海螵蛸鸡子黄油膏制备及其对小鼠创伤修复中IL-6及TNF-α的影响

宋孟霜 杨 宇 孙 璐 陈晓霞 王玲玲*

(辽宁中医药大学 药学院,辽宁 大连116600)

海螵蛸，性咸、涩、温，归脾、肾经，具有收敛止血，制酸止痛，收湿敛疮的作用，在古代多用于治疗吐血、鼻衄不止、创口久不收敛等[1]。现代药理研究海螵蛸具有中和胃酸[2]、保护胃黏膜、抗溃疡、止血及清创面作用[2]。鸡子黄油多外用治疗水火烫伤、湿疹、溃疡久不收口、慢性中耳炎等，具有消肿止痛、收敛疮口的功效[3]。《本草纲目》中记载“海螵蛸烧存性，和鸡蛋黄一同研成末外涂,治疗小儿重舌鹅口疮”，说明海螵蛸与鸡子黄油配伍具有消肿及收敛创口功效，但现代研究中未见有关海螵蛸与鸡子黄油配伍的研究。

创伤是由于各种致伤因素导致的人体组织损伤和功能障碍，严重创伤则导致全身炎症反应综合征（Systemicinflammationresponsesyndrome，SIRS）的发生[4]。当机体受到创伤等严重打击后，体内相续启动一系列复杂的细胞生物学效应，包括应激信号的激活和传递、炎症反应失衡、各种有害因素的释放等。我国传统医学对如何促进创面修复有着独特的理解和丰富的临床经验，尤其是在创面的外治上充分发挥着中医药的优势。因此，充分发挥外用中药有效促进创面愈合的特长，探讨其机理具有重要的意义。

1 资料与方法

1.1 试药与仪器

山东产海螵蛸（购于大连市海王星辰药店）；洪家鸡蛋（购买于农产品市场）；Na2S（国药集团）、乌拉坦（国药集团）、IL-6及TNF-αElisa试剂盒（江苏酶标）均购于大连辰玉试剂有限公司、科华全自动酶标仪ST-360。

实验用动物为12周龄昆明小鼠，体重（20±2）g，雌雄各半，共96只，购与大连医科大学，动物合格证号：SCXK（辽）2013-0002。所有小鼠均予标准啮齿类动物饲料喂养按照标准饲养一周后进行正式实验。

1.2 方法

1.2.1 实验用药材制备

1.2.1.1 海螵蛸：取净海螵蛸小块置于热锅内，用文火加热，炒至表面微黄色，取出，放凉，研磨成细粉末。

1.2.1.2 鸡子黄油：鸡蛋煮熟，去壳及蛋白，将蛋黄搓碎后放置在铁锅内，先用文火加热，再用武火慢熬，反复翻炒至出油。继续炒至蛋黄变黑褐色的硬块，油完全溢出，将蛋黄油倒入小瓶，得20mL，待凉备用。

1.2.1.3 实验用药膏制备：称取碳十八醇、单硬脂酸甘油酯、丙二醇、吐温、司盘适量，一起于水浴锅上恒温80℃加热混合作为油相。另量取甘油和蒸馏水适量，于水浴锅上加热至80℃左右，缓缓滴入三乙醇胺，作为水相。在80℃等温下将油相缓缓倒入水相，将30g海螵蛸粉加入，按同一方向搅拌，放凉至室温，即得海螵蛸膏。分别取基质加入不同质量的海螵蛸与鸡子黄油5mL配置成1:1组、2:1组、3:1组及4:1组。

1.2.2 造模与干预。实验用动物随机分为8组，每组10只，适应性饲养一周后，腹腔注射20%乌拉坦，麻醉后用6%的Na2S溶液脱毛。用手术剪做全皮层切除手术，深及筋膜，面积约为0.5 cm2。各给药组于创面上均匀涂相应药膏0.5 mm厚，每日换药1次，每3日以标准化摄影法拍摄创口，计算创口创面愈合率，直至造模成功后第9d。

1.2.3 ELISA试剂盒检测。分别于给药第一天、第三天、第六天及第九天，取空白组、模型组、4：1组各4只小鼠，摘眼球取血，离心分离得到血清。按照IL-6及TNF-αELISA试剂盒说明书进行测定。

1.2.4 统计学方法。采用SPSS22.0 统计学软件进行处理。计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同给药组对创面愈合率的影响

与模型组相比，各给药组在9天内各统计时间点均具有显著的促进创面愈合作用(P＜0.05 ）。不同配比药对与单味药相比，第三天及第六天3:1组与4:1组与海螵蛸组及鸡子油组具有显著性差异，治疗效果更好，第九天则基本痊愈，与单独使用海螵蛸作用相当，但较单独使用鸡子油效果显著。尤其4:1组第一天对创面愈合度就明显高于各单味药组。由此确定4:1组为海螵蛸鸡子油最佳配比，由此制备药膏具有显著治疗创伤作用（图1）。

图1 不同给药组对小鼠创面愈合率的影响

2.2 海螵蛸鸡子油膏对创伤模型小鼠血清中IL-6及TNF-α

如表1所示，与空白组相比，9天内模型组血清中IL-6及TNF-α均有显著升高，但是随着伤口愈合天数增加，炎症因子含量逐渐降低；给药组，除了第九天IL-6含量回调至正常值外，其它天数组IL-6及TNF-α显示随着愈合天数增加，含量逐渐降低。但与模型组相比，治疗组各天内回调IL-6及TNF-α能力均较自然愈合有显著性差异。说明海螵蛸鸡子油膏药物发挥了很大作用。

表1 海螵蛸鸡子油对创伤模型小鼠中IL-6及TNF-α的比较(x±s,n=10)

3 讨论

通过药理实验观察到各含有海螵蛸给药组，在手术后第一天伤口均有不同程度明显结痂，单独鸡子黄油组结痂较其它给药组范围小，但模型组并无明显结痂现象，且伤口中心处泛白，外围红肿。在活跃程度方面，各含有鸡子黄油给药组在伤后给药的7h后陆续开始进食、缓慢活动，在第三天已基本活动无碍，单独海螵蛸组给药后第二天开始进食、缓慢活动，在第四天已基本活动无碍。模型组在前三天除了必要的进食基本一动不动。通过实验数据显示，不同时间点给药组的愈合率均显著高于模型组（P<0.05 ），但是当海螵蛸与鸡子黄油配比达到4：1时，其促进创面愈合效果最佳，且在伤后第10天已基本痊愈结痂脱落，模型组创面结痂未完全脱落，表明海螵蛸与鸡子黄油配伍对创伤的愈合有明显的促进作用，且有助于伤后恢复正常活动。推测膏药中鸡子黄油清热解毒，消肿止痛功效可减轻创面疼痛，促进伤后恢复，海螵蛸则具有显著的止血收敛伤口作用，两者配伍可达到最佳的止痛敛伤功效。