不同抗原格局抗筛细胞联合应用的意义探讨*

闫烨 张勤 王丽娜 荆浩 吕毅 兰炯采

红细胞血型抗体分为规则抗体和不规则抗体，规则抗体是符合Landsteiner命名法则的血型抗体，不规则抗体是指不符合ABO血型系统Landsteiner命名法则的血型抗体[1]。此抗体大多为免疫性抗体，一般通过输血、妊娠、免疫性疾病等途径产生。不规则抗体是引起交叉配血困难和溶血性输血不良反应的重要原因[2]。本研究采用不同实验方法和不同抗原格局筛选细胞联合应用，对拟输血患者行不规则抗体筛查，预防不规则抗体漏检，以期降低输血不良反应的发生。

资料与方法

1 一般资料 选取1 200例拟输血住院患者作为研究对象，其中男160例，女1 040例，年龄范围7～85岁，平均年龄（43.61±6.57）岁。有输血史24例，有妊娠史702例。

2 仪器与试剂 TD-A型血型血清学用离心机、FYQ型免疫微柱孵育器（长春博研科学仪器有限责任公司）；KA-2200型专用离心机（日本久保田技术有限公司）；抗人球蛋白检测卡、2-巯基乙醇（2-Me）（长春博迅生物技术有限公司）；抗体筛选细胞2和3、谱细胞、抗人球蛋白（IgG，C3d）检测试剂、木瓜酶（上海血液生物医药公司）；抗体筛选细胞1（长春博迅生物技术有限公司）；凝聚胺试剂（珠海贝索生物技术有限公司）；IgM+IgG抗-D（Dominion Bioiogicals Limited）；所用试剂均在有效期内使用。

3 方法 用抗人球蛋白检测卡筛选出血浆抗体阳性标本，用谱细胞鉴定抗体特异性；血浆抗体阴性标本用盐水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法、木瓜酶法和不同厂家筛选细胞再次进行检测，以便发现漏检抗体。

结 果

1 抗筛结果阴性标本选用两种不同抗原格局筛选细胞检测，抗体筛选细胞试剂1盐水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法抗体检测结果阴性见表1；抗体筛选细胞试剂2盐水法、凝聚胺法抗体检测结果阴性，抗人球蛋白法抗体检测结果阳性见表2，经谱细胞鉴定检出lea抗体1例见表3。表1和表2标本为同一患者血样。

表1 抗体筛选细胞试剂1检测结果（生产批号20171001）

表2 抗体筛选细胞试剂2检测结果（生产批号20177039）

表3 lea抗体谱细胞鉴定结果（生产批号20171205）

2 在盐水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法检测抗体结果阴性情况下，加用两步酶法，以O型红细胞与AB型血浆为阴性对照，以O型红细胞与IgM+IgG抗-D为阳性对照。抗体筛选细胞3木瓜酶检测结果阳性见表4，经谱细胞鉴定检出lea抗体1例见表5。备注：表4检测标本与表1和表2不是同一标本。

表4 抗体筛选细胞3检测结果（生产批号20177043）

表5 患者抗体鉴定结果（生产批号 20171205）

3 1 200例病例中不规则抗体筛查总阳性率为0.75%（9/1 200），其中使用单一试剂检出阳性率为0.58%（7/1 200），对其余抗筛结果阴性标本选用两种不同抗原格局筛选细胞进行进一步检测，检出抗体阳性2例，漏检率为0.17%（2/1 193）。

讨 论

多次输血或妊娠可诱导机体产生不规则抗体致血型鉴定困难、交叉配血不合及输血反应发生。避免不规则抗体漏检在输血治疗中非常重要，尤其是对有多胎史、输血史的女性或肿瘤患者[3，4]。输血史、妊娠史是红细胞无效输注的高危因素，漏检的低效价不规则抗体也可以引起红细胞无效输注[5]，因此不规则抗体筛查需要有一套既准确又敏感的实验方法，本研究用抗人球蛋白检测卡筛选出抗体阳性标本，用谱细胞鉴定出抗-lea1例，抗-M 2例，抗-E 1例，抗-D 1例，抗-Jka1例，未确定其特异性1例。将抗体阴性标本分别采用盐水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法选用不同抗原格局筛选细胞进行抗体筛查，经谱细胞鉴定出抗-lea1例；在以上三种方法检测抗体阴性的情况下，加用木瓜酶法检测经谱细胞鉴定出抗-lea1例。 1 200例病例中不规则抗体筛查总阳性率0.75%（9/1 200），抗体漏检率为0.17%（2/1 193）。

Rh系统是红细胞血型系统中最为复杂、最富有遗传多态性的血型系统，Rh系统最易产生血型不规则抗体，占不规则抗体的47.06%[7]，是引起新生儿溶血病和免疫性溶血性输血反应最常见的不规则抗体。Kidd系统抗体不易检出，抗-Jka常与其他抗体混合存在，且在体内产生后消失很快，极易漏检并可引起速发性溶血性输血反应[8，9]。多次输血产生免疫性抗-Jka和抗-Jkb也可引起严重的迟发性输血反应[10]。lea抗体通常是“自然发生的”，多数为IgM抗体，纯粹IgG性质的抗体非常少见，很少能通过抗人球蛋白试验检出。尽管lea抗体较常见，却很少引起溶血性输血反应[11]。近年来文献报道Lewis抗体漏检率高达28.5%，IgG抗体明显增多，干扰血型鉴定和交叉配血试验，影响临床输血效果[12]。

不规则抗体漏检与所选筛选细胞的抗原有关，筛选细胞不含有抗体对应的抗原导致抗体漏检，在抗体筛选时尽量选择抗原分布广适合本地特点的不同抗原格局的抗体筛选细胞，使抗原互补避免不规则抗体漏检。抗体的漏检与选择的试验方法有很大关系，酶可以破坏红细胞膜上的抗原，会造成M、N、S、s、Fya、Fyb等抗原的漏检。对ABO、P、Lewis、H、I等血型系统影响较小。酶试剂易失活, 不易保存，应用中会受干扰，试验中酶标准化，设置阴阳性对照可避免假阳性出现。同一患者标本血样表1中lea纯合子抗人球蛋白法检出阴性，而表2中lea杂合子时检出阳性，考虑有以下原因：①该标本血浆Lewis抗体活性弱；抗体不能和具有相应抗原的红细胞都出现阳性反应。②Lewis抗原不是由红细胞合成的，来源于血浆中的可溶性Lewis糖脂被动吸附在红细胞膜上，表1中lea纯合子试剂抗原量可能减少。③试剂储存中保存液的pH或其他特性也会影响抗原减弱的速度。保存液不同，某些抗体与不同厂家的试剂红细胞呈不同的反应。本研究在抗筛阴性的情况下，选择不同抗原格局抗筛细胞联合应用，加用木瓜酶提高抗体检出率能有效避免抗体的漏检。

综合上述情况建议：①抗体筛选时选择不同厂家不同抗原格局的筛选细胞，使抗原互补。②选择抗原分布广适合本地特点的不同抗原格局的抗体筛选细胞。③选择灵敏的实验方法，必要时多种方法联合应用。④对于低效价的抗体尽量用纯合子抗原检测。

不规则抗体引起的溶血性输血反应可危及患者的生命安全。输血是急危重症患者抢救的关键，对输血治疗患者选择适合的实验方法进行抗体筛选和鉴定，对检出抗体者避开特异性抗原，输血时选择红细胞上无相应抗原的血液输注，以保障临床输血安全。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突