血清ORP150、SRF水平与晚期胃癌患者根治术后预后的相关性

陈其珠，黄国定，黄琰菁

(1.海南西部中心医院 肿瘤内科,海南 儋州 571700；2.海南省人民医院 肿瘤内科，海南 海口 570311)

作为胃癌的主要治疗方法，胃癌根治术能整块切除病灶及可能受浸润的部分胃壁，达到重建消化道的目的。有研究指出，因胃癌早期无特异性症状，多数患者在确诊时已进展至晚期，治疗难度增加，胃癌根治术后复发风险增高[1]。故早期预测晚期胃癌患者根治术后预后情况被认为是指导治疗有效展开的关键。氧调节蛋白150(oxygen-regulated protein，ORP150)作为内质网相关多肽，属于内质网驻留热休克蛋白超家族，已被证实可阻止细胞凋亡，进而促进肿瘤发展[2-3]。ORP150在甲状腺癌、肝细胞癌等多种肿瘤组织中呈高表达，且高表达与肿瘤组织抗应激反应及耐药性的发生密切相关[4]。血清反应因子(serum response factor，SRF)是现阶段广泛研究的转录因子，与细胞的增长、分化、凋亡等机制密切相关[5]。SRF可能对肿瘤转移具有促进作用。报道显示，SRF能够在体外使肝癌、肺癌等多种肿瘤细胞发生转移，影响预后[6-7]。结合ORP150与SRF在肿瘤疾病中的作用特点，推测两者可能对晚期胃癌根治术后预后有影响。本研究主要观察晚期胃癌患者根治术后预后情况，检测患者的血清ORP150、SRF表达，分析血清ORP150、SRF表达与晚期胃癌根治术后复发的关系，以指导未来胃癌根治术后预后风险早期评估与干预。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年1月～2017年12月在海南西部中心医院接受胃癌根治术治疗的100例晚期胃癌患者。纳入标准：①病史、体格检查及实验室检查符合胃癌特点，且X线气钡双重造影或内镜发现占位性病变，并经活组织检查或细胞学检查确诊为晚期胃癌的患者；②接受胃癌根治术的患者；③预计生存时间>6个月；④患者及家属均知晓本次研究内容，签署知情同意书。排除标准：①合并重要脏器功能相关疾病；②合并其他恶性肿瘤；③合并严重传染性疾病或感染性疾病；④合并免疫系统疾病；⑤合并消化道梗阻；⑥随访期间病死患者；⑦全身状况恶化无法耐受手术患者；⑧局部浸润过于广泛无法切除者；⑨伴严重低蛋白血症和贫血、营养不良无法耐受手术患者。100例患者中男55例，女45例；年龄56～72岁，平均年龄(63.81±4.25)岁；发病部位：贲门癌49例，胃体癌51例；肿瘤组织学类型：分化不良53例，分化型47例。

1.2 方法

1.2.1 晚期胃癌患者根治术后复发评估 对所有晚期胃癌患者根治术后进行为期2年随访，所有患者均于术后3、6、9、12、15、18、21、24个月到我院复查，观察并记录两组患者随访期间复发情况，包括局部复发及局部复发并远处转移，先经影像学及生化检查，对有异常情况的患者经穿刺活检确诊，以复发为终点事件。

1.2.2 实验室指标检测 在患者接受胃癌根治术当天早晨，采集患者晨起空腹状态下5 mL外周肘静脉血，使用TD5A自动脱盖离心机(长沙英泰仪器有限公司)离心，①以1 000 r/min的速度离心4min后取血清，使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)水平；②以5 000 r/min的速度离心10min后取血清，经ELISA检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1 alpha，HIF-1α)；③以4 000 r/min的速度离心10min后取血清，经ELISA检测ORP150，上述试剂盒均由合肥莱尔生物科技有限公司提供；④以3 500 r/min的速度离心10min后取血清，经双抗体夹心法检测SRF，试剂盒由上海康朗生物科技有限公司提供。

2 结果

2.1 晚期胃癌患者根治术后预后情况 全部100例晚期胃癌患者，术后经2年随访。术后复发41例，复发率为41.00%。

2.2 复发组与未复发组基线资料、实验室指标及血清指标比较 复发组血清ORP150、SRF、VEGF及HIF-1α水平均高于未复发组，差异有统计学意义(P<0.05)；而两组年龄、性别、血红蛋白、发病部位、肿瘤浸润深度、分化情况、肿瘤直径、术前淋巴结转移对比，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.3 晚期胃癌患者血清ORP150水平与SRF水平之间的相关性分析 结果显示，晚期胃癌患者血清ORP150水平与SRF水平呈正相关(r=0.831，P<0.001)。

2.4 晚期胃癌根治术后复发影响因素的多因素分析 将晚期胃癌患者术前血清ORP150、SRF、VEGF、HIF-1α水平分别作为自变量，术后复发情况作为因变量(1=复发，0=未复发)，进行多因素Logistic回归分析。结果显示，血清ORP150、SRF、VEGF、HIF-1α高表达均是晚期胃癌患者根治术后复发的风险因素(P<0.05)。见表2。

表2 晚期胃癌根治术后复发影响因素的多因素分析

2.5 血清指标表达预测晚期胃癌根治术后复发风险的效能分析 将晚期胃癌患者血清ORP150、SRF、VEGF、HIF-1α水平分别作为检验变量，术后复发情况作为状态变量(1=复发，0=未复发)，绘制ROC曲线(见图1)结果显示，血清ORP150、SRF、VEGF、HIF-1α水平分别预测晚期胃癌患者根治术后复发风险的AUC均>0.800，预测价值较理想，在血清ORP150、SRF、VEGF、HIF-1α的cut-off值分别取10.561 ng/mL、152.364 pg/mL、367.200 pg/mL、54.940 ng/L时，可获得最佳预测价值。见图1和表3。

图1 血清指标表达预测晚期胃癌根治术后复发风险的ROC曲线图

表3 血清指标表达预测晚期胃癌根治术后复发风险的效能分析结果

3 讨论

研究指出，胃癌早期因缺少特异性的表现及体征，易出现误诊、漏诊情况，多数患者确诊时已进展至晚期，错失手术治疗的最佳时机，增加治疗难度，不利于预后[8]。为了降低复发率，可以早期评估晚期胃癌患者根治术后复发风险，并给出针对性建议，指导临床治疗方案的拟定。

2002年张一楚等[9]研究指出，胃癌根治术后约有30%>～80%的胃癌患者出现局部或远处复发。本研究结果显示，100例晚期胃癌患者术后复发41例，复发率为41.00%，该结果与上述研究相近。表明多数晚期胃癌患者经胃癌根治术治疗后复发风险仍较高，故分析影响晚期胃癌患者根治术后复发的影响因素及预测因子尤为必要。近年来，诸多研究指出，缺氧、血管生成调控因子在肿瘤发生、发展中起着关键性作用，而HIF-1α、VEGF是常见缺氧诱导因子、血管生成调控因子[10-11]。且两者在本研究中也被证实参与了晚期胃癌患者根治术后复发的发生、发展。HIF-1α被证实不仅能加速肿瘤内新生血管的生成，增加红细胞生成素分泌量，促使癌肿组织生长，且对肿瘤细胞的能量代谢能力具有稳定作用，增加肿瘤细胞的侵袭性，提高远处转移风险[12]。VEGF可激活蛋白酶，减少细胞外基质，利于血管的生成，从而为肿瘤细胞的转移及侵袭创造条件[13]。但需要注意的是，HIF-1α、VEGF检测结果的准确性容易受到患者体内基质金属蛋白酶、耐药性等多种因素影响，在应用价值方面仍有局限，还需探索其他准确性更高的指标以早期预测患者预后。

ORP150作为内质网驻留分子伴侣，能够有效维持及促进蛋白质发生正确折叠，进而减轻细胞内质网应激反应的程度，增加细胞生存能力[14]。SRF是常见转录因子，而大量研究证实，转录因子与多种肿瘤细胞的转移密切相关，可通过与特定的基因序列结合，进而对基因转录产生调节作用，目前已成为多种疾病治疗主要靶标之一[15-16]。本研究结果显示，复发组血清ORP150及SRF水平均高于未复发组，初步表明血清ORP150及SRF与晚期胃癌根治术后复发密切相关。究其原因，ORP150作为抗内质网应激的保护蛋白，不仅能够在内质网发生错误折叠时释放保护蛋白，减轻应激反应[17]；同时，还能够释放对细胞凋亡活性具有诱导作用的转录因子，影响细胞凋亡进程[18]。SRF可通过调节Rho-actin及MEK-ERK等信号通路产生大量VEGF，而VEGF是血管生成的调控因子，可直接促进肿瘤组织上的血管生成，间接促进淋巴路转移病灶的产生，影响预后[19-20]。此外，SRF与上皮间质转化的发生密切相关，研究证实上皮间质转化与多种恶性肿瘤的侵袭能力及转移有关，继而该因子的过表达可能意味着不良预后风险[21]。

为进一步明确血清ORP150、SRF水平与晚期胃癌患者根治术后复发的关系，本研究经单因素与多因素Logistic回归分析，结果显示，血清ORP150、SRF过表达是晚期胃癌患者根治术后复发的影响因素；最后绘制ROC曲线结果显示，血清ORP150、SRF水平及联合预测晚期胃癌患者根治术后复发风险的AUC均>0.80，预测价值较理想，且以联合预测效能最好。上述结果证实，血清ORP150、SRF过表达与晚期胃癌患者根治术后复发有关，可作为晚期胃癌患者根治术后复发风险预测指标。但值得注意的是，本研究还对晚期胃癌患者血清ORP150水平与SRF水平进行变量间的相关性分析，结果显示，晚期胃癌患者血清ORP150水平与SRF水平呈正相关，提示晚期胃癌患者血清ORP150水平与SRF水平可相互影响，两者可能共同参与了晚期胃癌患者根治术后复发的发生，但具体机制仍尚未明确，仍需要在未来进一步开展大样本、长时间的研究加以验证分析。

综上所述，晚期胃癌患者根治术后复发可能与血清ORP150、SRF、VEGF、HIF-1α过表达有关，临床可考虑通过检测晚期胃癌患者血清ORP150、SRF、VEGF、HIF-1α水平，来预测患者经胃癌根治术治疗后复发风险，以指导早期风险评估与防治，可能对改善晚期胃癌患者的预后有积极意义。

(致谢：特别感谢海南医学院公共卫生学院刘勇老师指导统计学分析。)