核分裂相计数判断良、恶性的软组织肿瘤；

6.主要根据肿瘤生物学行为特征而不能依据组织形态判断良、恶性的肿瘤；

7.已知具有传染性的标本(如结核、病毒性肝炎、艾滋病等)。

images/BZ_31_328_1172_2116_1245.png石蜡切片 冷冻切片应用对象 广泛应用常规制片 手术中的快速病理诊断包埋液 石蜡 OCT保持时间 持久保存 保存时间较短优点1.细胞定位准确2.组织细胞形态结构保存完好3.保存时可放在室温下保存1.简便、快速、用时短2.组织变化不大3.较好的保存抗原活性及酶类4.能很好的保存脂肪、类脂等成分缺点 步骤繁多，制片中抗原活性有所降低 1.不易做连续切片2.切取的组织不能过大

总之，手术中，病理医生通过冰冻切片对组织进行定性诊断，手术医生根据这个诊断做出手术方案的选择。手术后，病理医生对石蜡切片进行细致观察，做出更细致的诊断。由于快速冰冻的局限性，往往只应用于手术方式和手术范围的决策，而石蜡切片则可以提供更细致更准确的诊断信息，例如病变的具体类型、神经脉管侵犯情况等其他信息，从而判断患者的预后、指导术后的辅助治疗等等。

图6 冰冻和石蜡切片的同块组织对比