TPGS修饰的地榆皂苷I长循环脂质体的制备及质量评价

宋婷婷，蔡荣珊，王 宏，刘月，伍振峰，杨 明，徐应淑*，熊永爱*

1.遵义医科大学药学院，贵州 遵义 563000

2.江西中医药大学 中药制剂教育部重点实验室，江西 南昌 330004

放化疗仍然是目前治疗癌症的主要手段，但其引起的骨髓抑制常导致患者造血功能下降、免疫力降低，阻碍放化疗的顺利进行[1]。地榆皂苷I是地榆预防和治疗骨髓抑制的关键成分[2-4]，然而其溶解性差、体内半衰期短，限制了其药效的发挥[5]。聚乙二醇1000 维生素E 琥珀酸酯（D-α-tocopherol polyethylene glycol 1000 succinate，TPGS）具有增加疏水性药物溶解度和包封率、延长体内半衰期等功能[6]。TPGS 修饰的脂质体还能避免被网状内皮系统吞噬，延长脂质体循环时间[7]。本研究旨在制备TPGS 修饰的地榆皂苷I长循环脂质体，优化操作工艺条件，并对其形貌、粒径、药物释放特性等进行表征，以评价其稳定性和适用性。

1 仪器与材料

Agilent 1260 高效液相色谱仪，安捷伦科技有限公司；ME204E 电子天平，梅特勒-托利多仪器上海有限公司；90Plus PALS 激光粒度仪，美国布鲁克海文仪器公司；TL-650Y 超声波细胞破碎仪，江苏天翎仪器有限公司；RE-52AA 旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；JEM-1200EX 透射电镜，日本电子株式会社；TG18 微量高速离心机，长沙维尔康湘鹰离心机有限公司；SHZ-82A 数显恒温振荡器，金坛市朗博仪器制造有限公司；超滤离心管，美国Millipore 公司，截留相对分子质量为10 000；透析袋，截留相对分子质量为8000～14 000，北京索莱宝科技有限公司。

地榆皂苷I，实验室自制，质量分数91.76%；地榆皂苷I对照品，批号MUST-17022502，质量分数99.47%，成都曼思特生物科技有限公司；大豆磷脂S100，德国Lipoid 公司；聚乙二醇1000 维生素E 琥珀酸酯、DL-α-生育酚，上海阿拉丁试剂有限公司；胆固醇，上海阿达玛斯试剂有限公司；甲醇、乙腈，HPLC 级；纯化水；氯仿、聚山梨酯80 等均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 地榆皂苷I 分析方法的建立

2.1.1 色谱条件 采用HPLC 法测定地榆皂苷I含量，Unitary C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水（35∶65）；体积流量1.0 mL/min；柱温30 ℃；检测波长203 nm；进样量10 μL，采用外标法进行含量测定。

2.1.2 专属性考察 精密称定地榆皂苷I对照品12.5 mg 置于25 mL 量瓶中，加入适量甲醇超声溶解并稀释至刻度，配制成质量浓度为0.5 mg/mL 的对照品储备液。精密量取适量地榆皂苷I对照品储备液，加甲醇稀释至质量浓度为0.25 mg/mL，即得地榆皂苷I对照品溶液。取TPGS 修饰的地榆皂苷I长循环脂质体混悬液0.5 mL，加适量甲醇破乳，超声得到澄清透明溶液，表明已经破乳完全，经0.22 μm 滤膜滤过，即得供试品溶液。取空白脂质体，同法制备阴性对照溶液。以阴性对照溶液作为空白对照，分别对对照品溶液及供试品溶液按照“2.1.1”项色谱条件进样分析，记录色谱图（图1）。结果表明，溶剂和辅料对地榆皂苷I测定无干扰，对照品溶液与供试品溶液的峰形良好，出峰时间一致，表明该测定方法专属性良好。

图1 阴性对照(A)、地榆皂苷I 对照品(B)和地榆皂苷I 长循环脂质体供试品(C)的HPLC 图Fig.1 HPLC spectrum of negative samples(A),ziyuglycoside I reference substances(B)and ziyuglycoside I long-circulating liposomes sample(C)

2.1.3 线性关系考察 分别精密量取适量地榆皂苷I对照品储备液，加甲醇稀释成质量浓度为5.0、10.0、25.0、50.0、75.0、100.0、250.0 μg/mL 的溶液。按“2.1.1”项色谱条件进样。以峰面积（Y）对地榆皂苷I质量浓度（X）进行线性回归，标准曲线为Y＝1.329 2X＋2.622 8，r＝0.999 8。结果表明，地榆皂苷I在质量浓度5.0～250.0 μg/mL 呈良好的线性关系。

2.1.4 精密度考察 精密量取适量的地榆皂苷I对照品储备液，加适量甲醇配制低、中、高（5、50、250 μg/mL）3 个质量浓度的对照品溶液。按“2.1.1”项色谱条件，每日各进样5 次，连续测定5 d，考察日内、日间精密度。结果测得低、中、高3 个质量浓度对照品溶液的日内精密度分别为 0.83%、1.17%、0.92%，日间精密度分别为1.47%、1.13%、0.98%。

2.1.5 加样回收率考察 于0.5 mL 空白脂质体混悬液中分别精密加入适量地榆皂苷I对照品溶液，然后加甲醇破乳，配制成质量浓度为5、50、250 μg/mL 的供试品溶液，各供试品溶液平行制备3 份，进样分析，计算回收率。结果低、中、高3 个质量浓度的平均回收率分别为 101.14%、98.72%、99.82%，RSD 分别为1.34%、1.25%、0.58%。

2.2 地榆皂苷I 的提取及含量测定

采用3 步碱沉法[8]提取地榆皂苷I，将纯化得到的地榆皂苷I按“2.1.1”项下HPLC 色谱条件进样分析，测定其含量。结果提取得到的地榆皂苷I质量分数为91.76%。

2.3 地榆皂苷I 脂质体的制备

采用薄膜分散法[9]制备包载地榆皂苷I的普通脂质体和TPGS 包衣脂质体。将处方量的地榆皂苷I、大豆磷脂、胆固醇和维生素E（含或不含TPGS）溶解在氯仿-甲醇（2∶1）混合溶剂中，置于干燥茄形瓶中，超声溶解以获得澄清溶液，在37 ℃恒温水浴中减压旋蒸以完全除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明的脂质薄膜，然后加入pH 7.4 的磷酸盐缓冲液5 mL，37 ℃常压水合2 h，充分振摇至水合完全，经探头超声处理，以35%功率（总功率为650 W）超声2 min（超声3 s，间隔3 s，温度过高时可用冰浴降温），最终得到带淡蓝色乳光的脂质体，储存在4 ℃冰箱中。

2.4 超滤离心法测定包封率

2.4.1 超滤膜吸附回收率的测定 配制质量浓度分别为166.7、81.7、37.7 μg/mL 的地榆皂苷I溶液，从3种不同质量浓度溶液中各取400 μL至超滤离心管中，7 000×g离心20 min，收集滤液，不更换超滤单元，再分别同法超滤3 次。将超滤前后的药液按“2.1.1”项色谱条件进样分析，计算超滤膜吸附回收率。由结果（表1）可知，在各个质量浓度下第2 份滤液的回收率符合要求，因此，可选择饱和2 次后的超滤膜分离脂质体与游离药物。

表1 超滤膜吸附回收率的测定Table 1 Determination of adsorption recovery of ultrafiltration membrane

2.4.2 包封率和载药量的测定 取过0.22 μm 滤膜的脂质体混悬液200 μL 至超滤离心管中，7 000×g离心20 min，将超滤液加甲醇稀释至1 mL，按“2.1.1”项色谱条件进样分析，计算游离药物含量（m2）。同时取未经超滤的地榆皂苷I脂质体混悬液，按“2.1.2”项下操作破乳，测定药物含量，计为总药量（m1）。脂质体中包载药物和投入脂质的总量为m3，按公式计算药物包封率和载药量。

包封率＝(m1－m2)/m1

载药量＝(m1－m2)/m3

2.5 地榆皂苷I 长循环脂质体处方优化

2.5.1 单因素实验 影响地榆皂苷I长循环脂质体制备过程的因素很多，本研究通过单因素实验初步考察了大豆磷脂与胆固醇质量比、TPGS 物质的量百分比、药物与大豆磷脂质量比和超声条件（超声功率与时间）对地榆皂苷I长循环脂质体粒径和包封率的影响。

（1）大豆磷脂与胆固醇质量比对地榆皂苷I长循环脂质体粒径和包封率的影响：固定处方中大豆磷脂S100 为30 mg，TPGS 物质的量百分比为6%，药物与大豆磷脂质量比为1∶4，30%超声功率，超声2 min。精密称取处方量的成膜材料，按“2.3”项下地榆皂苷I脂质体的制备方法制备脂质体，考察大豆磷脂与胆固醇质量比（6∶1、4∶1、3∶1、2∶1）对脂质体粒径和包封率的影响。结果（表2）表明，当大豆磷脂与胆固醇质量比为4∶1 时，包封率较高，粒径最小。胆固醇的加入可以提高脂质膜的稳定性，减少泡囊内包封药物的泄露，但过量的加入会使膜的形成变得困难。最终选择大豆磷脂与胆固醇质量比为4∶1 进行后续的单因素实验。

表2 大豆磷脂与胆固醇质量比对地榆皂苷I 长循环脂质体粒径和包封率的影响(,n=3)Table 2 Effects of mass ratio of soybean phospholipid to cholesterol on particle size and encapsulation efficiency of ziyuglycoside I long-circulating liposomes(,n=3)

表2 大豆磷脂与胆固醇质量比对地榆皂苷I 长循环脂质体粒径和包封率的影响(,n=3)Table 2 Effects of mass ratio of soybean phospholipid to cholesterol on particle size and encapsulation efficiency of ziyuglycoside I long-circulating liposomes(,n=3)

大豆磷脂与胆固醇质量比 包封率/% 粒径/nm 15∶1 73.19±0.48 92.78±0.59 6∶1 69.89±1.09 94.71±0.65 4∶1 76.25±0.49 93.40±0.11 3∶1 69.48±1.05 100.21±1.01 2∶1 68.21±0.84 106.31±0.88

（2）TPGS 物质的量百分比对地榆皂苷I长循环脂质体粒径和包封率的影响：固定处方中其他辅料的用量和制备条件，精密称取处方量的成膜材料，按“2.3”项下地榆皂苷I脂质体的制备方法制备脂质体，考察TPGS 物质的量百分比（3%、6%、10%）对脂质体粒径和包封率的影响。结果（表3）表明，当TPGS 物质的量百分比为10%时，包封率较高，粒径较小。可能是因为TPGS 修饰脂质体后，会在脂质体表面形成一层水化层，减小脂质体表面张力，阻止了脂质体的聚集和融合，使粒子更稳定，从而提高药物包封率，减小脂质体的粒径[10]。因此，选择TPGS 物质的量百分比为10%进行单因素实验。

表3 TPGS 物质的量百分比对地榆皂苷I 长循环脂质体粒径和包封率的影响(,n=3)Table 3 Effects of molar percentage of TPGS on particle size and encapsulation efficiency of ziyuglycoside I longcirculating liposomes(,n=3)

表3 TPGS 物质的量百分比对地榆皂苷I 长循环脂质体粒径和包封率的影响(,n=3)Table 3 Effects of molar percentage of TPGS on particle size and encapsulation efficiency of ziyuglycoside I longcirculating liposomes(,n=3)

TPGS 物质的量百分比/% 包封率/% 粒径/nm 3 70.35±1.18 103.20±1.10 6 69.47±1.35 100.60±0.58 10 76.25±1.44 93.40±0.11

（3）药物与大豆磷脂质量比对地榆皂苷I长循环脂质体粒径和包封率的影响：固定处方中其他辅料的用量和制备条件，精密称取处方量的成膜材料，按“2.3”项下地榆皂苷I脂质体的制备方法制备脂质体，考察药物与大豆磷脂质量比（1∶20、1∶6、1∶4、1∶3、1∶2）对脂质体粒径和包封率的影响。由表4 可知，药物与大豆磷脂质量比对脂质体的粒径和包封率的影响较大。当药物与大豆磷脂质量比从1∶20 变为1∶2 时，包封率降低，可通过包封地榆皂苷I的脂质体囊泡体积有限来解释。药物与大豆磷脂质量比的增加导致平均粒径的增加，可能是因为药物浓度越大，超声分散的机械力越大。当药物与大豆磷脂质量比为1∶20 时，包封率较高，但载药量较低，考虑到后续药动学以及药效学实验，选择1∶6～1∶2 进一步筛选，选择药物与大豆磷脂质量比为1∶4 进行单因素实验。

表4 药物与大豆磷脂质量比对地榆皂苷I 长循环脂质体粒径和包封率的影响(,n=3)Table 4 Effects of mass ratio of drug to soybean phospholipid on particle size and encapsulation efficiency of ziyuglycoside I long-circulating liposomes(,n=3)

表4 药物与大豆磷脂质量比对地榆皂苷I 长循环脂质体粒径和包封率的影响(,n=3)Table 4 Effects of mass ratio of drug to soybean phospholipid on particle size and encapsulation efficiency of ziyuglycoside I long-circulating liposomes(,n=3)

药物与大豆磷脂质量比 包封率/% 粒径/nm 1∶20 90.88±1.41 100.53±0.38 1∶6 76.80±1.45 91.67±0.48 1∶4 76.25±0.64 93.40±0.11 1∶3 61.67±1.08 107.92±0.24 1∶2 56.30±1.88 126.69±0.64

（4）超声条件对地榆皂苷I长循环脂质体粒径和包封率的影响：固定处方中其他辅料的用量和制备条件，精密称取处方量的成膜材料，按“2.3”项下地榆皂苷I脂质体的制备方法制备脂质体，考察超声条件（30%功率、2 min，35%功率、2 min，30%功率、3 min，35%功率、3 min）对脂质体粒径和包封率的影响。由结果（表5）可知，当30%超声功率（总功率为650 W），超声时间从2 min 增加到3 min 时，平均粒径减小，包封率变化不大。当35%超声功率、超声时间为2 min 时，脂质体的包封率较高，粒径较小。最终结果表明，超声条件对脂质体的粒径和包封率影响不大，选择超声条件为超声功率35%，超声2 min 制备脂质体。

表5 超声条件对地榆皂苷I 长循环脂质体粒径和包封率的影响(,n=3)Table 5 Effects of ultrasonic conditions on particle size and encapsulation efficiency of ziyuglycoside I longcirculating liposomes(,n=3)

表5 超声条件对地榆皂苷I 长循环脂质体粒径和包封率的影响(,n=3)Table 5 Effects of ultrasonic conditions on particle size and encapsulation efficiency of ziyuglycoside I longcirculating liposomes(,n=3)

超声功率和时间（总功率为650 W） 包封率/% 粒径/nm 30%，2 min 71.85±0.87 98.32±0.50 30%，3 min 73.10±1.27 94.76±1.18 35%，2 min 76.25±1.84 93.40±0.11 35%，3 min 71.62±1.13 94.88±0.21

2.5.2 Box-Behnken 响应面分析 在单因素实验的基础上，确定了显著变量及其优选水平，因素水平见表6。通过Box-Behnken 响应面分析法对大豆磷脂与胆固醇质量比（X1）、药物与大豆磷脂质量比（X2）、TPGS 物质的量百分比（X3）3 个自变量进行处方优化，以地榆皂苷I长循环脂质体包封率（Y）为响应值进行考察。实验设计和结果见表6。

表6 Box-Behnken 实验设计和结果Table 6 Box-Behnken experiment design and results

结果通过Design expert 10.04 软件进行数据拟合分析。回归方程为Y＝77.23－1.03X1－11.78X2＋4.58X3－3.61X1X2＋3.39X1X3＋1.12X2X3－7.37X12－11.16X22－3.93X32，R2＝0.983 0。P值表示因变量和自变量之间线性关系的显著性，回归方程的方差分析结果见表7。由显著性结果可知，X3、X1X2、X1X3、X12、X32对包封率影响显著，X2、X22对包封率的影响非常显著。自变量及其相互作用对包封率的影响见图2所示的响应面曲线。模型的概率P＜0.000 1，表明模型极显著，方程的响应值与自变量间线性关系显著，且方程的失拟项F值为2.86（P＞0.05）不显著，说明该回归方程在整个回归区域的拟合情况良好，回归模型具有良好的预测性。

表7 包封率回归方程的方差分析Table 7 Variance analysis of entrapment efficiency regression equation

图2 以包封率为指标的三维响应面曲线图Fig.2 Three-dimensional response surface curve with encapsulation efficiency as an indicator

根据分析结果得出地榆皂苷I长循环脂质体的最佳处方条件为大豆磷脂与胆固醇的质量比为4.6∶1；药物与大豆磷脂质量比为1∶5；TPGS 物质的量百分比为7.8%。根据最优条件进行处方验证，测得平均包封率为79.89%（n＝3），接近理论包封率80.59%（n＝3），平均载药量为10.48%（n＝3）。

2.6 表征

2.6.1 微观形态 取少量TPGS 修饰的地榆皂苷I长循环脂质体混悬液，用蒸馏水稀释至一定浓度，并将1 滴脂质体样品滴至铜网表面，真空干燥，用1%磷钨酸溶液负染30 s，最后用透射电镜观察脂质体的微观形态。结果显示，TPGS 修饰的地榆皂苷I长循环脂质体呈球形或类球形双层结构，粒子间无聚集现象，分布较均匀（图3）。

图3 TPGS修饰的地榆皂苷I长循环脂质体透射电镜图Fig.3 Micromorphology of TPGS modified ziyuglycoside I long-circulating liposomes

2.6.2 粒径及Zeta 电位测定 取脂质体样品，用去离子水稀释10 倍至计数率约为500 kcps，采用激光粒度仪测定脂质体粒径、多分散性和Zeta 电位。Zeta 电位是衡量电荷量的重要指标，通常较高的Zeta 电位（绝对值大于30 mV），表示系统更稳定[11]。结果测得TPGS 修饰的地榆皂苷I长循环脂质体的粒径为（95.79±0.81）nm，多分散系数（PDI）为0.048±0.007，说明脂质体的粒径分布比较均匀，可能是TPGS 所含有的PEG 链在脂质体表面形成了亲水性保护层，使脂质体更稳定，均一性提高[12]（图4）。Zeta 电位为（-38.60±0.97）mV，说明TPGS修饰的地榆皂苷I长循环脂质体表面荷负电，带电脂质体可以减少聚集和融合，增加稳定性（图5）。脂质体的理化参数见表8。

图4 TPGS修饰的地榆皂苷I长循环脂质体粒径分布Fig.4 Particle size distribution of TPGS modified ziyuglycoside I long-circulating liposomes

图5 TPGS修饰的地榆皂苷I长循环脂质体电位Fig.5 Potential of TPGS modified ziyuglycoside I long-circulating liposomes

表8 脂质体理化参数(,n=3)Table 8 Physical and chemical parameters of liposomes(,n=3)

表8 脂质体理化参数(,n=3)Table 8 Physical and chemical parameters of liposomes(,n=3)

样品 粒径/nm PDI Zeta 电位/mV空白脂质体 93.87±0.32 0.201±0.012-37.57±0.50 TPGS 修饰脂质体 95.79±0.81 0.048±0.007-38.60±0.97普通脂质体 128.84±0.98 0.181±0.010-26.54±0.38

2.6.3 稳定性考察 将测定包封率后的脂质体储存在4 ℃冰箱中，分别于储存的第10、20、30 天取出，观察外观，并测定脂质体的包封率、粒径和Zeta电位，考察样品的稳定性。结果表明，TPGS 修饰的地榆皂苷I脂质体在4 ℃环境中放置30 d，脂质体外观性状无明显变化，溶液仍呈均一、稳定状态。平均粒径、PDI、Zeta 电位和药物包封率结果见表9，变化幅度较小，表明该脂质体样品在低温（4 ℃）条件下放置30 d 稳定性良好。

表9 脂质体稳定性考察结果(,n=3)Table 9 Results of liposome stability(,n=3)

表9 脂质体稳定性考察结果(,n=3)Table 9 Results of liposome stability(,n=3)

t/d 粒径/nm PDI Zeta 电位/mV 包封率/%0 95.35±0.38 0.168±0.011-38.17±0.63 77.85±0.77 10 95.92±0.39 0.191±0.007-36.84±0.61 76.30±0.08 20 97.65±0.56 0.192±0.006-37.42±0.17 74.49±0.47 30 98.08±0.94 0.196±0.003-36.30±0.90 73.98±0.85

2.6.4 体外释放度 采用透析袋扩散法[13]考察地榆皂苷I脂质体的体外释放情况。精密移取质量浓度为1.5 mg/mL 的地榆皂苷I脂质体、TPGS 修饰的地榆皂苷I长循环脂质体、地榆皂苷I甲醇溶液各1 mL，分别装入经预处理的透析袋中。将透析袋密封并浸入30 mL 含0.5 mg/mL 聚山梨酯80 的PBS 溶液中（pH 7.4），温度为（37.0±0.5）℃，以100 r/min恒温振荡。分别于0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、36、48 h 取出1 mL 释放介质，过0.22 μm 滤膜于进样小瓶中，同时补充等温等体积的释放介质。样品中药物质量浓度按上述HPLC 法测定，并按公式计算不同时间点的药物累积释放率（Q），绘制累积释放曲线。

V0为释放介质总体积（mL），Ci和Cn为第i、n时间点取样时测得的药物质量浓度（mg/mL），V为取样体积（mL），m表示样品中地榆皂苷I的总质量

图6 显示了游离地榆皂苷I溶液、地榆皂苷I脂质体和TPGS 修饰的地榆皂苷I长循环脂质体在含0.5%聚山梨酯80 的PBS 溶液中的累积释放率。相比于游离地榆皂苷I溶液，2 种地榆皂苷I脂质体均表现出一定的缓释特性。24 h 后，地榆皂苷I脂质体和TPGS 修饰的地榆皂苷I脂质体的累积释放率分别为73.53%、75.89%，达到最大累积释放量，之后释放趋于平缓。而游离地榆皂苷I溶液在12 h后的累积释放率达到90%以上。两种脂质体显示出控制释放超过1 d，没有检测到药物的突释现象，这表明药物不位于脂质体表面，而是位于其核心。据报道，TPGS 影响纳米粒子药物释放系统的释放行为，药物的持续释放可归因于脂质体载体材料的延迟扩散。

图6 游离地榆皂苷I 溶液、地榆皂苷I 脂质体和TPGS修饰的地榆皂苷I长循环脂质体的体外释放曲线Fig.6 In vitro release curve of free ziyuglycoside I,ziyuglycoside I liposomes and TPGS modified ziyuglycoside I long-circulating liposomes

3 讨论

本实验采用薄膜分散法制备TPGS 修饰的地榆皂苷I长循环脂质体，操作简便，易获得形貌和粒径较好的样品。在薄膜分散法中，磷脂的水化是很关键的步骤，在分散过程中，干燥的磷脂膜之间发生了有规律的重排。加入水相后，有序的磷脂层从壁上脱离从而卷曲形成脂质体[14]，其中水化温度和水化时间的控制对样品能否成功制备至关重要，水化温度必须高于磷脂的相转变温度。经过预实验，最终确定的水化温度为37 ℃，水化时间为2 h，结果表明该条件下磷脂水化很充分，所制备的样品粒度均匀，久置无沉淀产生。最终制得的TPGS 修饰的地榆皂苷I长循环脂质体稳定性良好，具有较高的包封率和载药量，同时也展现出良好的缓释效果。

地榆皂苷I可溶于甲醇、甲醇-氯仿混合溶剂、DMSO 等有机溶剂，而不溶于氯仿。而薄膜分散法通常选择氯仿或氯仿-甲醇混合溶剂溶解膜材，因此本实验选择甲醇-氯仿混合溶剂，成膜性较好。实验中发现，有机溶剂的残留会影响磷脂的聚集状态，如体系中残留较大量的氯仿，获得的产品中有可能存在乳滴，从而使得制备的脂质体不稳定，出现分层现象，因此须严格控制有机溶剂的残留量。磷脂双分子层构成脂质体的基本骨架，不饱和磷脂在脂质体制备和储存过程中易被氧化，体内循环中会导致药物快速泄露。查阅相关文献，得知可在制备过程中添加脂溶性抗氧剂维生素E，实验结果也表明，所制备的脂质体稳定性较好。

实验中测得地榆皂苷I在水中的溶解度为0.25 mg/mL，极微溶解，所以游离地榆皂苷I在脂质体制剂的外水介质中以2 种形式存在：即地榆皂苷I的游离未溶解形式和游离溶解形式，且游离溶解形式的地榆皂苷I不能忽略。包封率是脂质体处方筛选及质量评价的重要指标，文献报道[15]测定包封率的方法有凝胶过滤法、超速离心法、透析法等，但这几种方法仪器要求条件高、繁琐，本实验使用超滤离心法测定包封率，方便、快速，且重现性好，更适于生产中进行质量控制。在包封率的测定中，通过0.22 μm 微孔滤膜滤过，将游离的未溶解形式的地榆皂苷I从脂质体混悬液中除去。将滤液（由脂质体包封的地榆皂苷I和游离的溶解形式地榆皂苷I组成）置于超滤离心管中，离心进行分离。在离心的过程中，时间过长会产热，而温度升高会影响脂质体稳定性，因此，最终选择的离心时间为20 min。结果得到的超滤液均为澄清状态，说明分离完全，超滤离心法可用于地榆皂苷I脂质体包封率的测定。在体外释放实验中，为解决地榆皂苷I在PBS 介质中溶解度低的问题，通过在释放介质中加入0.5%聚山梨酯80 满足了漏槽条件。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突