miR-124与HLA-G在宫颈癌中的表达及变化研究

陶国华，谢 玮，李 荔

南通市第一人民医院检验科，江苏南通 226001

宫颈癌为女性高发的妇科疾病，根据我国妇科肿瘤流行病学调查结果显示，2017年以来宫颈癌的发病率呈逐年升高趋势[1]。人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌发生的关键诱因，属于基因病毒，能够快速增殖和复制[2]。微小RNAs(microRNAs)是一种小分子的非编码RNA，能够通过对DNA片段进行调节，提高细胞的生物活性。miR-124属于microRNAs中的一种，有研究证实其在肺癌中活性降低，在不同恶性肿瘤中表达也有所差异，miR-124在乳腺癌中通过低表达介导SP1信号改变癌细胞活性[3]。人类白细胞抗原G(HLA-G)是机体重要的免疫耐受分子，随着对HLA-G研究深入，人们推测HLA-G与恶性肿瘤免疫逃窜具有相关性[4]。本研究旨在探讨miR-124与HLA-G在宫颈癌中的表达及变化，为临床宫颈癌的诊断提供相关依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年1月至2019年1月本院住院治疗的65例宫颈癌患者作为研究组，年龄28～75岁，中位年龄47岁。纳入标准：(1)根据术后病理结果确诊为宫颈癌；(2)接受术后切除或淋巴扫除治疗；(3)未接受化学治疗；(4)信息齐全。排除标准：(1)合并其他肿瘤；(2)全身感染；(3)接受化学治疗；(4)合并重要器官病变。另选取同期在本院进行子宫肌瘤切除的40例患者作为对照组，年龄25～70岁，中位年龄46岁。两组年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。两组患者和家属均了解本研究内容，且签署知情同意书，本研究经过本院伦理委员会审核批准。

1.2实时荧光定量PCR检测宫颈组织中miR-124相对表达水平 将两组患者宫颈组织常规石蜡包埋、脱蜡、水化处理后加入购自中国深圳子科生物的Trizol试剂进行RNA提取，氯仿溶解。采用购自中国上海昂拉仪器的超微量分光光度计计算RNA纯度，吸光度A280参考范围为0.0～2.0，在上述范围为符合实验标准。采用武汉纯度生物科技有限公司生产的RNA逆转录试剂盒将RNA转录为cDNA。PCR反应条件：98 ℃ 6 min，98 ℃ 28 s，72 ℃ 30 s，80 ℃ 4 min，总计40个循环，以U6为内参，采用2-ΔΔCT计算宫颈组织中miR-124相对表达水平。见表1。

表1 引物序列

1.3化学发光免疫检测血清HLA-G水平 分别抽取两组患者空腹8 h静脉血4 mL，4 000 r/min离心5 min后，利用美国雅培公司生产的化学发光免疫分析仪检测血清HLA-G水平，研究步骤如下：按照仪器说明书制备单抗复合物，采用辣根过氧化物结合到固定的载体上，将两组血清及上述复合物加入链霉亲和素孔板中，37.7 ℃培养1 h，磷酸盐缓冲溶液反复冲洗，加入底物，采用全自动化学发光免疫分析仪检测HLA-G表达水平(波长为425 nm)，检测范围：0.5～300.0 ng/mL。

1.4统计学处理 采用SPSS22.0软件进行统计分析，非正态分布的计量资料以M(P25,P75)表示，组间比较采用非参数Kruskai-Wallis秩和检验，进一步两两比较用Mann-WhitneyU检验。计数资料组间比较采用χ2检验。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)，计算ROC曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度等指标。检验水准α=0.05。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1对照组与研究组miR-124相对表达水平和HLA-G水平比较 研究组宫颈组织中miR-124相对表达水平低于对照组，研究组血清HLA-G水平高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组miR-124相对表达水平和HLA-G水平比较[M(P25,P75)]

2.2研究组不同临床病理指标的miR-124相对表达水平、HLA-G水平比较 研究组宫颈组织中miR-124相对表达水平在国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移、腺体浸润及脉管浸润间比较，差异有统计学意义(P<0.05)；而血清HLA-G水平在FIGO分期、淋巴结转移、脉管浸润间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 研究组不同临床病理指标的miR-124相对表达水平、HLA-G水平比较[M(P25,P75)]

续表3 研究组不同临床病理指标的miR-124相对表达水平、HLA-G水平比较[M(P25,P75)]

2.3miR-124、HLA-G诊断宫颈癌的ROC曲线分析 miR-124+HLA-G联合检测诊断宫颈癌的灵敏度、特异度、AUC均高于miR-124及HLA-G单项检测结果。见表4、图1。

表4 miR-124、HLA-G及两者联合检测对宫颈癌的诊断价值分析

图1 miR-124、HLA-G诊断宫颈癌的ROC曲线分析

3 讨 论

宫颈癌产生及发展是一个多环境、多因素的过程。近些年，随着分子领域研究不断深入，大量miRNA对多种恶性疾病例如乳腺癌、卵巢癌等具有重要作用[5]。HLA-G分子为机体重要的免疫因子，最初被发现具有参与母-胎界面免疫耐受作用，减少排斥反应。

有研究报道，宫颈癌发展过程中存在大量microRNAs异常表达，其中miR-21能够加快宫颈癌生物活性，与miR-466表达相似，而miR-320能够保护宫颈组织，减少癌细胞恶性侵袭，通过调节FOXM1基因发挥作用[6]。熊兴东等[7]研究报道，宫颈癌组织中microRNA-124呈低表达趋势且与癌细胞过度增殖、凋亡不足、侵袭性生长密切相关。王梦洁等[8]研究报道，宫颈癌组织中miR-124水平低于健康宫颈组织，提示miR-124低表达能够加快癌症病变。HLA-G是一种生物活性广泛的免疫指标，其水平升高与Fas受体活化相关，有研究报道，Fas大量活化能够加快T淋巴细胞凋亡，改变多种细胞抗原提呈能力，加快恶性肿瘤细胞发生免疫逃窜[9]。张欣等[10]研究报道，宫颈癌患者血清HLA-G水平高于健康人群。本研究显示，研究组宫颈组织中miR-124相对表达水平低于对照组，研究组血清中HLA-G水平高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。这与LI等[10]研究报道结果相似。

miR-124通过介导宫颈癌细胞发生淋巴结转移与上皮-间充质转化(EMT)活性相关，能够加快癌细胞深层浸润[11]。有研究报道，miR-124能够通过升高PDCD6水平，激活有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路,从而促进宫颈癌转移及迁移[12]。本研究显示，研究组宫颈组织中miR-124相对表达水平在FIGO分期、淋巴结转移、腺体浸润及脉管浸润间比较，差异有统计学意义(P<0.05)，而血清HLA-G水平在FIGO分期、淋巴结转移、脉管浸润间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。这提示HLA-G水平越高，宫颈癌淋巴结转移越快，疾病FIGO分期越高，加快疾病发展。高水平HLA-G能够减弱自然杀伤细胞功能，减少对宫颈癌细胞的免疫监视作用[13]。冷雪娇等[14]研究报道，出现淋巴结转移的宫颈癌患者血清HLA-G升高，说明高水平HLA-G能够加快宫颈癌癌变。本研究miR-124和HLA-G灵敏度较高，ROC曲线评估miR-124联合HLA-G对宫颈癌的诊断价值，提示miR-124、HLA-G能够对宫颈癌诊断提供较高的准确率。王梦洁等[15]研究指出，通过ROC曲线了解到miR-124能够增加诊断宫颈癌的准确性。

综上所述，miR-124与HLA-G水平变化与宫颈癌FIGO分期、淋巴结转移及脉管浸润有关，二者联合检测有望成为宫颈癌诊断的新靶点。