炒地龙饮片质量标准研究

高莹莹，孙立丽，曹亮亮，孙阳

（1吉林省吉林市食品药品检验所，吉林 吉林；2吉林国安药业有限公司，吉林 吉林）

0 引言

地龙为钜蚓科动物参环毛蚓(E.Perrier)、通俗环毛 蚓（Chen）、威 廉 环 毛 蚓(Michaelsen)或 栉 盲 环 毛蚓（Michaelsen）的干燥体[1]。生地龙性寒，味咸，有小毒。归肝、脾、膀胱经，具有清热定惊、通络、平喘、利尿之功效。用于高热神昏，关节痹痛，半身不遂，肺热喘咳。主要有平喘、抗凝血、抗肿瘤、降血压等药理作用，所含的蚯蚓解热碱具有良好的解热作用。地龙的平喘降压作用，主要是含有次黄嘌呤、黄嘌呤等核苷酸成分。其中次黄嘌呤具有降压平喘的作用,并有抗组织胺及舒张支气管作用，从而达到止咳平喘的目的。地龙并含有能溶解血栓的蛋白酶，抗血栓的原理是激活纤溶酶原，达到抗血栓的目的[2-4]。经炒制后，主要作用使药物质地酥脆，便于加工粉碎成细粉，降低滋腻之性，可降低腥味，利于服用[5]。目前，《中国药典》2015年版一部未收录炒地龙质量标准，故以地龙的质量标准为参照，制定炒地龙饮片质量标准。

1 实验材料

1.1 仪器

OLYMPUSBX51显微镜；JCX-400Z超声清洗器；A型高效液相色谱仪；SX2-4型箱式电阻炉等。

1.2 试剂

乙 腈 为 色 谱 纯（HoneyWell）；甲 醇 为 色 谱纯（HoneyWell）；正丁醇，冰醋酸，三氯甲烷，甲苯，丙酮，均为分析纯，水为高纯水。

1.3 药物饮片

地龙饮片分别购于河北省安国药材市场，广西容县六五镇温凤村，广西玉林市玉州区城西街，江苏省太仓市沙溪镇中和村等10批次饮片，取10批次地龙饮片，文火炒至表面颜色变深时，取出，晾凉。

2 实验方法与结果

2.1 性状

参照《中国药典》2015年版一部地龙药材性状描述，经炮制后：炒广地龙呈不规则的薄片状段，边缘略卷，具环节，背部棕褐色，腹部黄棕色至棕褐色。略带革质。体轻，质脆。气腥，微具焦香，味微咸。

炒沪地龙多皱缩不平，背部棕褐色至黄褐色。易折断。

2.2 鉴别

2.2.1 显微鉴别

参照《中国药典》2015年版一部地龙药材粉末鉴别特征。粉末灰棕色至深棕色。斜纹肌纤维无色或淡棕色，多稍弯曲，边缘常不平整。表皮细胞呈棕黄色，细胞界限不明显，有暗棕色的色素颗粒。刚毛碎断散在，淡棕色至黄棕色，先端多钝圆，有的表面可见纵裂纹。

2.2.2 薄层鉴别

取本品粉末1g，加水10ml，加热至沸，放冷，离心，取上清液作为供试品溶液。取赖氨酸对照品、亮氨酸对照品、缬氨酸对照品，加水制成每1ml各含1mg、1mg和0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015版四部通则0502）试验，吸取上述四种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，与对照品相应的位置上显相同颜色的斑点。

取本品10批次炒地龙饮片，依法按上述方法实验。

2.2.3 取本品粉末1g，加三氯甲烷20ml，超声处理20min，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。取地龙对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015版四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的荧光主斑点。

取本品10批次炒地龙饮片，依法按上述方法实验。

上述2.2.2和2.2.3薄层鉴别通过不同厂家薄层板、不同人员及耐用性等方法学考察，薄层板分离效果好，专属性强，重现性好，易操作。

2.3 检查

2.3.1 水按照水分测定法测定

结果见表1。

10批次炒地龙饮片测定水分较低，因为炮制后炒地龙较炒前地龙饮片干燥，酥脆，短时间内进行测定，另外，炒地龙测定时室内空气干燥，相对湿度较小，所以实测水分结果偏低。考虑炒制后贮藏时间长短等因素，综合考虑结果制定炒地龙水分限度为10.0%。

2.3.2 总灰分

按照灰分测定法测定。结果见表1。

10批次地龙饮片总灰分在4.49%-9.82%，均值7.9%。炒地龙在4.63%-9.50%，均值7.5%。参考药材限度不得过10.0%，制定炒地龙总灰分不得过10.0%。

2.3.3 酸不溶性灰分

按照灰分测定法测定。结果见表1。

表1 炒地龙饮片水分、灰分、酸不溶性灰分测定结果（%）

10批次酸不溶性灰分在0.60%-4.60%，均值3.5%，参考药材限度不得过5.0%，拟制定炒地龙酸不溶性灰分不得过5.0%。

2.4 浸出物

照水溶性浸出物测定项下的热浸法测定。取供试品粉碎，使能通过二号筛，并混合均匀，取供试品约2g，精密称定，置250ml的锥形瓶中，精密加水100ml，密塞，称定重量，静置1h后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，持续微沸1h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称重。除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（%）。10批样品水溶性浸出物测定结果见表1。

10批炒地龙水溶性浸出物在16.74%-24.43%，均值为19.2%。考虑市场地龙饮片的质量差异较大实际情况，故制定炒地龙的浸出物限度不得少于12.0%。

2.5 黄曲霉毒素含量测定

黄曲霉毒素是毒性极强的剧毒物质[6]。黄曲霉毒素的主要检测方法最初是薄层层析法，后来逐渐发展到高效液相色谱法、微柱法、酶联免疫吸附法等多种方法[7]。

为进一步加强地龙药材的质量控制，中国药典规定地龙药材限度为每1000g含黄曲霉毒素B1不得过5μg，黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉毒素B1的总量不得过10μg。

供试品溶液的制备、色谱条件及测定方法参照《中国药典》2015年四部2351黄曲霉毒素测定法第一法[8，9]，取本品5g,进行测定。

炒地龙饮片10批黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2均未检出。考虑到黄曲霉毒素为安全性指标，虽然测定的炒地龙样品未检出黄曲霉毒素，但放置环境、储藏等因素均可能导致炒地龙饮片产生黄曲霉毒素，故制定黄曲霉毒素限度为每1000g含黄曲霉毒素B1不得过5μg，黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉毒素B1的总量不得过10μg。

3 结果与讨论

本研究对10批次炒地龙饮片进行研究，根据《中国药典》2015年版一部地龙药材质量标准的规定方法进行系统适应性试验，起草制定炒地龙饮片炮制质量标准，对全面控制炒地龙饮片的质量，保证临床用药具有重要意义；同时进一步促进生产、流通和医药使用单位炒地龙饮片质量的控制[10-12]。