肺炎链球菌临床分离株的临床特点、血清分型及耐药性分析

何义

山东省曹县人民医院检验科，山东菏泽 274400

肺炎链球菌感染是全球性公共卫生问题，据世界卫生组统计，全球每年约有120万人因肺炎链球菌感染性疾病而死亡。肺炎链球菌感染通常会引起肺炎、脑膜炎、菌血症等，临床致死率较高，尤其是对于学龄前儿童及老年人[1]。1965年，美国首次提出青霉素耐药肺炎链球菌（PRSP），后期全球各地不断出现PRSO感染病例，以儿童群体居多，这为临床治疗带来较大困难。1980年，美国肺炎链球菌青霉素耐药性均属于低水平耐药，耐药率小于5.00%。1990年时，青霉素耐药率升高到17.00%，如今已高于30.00%。由此可见，准确掌握肺炎链球菌临床特点、血清分型与耐药性，对肺炎链球菌感染后期防治具有重要作用。鉴于此，该文对该院2019年4月—2020年4月收治的120例患者展开探讨。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择该院收治的120例患者作为该次研究对象，其中男72例，女58例；年龄5～80岁，平均（42.16±3.47）岁。该次研究经该院伦理委员会批准,所选患者、家属均了解且认同该次研究,并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 研究材料、试剂 左氧氟沙星（国药准字H33021415）、万古霉素（国药准字H30222295）、四环素（国药准字H51020049）、红霉素（国药准字H50021705）、克林霉素 （国药准字H20067875）、苯唑西林 （国药准字H20067209）、利福平（国药准字H44022114）、复方新诺明 （国药准字H41023726）、奎奴普汀 （国药准字J20040031）、利奈唑胺（国药准字H20150035），青霉素G药敏试片；肺炎链球菌分离培养基选用血琼脂平板，5%脱纤维绵羊血选用水解酪蛋白琼脂平板，胆盐溶菌，菊糖微量生化管。

1.2.2 标本收集、细菌鉴定 依据临床相关标准实施样本收集、处理及运送。结合菌落特点，挑出可疑菌落，实施革兰染色、胆盐溶菌试验、糖发酵试验、Optochin试验、。

1.2.3 血清分型 以荚膜肿胀分型方法开展肺炎链球菌血清分型，油镜下查看试验结果。阳性判定结果：荚膜涨起，菌体周边薄厚不一，边界清晰，存在无色环状物。

1.2.4 药敏试验 选用含有5%脱纤维绵羊血M-H平板，以0.5麦氏单位作为菌液浓度控制标准；在5%二氧化碳培养箱内（35℃）孵育24 h，参照美国临床与实验室标准协会（CLSI）修订的M100-S24标准对药敏试验结果敏感性进行判断，以1μg苯唑西林检测其青霉素敏感性，对青霉素低于19 mm菌株施用E-test检测，明确青霉素最低抑菌水平，而后判断其对青霉素敏感度。

1.3 观察指标

观察120例患者分离株临床特点、血清分型结果、对不同药物敏感性及耐药性情况。

1.4 统计方法

采用SPSS 24.0统计学软件进行数据分析，计数资料的表达方式为[n(%)]，采用 χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 120株肺炎链球菌临床特点分析

120株肺炎链球菌大多为呼吸道标本，其中，咽与痰试子标本分离共104株菌株，占总体86.67%，血培养分离10株，占8.33%，脓液标本6株，占5.00%。120株肺炎链球菌中92株 （76.67%）为儿科，28株（23.33%）为非儿科；其中，8岁以下患儿81例（67.50%），9～60岁患者12例（10.00%），60岁以上患者27例（22.50%）。

2.2 120株肺炎链球菌血清分型结果分析

120株肺炎链球菌以23F、19F血清型居多，分别占31.67%、20.83%。见表1。

表1 120株肺炎链球菌血清分型结果

2.3 120株肺炎链球菌对不同药物敏感性分析

万古霉素、利奈唑胺及左氧氟沙星对肺炎链球菌敏感性最高，分别占100.00%、100.00%、98.33%。见表2。

表2 120株肺炎链球菌对不同抗菌药物敏感性分析（%）

2.4 不同科室肺炎链球菌耐药率分析

儿科青霉素耐药率和非儿科相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。除青霉素外，儿科、非儿科肺炎链球菌对其他药物耐药率相比，差异无统计学意义 （P＞0.05）。 见表3。

表3 不同科室肺炎链球菌耐药率比较[n(%)]

3 讨论

肺炎链球菌最初是在1881年于狂犬病患儿唾液内提取而出，30.00%儿童与10.00%正常健康成人上呼吸道内均可提取到该种病菌。该病通常分布于鼻咽部，一般条件下不致病。当免疫能力降低时，可在局部发生感染，如急性鼻窦炎、急性中耳炎、扁桃体炎、肺炎等非侵入性疾病，也有一些菌经黏膜抵达血液引起最初无感染位置感染，譬如骨髓炎、脑膜炎、菌血症等侵入性疾病，其致死率能达到20.00%。肺炎链球菌感染性疾病多见于儿童、老年人与体弱者。

该研究中，经对120例患者菌体分离发现，肺炎链球菌多为呼吸道感染，其中，咽与痰试子标本检出率为86.67%，血培养检出8.33%；感染者多为儿童，以8岁以下群体为主，占67.50%。由此可见，肺炎链球菌感染以呼吸道感染居多，好发于儿童群体。

目前，临床上用于肺炎链球菌血清分型的方法较多，该研究应用的为常规血清分型，即依照荚膜成分提出不同抗血清。研究中，120株肺炎链球菌以23F与19F居多，分别占31.67%、20.83%。王乐雨等[2]对河北省肺炎链球菌血清型情况展开研讨，结果显示：血清型主要有19F（9.3%）、14（18.2%）、6A/6B（11.4%）、19A（10.2%），而23F仅占5.7%。陈素菜等[3]研究中报道，肺炎链球菌血清分型以19A（32.56%）、19F（23.26%）、23F（13.95%）居多。 可见肺炎链球菌血清分型存在一定地域差异性。27株无法进行分型，出现该种现象的原因可能和菌株无荚膜存在关联。另外，由于肺炎链球菌接种率的增高，也可能会出现新的血清型。

对青霉素而言，肺炎链球菌耐药性发生机制为细菌细胞壁上青霉素融合蛋白基因出现变异，进而致使肺炎链球菌抗生素亲和力下降，最终发生耐药性[4-5]。国内肺炎链球菌分离有较强地域性和实践性，再加之我国肺炎链球菌分离率较低，并因各医院各地区应用抗菌药方式不同，近几年来临床对肺炎链球菌的青霉素耐药性相关报道也有着明显差异。该研究中，肺炎链球菌的青霉素耐药率为63.33%。目前，临床上借助青霉素防治肺炎链球菌感染已超过于50年，而对青霉素治疗失败案例的相关报道也随之增多。故而，临床上对肺炎链球菌的青霉素敏感性判断标准做出相应改进[6-7]。

当前，国内肺炎链球菌首要耐药问题为高度耐大环内酯药物，从目前被监控的10种常见抗菌药物而言，还未发现对利奈唑胺、万古霉素耐药菌株。另外，肺炎链球菌对奎奴普汀、左氧氟沙星耐药性也较低，分别为2.50%、1.67%，这提示以上药物均可当作临床肺炎链球菌治疗常规药物[8-10]。

因儿童组织器官尚未发育程度，抗生素的不合理应用易造成其体内正常菌落破坏，特别对于新生儿而言。故而，儿童所用抗菌药物方式和成人存在显著差别。该研究中，除青霉素之外，儿科与非儿科常用抗菌药物耐药率相似，这表示患者抗菌药物应用方式不会明显影响到肺炎链球菌耐药性。但在实际应用过程中，还应结合患者和具体情况，合理选择给药方案[11-12]。

综上所述，面对当今肺炎链球菌耐药日益突出的问题，临床上应不断增强肺炎链球菌分离能力，注意监测其耐药性抗原变化，并施以其耐药机制研究，以发现、控制耐药菌株。