蒙药古日古木-13丸质量标准研究*

康松松，杨雪苗，冯智翱，杨 丹，薄彧坤，安 明

(内蒙古科技大学包头医学院药学院，内蒙古包头 014040)

蒙药古日古木-13丸，又名红花清肝十三味丸，由红花、麦冬、丁香、莲子、木香、诃子、川楝子、栀子、紫檀香、水牛角浓缩粉、人工牛黄、麝香、银朱13味药组成，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准(蒙药分册)》[1]。古日古木-13丸清肝热，在蒙药历史中使用较广泛，临床上用于治疗眼科类疾病、肝脏类疾病、“亚玛”病、心绞痛、脑梗死、肾热症等[2-4]。为完善药材的有效性控制，以质量可控为目标，拟建立古日古木-13丸中红花、诃子和丁香的薄层鉴别标准，测定羟基红花黄色素A的含量，制定古日古木-13丸的质量标准。

1 材料与方法

1.1仪器 GenPure UV-TOC/UF超纯水机、Thermo Ultimate3000高效液相色谱仪(美国赛默飞世尔科技有限公司)；BSA224S-CW万分之一电子天平、SQP型十万分之一电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)；AS系列超声波清洗机-220 V/50 Hz(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；TDZ5-WS多管架自动平衡离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)。

1.2试剂药品 对照品羟基红花黄色素A(180323-017)购于内蒙古伏安瓦科技有限公司，没食子酸(110831-201605)、丁香酚(110725-201615)和对照药材红花(120907-201412)、诃子(121015-201004)均购于中国食品药品检定研究院；古日古木-13丸(806221、901112、901113)由内蒙古包头市中蒙医院制剂室提供；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

1.3方法

1.3.1薄层鉴别

1.3.1.1红花薄层鉴别 取红花对照药材0.5 g、古日古木-13丸3.5 g、阴性(不含红花的处方其余药材)3.0 g，加80 %丙酮10 mL，超声10 min，离心，取上清液即得。照薄层色谱法(通则0502)试验，各取10 μL，点于硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(4∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。

1.3.1.2诃子薄层鉴别 取诃子对照药材0.5 g、古日古木-13丸3.0g 、阴性(不含诃子的处方其余药材)2.8 g，加甲醇10 mL，超声30 min，离心，取上清液即得。取没食子酸加甲醇制成8 mg/mL对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，各取10 μL，点于硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶0.6)展开剂，展开，取出，晾干，喷2 %三氯化铁乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰。

1.3.1.3丁香薄层鉴别 取古日古木-13丸3.0 g、阴性2.8 g，加甲醇10 mL，超声30 min，离心，取上清液即得。取丁香酚加甲醇制成9 mg/mL对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，各取5 μL，点于硅胶G薄层板上，以环己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷5 %香草醛硫酸溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰。

1.3.2含量测定

1.3.2.1色谱条件 (1)色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；(2)流动相：甲醇-乙腈-0.7 %磷酸水溶液(26:2:72)；流速1.0 mL/min；检测波长403.0 nm；柱温30 ℃；进样量10 μL。

1.3.2.2对照品溶液 精密称定羟基红花黄色素A对照品适量，加25 %甲醇制成109.4 μg/mL的对照品溶液。

1.3.2.3供试品溶液 取古日古木-13丸约2.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25 %的甲醇50 mL，密塞，称重，超声处理40 min，放冷，补重，5 000 r/min离心10 min，取续滤液即得。

2 结果

2.1薄层鉴别

2.1.1红花薄层鉴别 在与对照药材色谱相应的位置上，样品显相同颜色的斑点，阴性无干扰。见图1。

图1 古日古木-13丸中红花的TLC图谱

2.1.2诃子薄层鉴别 在与对照药材、对照品色谱相应位置上，样品显相同颜色的斑点，阴性无干扰。见图2。

图2 古日古木-13丸中诃子的TLC图谱

2.1.3丁香薄层鉴别 在与对照品色谱相应位置上，样品显相同颜色的斑点，阴性无干扰。见图3。

图3 古日古木-13丸中丁香的TLC图谱

2.2含量测定

2.2.1提取效率试验 以25 %甲醇50 mL为溶剂，考察不同超声提取时间对提取效率的影响。提取时间为40 min和50 min时，羟基红花黄色素A的含量几乎相同，为节约能源，故选择超声时间为40 min。见表1。

表1 提取效率试验

2.2.2专属性 称取2.8 g除红花外其他药材研磨成粉，置于锥形瓶，照“1.3.2.3”项下制备阴性对照溶液。照“1.3.2.1”项下，分别精密吸取3种溶液各10 μL分析，结果表明阴性对照色谱图(见图6)中，在与羟基红花黄色素A对照品(见图4)以及供试品色谱图(见图5)相对应的保留时间处无色谱峰出现，专属性好。

图4 羟基红花黄色素A对照品溶液色谱图

图5 供试品溶液色谱图

图6 阴性对照溶液色谱图

2.2.3线性关系考察 取“1.3.2.2”项下对照品溶液，分别精密吸取6、8、10、12和14 μL进样分析，以峰面积对浓度进行回归分析，结果显示，羟基红花黄色素A的浓度分别为65.64、87.52、109.4、131.28、153.16 μg/mL时，平均峰面积为32.4845、43.5125、54.3955、65.1595、75.983，回归方程为y=0.4965x-0.015，r2=0.9999，可见羟基红花黄色素A在65.64～153.16 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.2.4精密度试验 取“1.3.2.2”项下对照品溶液，按照“1.3.2.1”项下的色谱条件连续重复进样5针，进样量10 μL，其峰面积的平均值为56.1818，RSD为0.083 %(n=5)，说明精密度良好。

2.2.5稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h，按照“1.3.2.1”项下的色谱条件进行测定，样品中羟基红花黄色素A的峰面积分别为51.515、51.093、51.639、51.669、51.664、51.487，RSD为0.430 %。

2.2.6重复性试验 取批号901112样品6份，每份约2.8 g，精密称定，制备供试品溶液，进样分析，测定羟基红花黄色素A的峰面积，结果见表2。

表2 重复性测定结果

2.2.7加样回收率试验 取批号901112样品9份，每份约1.4g ，分为3组，分别在3组具塞锥形瓶中加入羟基红花黄色素A对照品溶液1 mL、2 mL、3 mL(约相当于供试品含量的50 %，100 %，150 %)，再加入25 %甲醇49 mL、48 mL、47 mL，按“1.3.2.3”项下进样分析，结果见表3。

表3 加样回收率测定结果

2.2.8样品含量测定 取样品3批(批号为：901112、806211、901113)，每批2份，另取模拟样品3份，按正文“含量测定”项下的方法处理，分析测定，羟基红花黄色素A的含量均在1.82 mg/g以上。见表4。采用同法，对模拟样品用红花药材进行了含量测定，结果见表5。

表4 样品测定结果

表5 红花药材中羟基红花黄色素A含量测定结果

按理论值折算，模拟样品应含羟基红花黄色素A1.90337 mg/g，羟基红花黄色素A转移率=(1.89/1.90)×100 %=99.45 %。2020年版《中国药典》一部“红花”项下规定：含羟基红花黄色素A不得少于1.0 %(相当于10 mg/g)。含量低限=(28.6/200.4)×10×99.45 %=1.4193 mg/g。考虑到其他影响因素，下浮10 %，本品每1 g含红花以羟基红花黄色素A计不得少于1.2774 mg。

3 讨论

对蒙药古日古木-13丸中红花[5]、诃子[6]和丁香[7]建立了薄层色谱定性鉴别方法，在与对照药材或对照品色谱相应位置上，样品显相同颜色的斑点，阴性无干扰，专属性强。与文献相比，成功建立了红花、诃子和丁香的薄层鉴别标准，对古日古木-13丸的薄层定性鉴别进行了补充。同时建立了羟基红花黄色素A的含量测定方法[8-10]，考察了提取时间对提取效率的影响，从环保和被测成分提取方面考虑，选择了40 min；羟基红花黄色素A在65.64 μg/mL～153.16 μg/mL范围内呈良好的线性关系；平均回收率为100.4 %。根据2020年版《中国药典》一部“红花”项下规定，考虑到其他因素的影响，蒙药古日古木-13丸每1 g含红花以羟基红花黄色素A计不得少于1.2774 mg。建立的羟基红花黄色素A含量测定方法专属性强，重现性好，灵敏度高，简便快捷。

综上所述，成功地建立了蒙药古日古木-13丸的质量标准，为产品质量控制提供了依据。