拉米夫定片原辅料相容性的研究

吴文华，王丽娜（.安徽省药品审评查验中心，合肥 3005；.合肥市市场监督管理局，合肥 3004）

拉米夫定（lamivudine），为（－）-1-[（2R，5S）-2-（羟甲基）-1，3-氧硫杂环戊烷-5-基]胞嘧啶（结构如图1所示），是核苷酸类逆转录酶抑制剂，属抗病毒药，通过结合到新合成的HBVDNA中来使DNA链的延长终止，从而达到抑制病毒复制的作用。临床主要应用于艾滋病、乙肝等疾病的治疗[1-6]。拉米夫定片于20世纪90年代最先在美国上市，目前已过专利保护期，国内有多家仿制陆续获批。根据FDA查询拉米夫定片说明书[7]，本品辅料为微晶纤维素、羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁。经初步试验研究，拟定拉米夫定片（规格300 mg）处方组成如表1所示，主要工艺步骤为：将处方量的拉米夫定原料、微晶纤维素和羧甲基淀粉钠过筛后，预混15 min，再加处方量硬脂酸镁进行总混2 min后压片，最后用欧巴代包衣粉进行包衣。为提高产品质量，减少因相容性问题带来的药物安全性风险，本课题组开展拉米夫定片原料与辅料的相容性研究，保障拉米夫定片仿制药的一致性。

表1 拉米夫定片处方组成Tab 1 Prescription composition of lamivudine tablets

图1 拉米夫定的化学结构式Fig 1 Formula of lamivudine

1 仪器与试药

1.1 仪器

赛默飞世尔U3000高效液相色谱仪（DAD检测器），XP205电子天平（瑞士梅特勒-托利多），SYZ-250B药品稳定性试验箱（宁波东南仪器），SHH-100GD-2药品强光照射试验箱（上海永生）。

1.2 试药

拉米夫定原料药（批号：LZ01101160220，石家庄龙泽制药股份有限公司）；拉米夫定片（自制，规格：300 mg/片）；拉米夫定对照品（批号：101007-201502，含量：99.7%）、胞嘧啶对照品（批号：420017-201501，含量：99.9%）、尿嘧啶对照品（批号：100469-201302，含量：99.6%）、水杨酸对照品（批号：100106-201104，含量：99.9%）、拉米夫定分离度混合物B对照品（批号：101222-201101，供含量测定用）（中国食品药品检定研究院）；微晶纤维素（辅料1，批号：20160101，山东聊城阿华制药有限公司）；羧甲基淀粉钠（辅料2，批号：150927）、硬脂酸镁（辅料3，批号：151240）（安徽淮南山河辅料有限公司）；欧巴代（辅料4，批号：THL39057，上海卡乐康包衣技术公司）；全辅料（上述4种辅料按处方比例混合均匀）；甲醇（色谱纯，批号：190263，美国赛默飞世尔科技公司）；其他化学试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

参考《中国药典》2015年版二部拉米夫定项下有关物质方法[8]，确定液相色谱条件如下：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶（Agilent Zorbax XDB-C18，4.6 mm×250 mm，5 µm）；以0.025 mol·L－1醋酸铵溶液（用冰醋酸调节pH值至3.8）-甲醇（95∶5）为流动相，流速1.0 mL·min－1；检测波长277 nm；柱温35℃；进样量10 μL。

2.2 原辅料相容性样品研究制备

依据《化学药物制剂研究基本技术指导原则》[9]以及相关文献[10-16]中的要求，分别称取拉米夫定原料与各辅料按照不同比例充分混匀后（具体比例见表2），分别放置在高温（60℃）、高湿（90% RH）、高照度（4500 Lx）的试验箱中，30 d后取出。并与原料、各辅料进行平行对照研究。

表2 原辅料相容性试验样品的称样量Tab 2 Sample mass of the experimental sample for excipient compatibility

2.3 溶液的制备

取胞嘧啶对照品和尿嘧啶对照品各适量，加流动相溶解并稀释制成每1 mL中分别含10 μg的溶液，作为溶液①。另取拉米夫定分离度混合物B对照品（含拉米夫定与杂质Ⅱ）5 mg，置10 mL量瓶中，加流动相2 mL，振摇使溶解，再精密加入溶液①1 mL，用流动相稀释至刻度，摇匀。

取拉米夫定原料约50 mg，置100 mL量瓶中，加流动相振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为拉米夫定原料药原始溶液。

按表2取原料和原辅料相容性样品适量，置100 mL量瓶中，加流动相适量振摇使拉米夫定溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1 mL，置50 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，再精密量取2 mL，置20 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为对照溶液。另称取相对应的辅料适量，置100 mL量瓶中，加流动相振摇，滤过，取续滤液作为辅料溶液。

取水杨酸对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释，制成每1 mL中约含0.5 μg的溶液，作为水杨酸对照品溶液。

2.4 系统适用性试验

取“2.3”项下各种溶液分别精密量取10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。拉米夫定与混合辅料的因素试验典型色谱图如图2所示。结果显示胞嘧啶、尿嘧啶、杂质Ⅱ和拉米夫定峰的分离度均大于1.5，说明色谱系统适用性符合要求。

图2 拉米夫定片原辅料相容性高效液相色谱图Fig 2 HPLC chromatogram of the mixture of lamivudine and accessories

2.5 影响因素试验

采用目视法对外观性状进行观察，HPLC法对杂质进行分析，结果可见拉米夫定原料在高温、高湿、强光条件下外观性状和含量均未发生明显变化。图2及表3结果表明各样品各种条件下均未产生水杨酸的杂质；光照、高温条件下，杂质未有变化，样品外观性状、含量均未有显著变化；高湿试验条件下，拉米夫定与微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、欧巴代产生了新杂质胞嘧啶，杂质Ⅰ和其他杂质略有增加，总杂质也略有增加，但新产生杂质胞嘧啶和其他杂质的限度均符合拉米夫定片质量标准限度要求和ICH Q3限度要求。

表3 主药与各辅料相容性研究结果Tab 3 Raw material/excipient compatibility test

3 讨论

3.1 影响因素

从研究结果看，拉米夫定片原辅料相容性试验各辅料和原料在高温和光照条件下杂质均无明显变化，原辅料相容性较好；在高湿条件下拉米夫定原料，辅料微晶纤维素、羧甲淀粉钠、欧巴代包衣粉和全辅料杂质均有所增加，可能是由于水分子的参与，有助于原辅料反应基团的接触，从而加速杂质的降解速度，对样品的稳定性带来一定的影响。结果提示拉米夫定片要选择防水较好的薄膜包衣预混料，另外在产品的外包装上要特别注意防潮包装材料的选择，因此在生产工艺选择直接压片工艺比传统湿法制粒再压片的工艺更合理。

3.2 杂质变化原因讨论

从本研究结果看，拉米夫定与欧巴代在高湿条件下，杂质胞嘧啶的量显著增加，查阅相关文献[17-18]，推测其可能的原因为：欧巴代是一种良好的薄膜衣包衣系统，其吸湿相对其他辅料更强，而拉米夫定的合成主要由酯化、环合、酰化、耦合、还原五步组成，而最后一步还原必须在无水条件下进行，在高湿条件下拉米夫定易氧化形成耦合后的中间体，然后水解形成胞嘧啶。

3.3 小结

随着中国加入ICH，中国的药品注册均需遵守ICH的基本原则，其中《新药制剂中的杂质》[Q3B（R2）]和《药品研发》[Q8（R2）]对原料药与辅料的相容性研究做了明确规定，相容性研究可发现药物与辅料发生的物理化学作用，其预测和指导性能对药物辅料筛选意义重大，为仿制药顺利通过一致性评价筛选出最优化的处方工艺。