屎肠球菌对肉鸡生长性能和血清生化指标的影响

■王卫卫 张安荣 陈志敏 常文环 户瑞刚 蔡辉益，3 刘国华 郑爱娟*

（1.中国农业科学院饲料研究所，农业农村部饲料生物技术重点开放实验室，北京100081；2.遵化市农业农村局，河北遵化064200；3.生物饲料开发国家工程研究中心，北京100081）

屎肠球菌呈革兰氏阳性、无芽孢、兼性厌氧，广泛存在于各种环境中，是人和动物肠道的天然栖息菌[1]。屎肠球菌属于乳酸菌，早期曾被归类于链球菌属（Streptococcus），后经16S rRNA测序和DNA-DNA杂交分析被重新命名为屎肠球菌[2]。屎肠球菌的过氧化氢酶呈阴性[3]，最佳生长温度为35℃，在10～45℃的温度范围内均可正常生长，可耐受6.5%氯化钠和pH 9.6的生长条件[4]。作为益生菌，多数屎肠球菌菌株被认为是安全的。研究屎肠球菌对肉鸡生长性能和生化指标的影响可对其在饲料无抗时代下于肉鸡饲粮中的广泛应用提供基础。

屎肠球菌的益生功能体现在多个方面，主要包括肠道黏附和定植能力，合成乳酸以及分泌细菌素等[5]。肠道黏膜的黏附和定植能力很大程度上决定了屎肠球菌益生效果的高低，定植时间越长越有利于其益生效果的发挥[6]。屎肠球菌分泌的乳酸和细菌素可以抑制有害微生物生长，起到同抗生素类似的作用[7-9]。临床研究表明，屎肠球菌可以缓解儿童急性腹泻，促进肠道有益菌生长，并能增强宿主的免疫水平[10]。在仔猪饲粮中添加屎肠球菌有改善仔猪生长性能的作用，并能促进仔猪肠道菌群平衡，提高仔猪免疫力[11-12]。在肉鸡饲粮中复配屎肠球菌，可以提高肉鸡的生产性能，降低肉鸡死淘率，改善肉鸡肠道形态[13]。虽然已有屎肠球菌饲喂肉鸡的报道，但是关于屎肠球菌影响肉鸡血清生化指标的研究还较少。本研究在玉米-豆粕型基础饲粮中复配抗生素和屎肠球菌，评价它们对肉鸡生长性能以及血清生化指标的影响，对今后饲料无抗时代屎肠球菌在肉鸡饲粮中的应用提供了依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

本研究所用屎肠球菌为粉状，活菌数≥1.5×1011CFU/g，购买自北京挑战农业科技有限公司。

1.2 试验设计

选取180只1日龄平均体重相近的健康爱拔益加（AA）肉鸡，将其随机分为3组，每组再分为6个重复，每个重复饲养10只鸡。第一组为对照组，饲喂基础饲粮；第二组为抗生素组，在基础饲粮中添加5 mg/kg黄霉素、20 mg/kg吉他霉素和75 mg/kg金霉素；第三组为屎肠球菌组，在基础饲粮中添加6.75×109CFU/kg（45 mg/kg）屎肠球菌。基础饲粮配方根据《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)设计，具体组成及营养水平参见表1。

1.3 肉鸡饲养管理

本研究在中国农科院北京昌平南口试验基地进行。采用4层立体笼养方式进行肉鸡饲养试验，每个单笼养殖10只肉鸡。养殖车间每日灯光照射23 h，黑暗1 h。肉鸡采食方式为自由采食，饲料为粉状，饮水通过乳头式饮水器进行。利用水循环式暖气为养殖车间供热，调整试验前3 d温度在33℃左右，此后每周降低2℃，一直降到24℃，然后保持不变直至试验结束。分别在1日龄和7日龄时，为肉鸡接种马立克疫苗，以及新城疫和肾传支二联苗。其他有关鸡只饲养管理的全部事项均按照AA肉鸡饲养规程的要求进行。肉鸡饲养试验共进行42 d。

1.4 指标的测定及方法

1.4.1 生长性能指标

生长性能指标主要统计肉鸡21日龄和42日龄体重（BW），以及试验前期（1～21日龄）和试验后期（22～42日龄）肉鸡的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）以及料重比（F/G）。在试验进行到21日龄和42日龄时，以重复为单位称取得到肉鸡体重（BW），再根据肉鸡前期和后期两个阶段各个重复的耗料量，计算得到相应生长性能指标。

1.4.2 血清生化指标

在试验进行到肉鸡21日龄和42日龄时，07:00喂料前，在空腹状态下于每个重复中随机选取1只肉鸡，电击致死后取颈静脉血10 mL，离心分离血清。分离所得血清置于液氮中保存，以待检测。用7600型（日本日立）全自动生化分析仪测定肉鸡血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、尿酸（UA）、血氨（NH3）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、磷（P）和钙（Ca）含量以及碱性磷酸酶（ALP）活性。所用试剂盒购买自南京建成生物工程研究所有限公司。

1.5 数据统计与分析

用Excel软件对数据进行初步整理，然后利用SPSS 21.0软件进行独立样本T检验分析。分别以P＜0.05和P＜0.01作为差异显著和差异极显著的判断标准，结果以“平均值±标准差（Mean±SD）”的形式表示。

2 结果与分析

2.1 饲粮添加抗生素和屎肠球菌对肉鸡生长性能的影响（见表2）

表2 饲粮添加抗生素和屎肠球菌对肉鸡生长性能的影响

肉鸡的生长性能指标见表2。在1～21日龄，饲粮复配屎肠球菌和抗生素对试验肉鸡的ADG和F/G均无显著影响（P＞0.05）。与对照组相比，屎肠球菌组肉鸡的ADFI显著下降（P＜0.05），21日龄BW显著增加（P＜0.05）。抗生素组与对照组相比，肉鸡的ADFI显著下降（P＜0.05），21日龄BW未受影响（P＞0.05）。在22～42日龄，与对照组相比，饲粮添加屎肠球菌未显著影响试验肉鸡的ADG和ADFI（P＞0.05），但显著降低了试验肉鸡的F/G（P＜0.05），42日龄BW仅有增加的趋势（P＞0.05）。与对照组相比，饲粮添加抗生素显著提高了试验肉鸡的42日龄BW、ADG和ADFI（P＜0.05），显著降低了F/G（P＜0.05）。与屎肠球菌组相比，抗生素组显著提高了试验肉鸡的ADG和ADFI（P＜0.05），F/G未受影响（P＞0.05），42日龄BW有增加的趋势（P＞0.05）。

2.2 饲粮添加抗生素和屎肠球菌对肉鸡血清蛋白及其代谢物含量的影响（见表3）

肉鸡血清蛋白及其代谢物含量见表3。由表可知，在1～21日龄，与对照组相比，饲粮添加屎肠球菌未显著影响肉鸡血清TP和ALB含量（P＞0.05），显著提高了血清GLB含量（P＜0.05），显著降低了血清UA含量（P＜0.05），血清NH3含量有降低的趋势（P＞0.05）。与对照组相比，饲粮添加抗生素未显著影响肉鸡血清TP和ALB含量（P＞0.05），显著降低了血清UA含量（P＜0.05），极显著降低了血清NH3含量（P＜0.01），GLB含量有增加的趋势（P＞0.05）。与屎肠球菌组相比，抗生素组肉鸡血清TP、ALB和UA含量均无显著改变（P＞0.05），GLB和NH3含量有下降的趋势（P＞0.05）。在22～42日龄，与对照组相比，饲粮添加屎肠球菌未显著影响肉鸡血清TP、GLB、UA和NH3含量（P＞0.05），ALB含量有增加的趋势（P＞0.05）。与对照组相比，饲粮添加抗生素对肉鸡血清TP、GLB和UA含量无显著影响（P＞0.05），极显著降低了血清NH3的含量（P＜0.01），ALB含量有降低的趋势（P＞0.05）。与屎肠球菌组相比，抗生素组肉鸡血清TP、GLB和UA含量未受显著影响（P＞0.05），ALB含量显著降低（P＜0.05），血清NH3含量极显著降低（P＜0.01）。

表3 饲粮添加抗生素和屎肠球菌对肉鸡血清蛋白及其代谢物含量的影响

2.3 饲粮添加抗生素和屎肠球菌对肉鸡血清脂类、P和Ca含量以及ALP活性的影响（见表4）

表4 饲粮添加抗生素和屎肠球菌对肉鸡血清脂类、P和Ca含量以及ALP活性的影响

由表4可知，在1～21日龄，与对照组相比，饲粮复配屎肠球菌未显著影响肉鸡血清P的含量（P＞0.05），血清TC和TG含量极显著提高（P＜0.01），血清ALP活性和Ca含量显著提高（P＜0.05）。与对照组相比，饲粮中添加抗生素对肉鸡血清P含量无显著影响（P＞0.05)，血清TC和TG含量以及ALP活性显著上升（P＜0.05），血清Ca含量有增加的趋势（P＞0.05）。与屎肠球菌组相比，抗生素组肉鸡血清TC和TG含量有增加的趋势（P＞0.05），P含量和ALP活性未受显著影响（P＞0.05），血清Ca含量有降低的趋势（P＞0.05）。在22～42日龄，与对照组相比，饲粮中添加屎肠球菌对血清TC、TG、P和Ca含量无显著影响（P＞0.05），血清ALP活性极显著上升（P＜0.01）。与对照组相比，饲粮中添加抗生素对血清TC、TG、P和Ca含量以及ALP活性均无显著影响（P＞0.05）。与屎肠球菌组相比，抗生素组肉鸡血清TC、TG、P和Ca含量均未受显著影响（P＞0.05），血清ALP活性极显著降低（P＜0.01）。

3 讨论

3.1 饲粮添加抗生素和屎肠球菌对肉鸡生长性能的影响

本研究显示，与对照组相比，饲粮添加6.75×109CFU/kg的屎肠球菌显著降低了1～21日龄肉鸡ADFI，显著提高了21日龄BW。饲粮添加5 mg/kg黄霉素、20 mg/kg吉他霉素和75 mg/kg金霉素显著降低了1～21日龄肉鸡的ADFI。这说明屎肠球菌和抗生素都有提高1～21日龄肉鸡生长性能的作用。在22～42日龄，屎肠球菌组肉鸡的ADG和ADFI无显著改变，F/G显著降低，BW有增加的趋势；而抗生素组肉鸡的BW、ADG和ADFI均有显著增加，F/G显著降低；并且抗生素组肉鸡的ADG和ADFI显著高于屎肠球菌组。这说明屎肠球菌和抗生素虽都能提高22～42日龄肉鸡的生长性能，但是抗生素的效果更强大。这一结果与Wu等[14]在饲粮中添加5.0×107CFU/kg的屎肠球菌改善AA肉仔鸡生长性能的研究结果一致。但是，也有报道显示屎肠球菌对肉鸡的生长性能没有作用。例如，彭众等[15]研究表明，在饲粮中分别添加0.5×109、1.0×109CFU/kg和2.0×109CFU/kg的屎肠球菌对AA肉仔鸡前期（1～21日龄）、后期（22～42日龄）和全期（1～42日龄）的生长性能均无影响。造成这一差异的原因可能与试验动物的养殖环境以及免疫状态相关。当动物在免疫应激状态时，其生长性能受到抑制，此时添加剂对动物免疫应激状态的缓解程度决定了其促生长性能的强弱[16]。屎肠球菌在某些试验中对肉鸡生长性能无影响，可能是由于肉鸡的养殖环境比较干净造成的。当肉鸡受到免疫应激时，例如用大肠杆菌攻毒时，屎肠球菌的促生长作用表现更突出[17-18]。本研究中抗生素比屎肠球菌的促生长作用表现更突出，其原因可以解释为抗生素抑制肠道炎症反应的能力更强。因为抗生素的促生长作用机理之一就是缓解动物肠道的免疫应激状态[19]。

3.2 饲粮添加抗生素和屎肠球菌对肉鸡血清蛋白及其代谢物含量的影响

血清蛋白指标是动物机体蛋白质新陈代谢的一个重要标志。血清蛋白含量增加时，表明家禽体内蛋白质合成代谢旺盛，饲料利用率高。动物体内蛋白质分解代谢的最终产物主要是氨。过多的氨会产生毒性，需要及时排出体外。对家禽来说，氨主要以UA的形式排出体外。血液中氨和UA的含量可以反映家禽机体蛋白质新陈代谢的差异。当血清NH3和UA含量升高时，表明家禽体内蛋白质分解代谢增强[20]。在本研究中，屎肠球菌组肉鸡前期的血清GLB含量显著上升，血清UA含量显著降低，血清NH3含量有下降的趋势；后期ALB含量有上升的趋势，其他指标均未受影响。这与赵建文等[21]关于微生态制剂对肉鸡新陈代谢和免疫系统作用的研究结果一致。抗生素组肉鸡前期的血清UA含量显著降低，NH3含量极显著降低，GLB含量有增加的趋势；后期血清NH3含量极显著降低，ALB含量有降低的趋势。屎肠球菌和抗生素对肉鸡蛋白质代谢的影响印证了它们对肉鸡生长性能的改善作用，同时也解释了抗生素对肉鸡促生长作用更强大的原因。屎肠球菌和抗生素对肉鸡蛋白质代谢的影响都随着日龄的增长而减弱，这与佟建明等[22]用金霉素对肉鸡生产性能的研究结果一致。这种减弱作用可能是由于高龄肉鸡肠道菌群和免疫器官功能更成熟，不易受到外界物质影响所致。

3.3 饲粮添加抗生素和屎肠球菌对肉鸡血清脂类、P和Ca含量以及ALP活性的影响

血清中TC和TG构成了血脂的主要成分，可以反映出脂肪组织与肝脏间脂肪酸循环的基础调节情况[23]。在本研究中，屎肠球菌和抗生素都显著提高了肉鸡前期血清TC和TG含量以及ALP活性，未影响后期血清TC和TG含量，但屎肠球菌显著提高了后期血清ALP活性。血清TC是动物机体合成细胞膜、类固醇激素和胆汁酸的主要原料，血清TG主要用于机体能量代谢[24]。血清中的ALP在动物机体脂肪代谢过程中起关键作用，其活性高低会影响三酰甘油、胆固醇和游离脂肪酸的含量[25]。血清TC含量和ALP活性提高，可能是肝脏代谢旺盛，脂类合成能力增强的结果。既往的研究结果表明部分乳酸菌具有降低宿主血清胆固醇的作用[26]，与本研究结果不一致。这可能是由于不同菌株具有的不同生理特性所决定的，也显示出益生菌对肉鸡脂质代谢作用机理的复杂性。Ca和P是动物骨骼的主要成分，血清Ca和P含量的增加可促进骨骼的生长发育[27]。本研究中，屎肠球菌和抗生素都增加了肉鸡前期血清Ca的含量，未影响后期血清Ca和P的含量。这有利于肉鸡前期骨骼的发育。同肉鸡蛋白质代谢情况类似，屎肠球菌和抗生素对肉鸡血清脂类代谢，Ca和P含量的影响主要体现在前期，后期作用不显著。这应该同样也是由于后期肉鸡发育更成熟，不易受到外界物质影响所致。

4 结论

饲粮添加屎肠球菌促进了肉鸡脂类和蛋白质的合成代谢，提高了21日龄肉鸡的BW和血清Ca含量，降低了1～21日龄肉鸡的ADFI。饲粮添加屎肠球菌和抗生素都降低了22～42日龄肉鸡的F/G，但是抗生素组肉鸡42日龄BW比屎肠球菌组有增加的趋势。本研究结果表明，屎肠球菌可作为抗生素的替代品，在饲料禁抗后，其应用前景将更加广阔。