穿梅三黄散质量标准提升研究

陈 巍，张小华，陈 毓，金鸿亮，卓 寒

（江苏农牧科技职业学院，江苏 泰州 225300）

中药散剂是指一种或数种中药材或中药材提取物经粉碎、 混匀制成的粉状制剂。 散剂始载于《黄帝内经》， 在其他古代本草著作中亦有大量记载，是最古老的剂型之一。 散剂历代应用颇多，迄今仍为常用剂型之一［1］。

中兽药穿梅三黄散由大黄、黄芩、黄柏、穿心莲、乌梅5 味药材组成，依据处方的组成，采用主要药材名称的缩写并结合剂型特点而命名。 该品为灰黄色粉末，气微香，味微苦，具有清热解毒功效， 在鱼病的防治中主要用于细菌性败血症、肠炎、烂鳃与赤皮病［2］。 为进一步提升药品质量，保证临床用药安全有效，该试验采用显微鉴别法对制剂中大黄、黄芩、黄柏、穿心莲、乌梅进行显微特征研究，并采用薄层色谱法（TLC）分别对制剂中大黄和黄柏进行定性控制研究，对制剂的外观均匀度、水分、装量差异等进行了测定研究［3-4］。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 药物供质量标准研究的3 批穿梅三黄散分别来自常州亿美达生物科技有限公司， 批号190801； 宜兴市苏亚达生物技术有限公司， 批号190725；自制样品，批号190828。

1.1.2 对照品与对照药材大黄酸对照品， 批号110757—201906；大黄对照药材，批号190984—201906；黄柏对照药材，批号131414—201907，均购自中国食品药品检定研究院。

1.1.3 仪器OLYMPUSCX-31 系统显微镜（OLYMPUS）；电子天平（AY120，日本岛津公司）；BT-125D 电子分析天平；UV-2250 型紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；硅胶H 薄层板（青岛海洋化工厂分厂，20190506，规格：100 mm×200 mm；厚度：0.20～0.25 mm，活度：三色分开）；硅胶G 薄层板（青岛海浪硅胶干燥剂有限公司，20181210，规格：100 mm×200 mm；厚度：0.20～0.25 mm，活度：三色分开）。

1.1.4 试剂石油醚（30～60 ℃）、甲酸乙酯、甲酸均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 外观均匀度检查取供试品适量， 置于光滑纸上，平铺约5 cm2，将表面压平，在明亮处观察，应色泽均匀，无花纹与色斑。

1.2.2 水分含量测定依据《中华人民共和国兽药典》2015 年版二部 “水分测定法” 项下第一法（烘干法）进行测定，计算供试品中含水量［2］。

1.2.3 装量差异检查按照 《中华人民共和国兽药典》2015 年版二部附录 “最低装量检查法”检 查［2］。

1.2.4 显微鉴别参照《中华人民共和国兽药典》2015 年版二部，取穿梅三黄散粉末少许置载玻片上，滴加2～3 滴水合氯醛试液，按照热透化方法进行操作，在酒精灯上方加热并不断搅拌药粉，直至药粉细胞完全透化，再滴加适量稀甘油试剂，盖好盖玻片，在显微镜下观察特征［2］。

1.2.5 薄层色谱鉴别（TLC）

1.2.5.1 大黄TLC取穿梅三黄散粉末0.3 g，置于锥形瓶，加甲醇20 mL，室温浸渍1 h，过滤，取5 mL 滤液， 在水浴锅上蒸干， 残渣中加入10 mL蒸馏水溶解，再加入1 mL 盐酸试剂，置水浴锅加热回流30 min，立即冷却至室温，用乙醚振摇提取2 次，每次20 mL，合并乙醚萃取液，在水浴锅上蒸干，残渣加1 mL 三氯甲烷溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.1 g， 按照同法制成对照药材溶液。 取大黄酸对照品，加甲醇制成每毫升含有1 mg 的溶液，作为对照品溶液。采用薄层色谱法进行鉴定，吸取上述3 种溶液各4 μL，在同一块羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H 薄层板上点样，以石油醚（30～60 ℃）∶甲酸乙酯∶甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。

1.2.5.2 黄柏TLC参照《中华人民共和国兽药典》2015 年版二部中黄柏药材及含有黄柏药材的复方制剂如意金黄散等的薄层色谱方法［2］。 取穿梅三黄散粉末3 g，置于锥形瓶内，加入20 mL 甲醇试剂，超声处理20 min 后过滤，将滤液在水浴锅上蒸干，得残渣，再加入4 mL 甲醇试剂使残渣溶解，作为供试品溶液。 另取黄柏对照药材0.1 g，加甲醇试剂20 mL，超声处理20 min 后过滤，滤液置水浴锅上蒸干，得残渣，加入4 mL 甲醇试剂使残渣溶解，作为对照药材溶液。取盐酸小檗碱对照品，加入甲醇试剂制成每毫升含0.5 mg 的溶液，作为对照品溶液。采用薄层色谱法进行鉴定，吸取上述4 种溶液各2 μL，在同一硅胶G 薄层板上进行点样操作， 以苯∶乙酸乙酯∶甲醇∶异丙醇∶浓氨试液（6∶3∶1.5∶1.5∶0.5）为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，预饱和30 min，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。

2 结果与分析

2.1 外观均匀度检查

经检查，3 批样品的外观色泽均匀，无花纹和色斑，均匀度符合规定，具体结果见表1。

表1 3 批样品外观均匀度检查结果

2.2 水分含量测定

根据表2 可知， 测得3 批样品的水分含量分别为7.0%、6.8%、7.5%，均低于10%，符合规定。

表2 3 批样品水分检查结果 单位：%

2.3 装量差异检查

经检查，3 批样品装量不少于标准量的97%，均符合规定，具体结果见表3。

表3 3 批样品装量差异检查结果 单位：g

2.4 显微鉴别

穿梅三黄散的显微鉴别结果见图1～图6，显微镜放大倍数为10×40=400 倍。

由图1 可知， 经透化的大黄粉末在镜下可观察到草酸钙簇晶，棱角短钝，直径60～140 μm；由图2 可知， 透化后的黄芩粉末在镜下可观察到纤维细胞，呈淡黄色，梭形，壁厚，孔沟细；由图3 可知， 透化后的黄柏粉末在镜下可观察到晶鞘纤维，鲜黄色，含晶细胞的壁木化增厚；由图4 可知，透化后的乌梅粉末在镜下可观察到果皮表皮细胞，淡黄棕色，细胞表面呈多角形，壁稍厚［5］；由图5 可知， 乌梅粉末中表皮细胞布有单细胞非腺毛或毛茸脱落后的痕迹；由图6 可知，透化后的穿心莲粉末在镜下可观察到叶表皮组织中含钟乳体晶细胞。

图2 梭形纤维（黄芩）

图3 晶鞘纤维（黄柏）

图4 果皮细胞（乌梅）

图5 果皮细胞（非腺毛，乌梅）

图6 钟乳体（穿心莲）

2.5 薄层色谱鉴别（TLC）

2.5.1大黄TLC 由图7～图9 可知，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同的5 个橙黄色斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显示相同的橙黄色荧光斑点，氨气熏蒸后，斑点由橙黄色变为红色。 不同生产单位的3 批样品的薄层图谱均能显示样品中大黄的特征。

图7 190828 样品穿梅三黄散大黄薄层图

2.5.2黄柏TLC 由图10 可知，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上， 显示相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显示相同的一个黄色荧光斑点。 但从图中2 次平行试验结果可以看出， 对照品和样品的主斑点不在同一位置，薄层色谱条件有待摸索，故建议该鉴别不列入质量标准正文。

图1 草酸钙簇晶（大黄）

3 讨论

中兽药或者兽医中药是指用于预防或治疗动物疾病、促进动物生长的中药。我国是世界上唯一完整保留独特传统医药理论体系的国家。 中兽药为我国传统兽医学的重要组成部分， 已有两千多年的历史。中兽药既可预防和治疗动物疾病、促进动物生长，又不会产生药物残留，所以越来越多的兽药生产企业和畜禽养殖者对传统中兽药越发重视，加大生产和使用力度。 《中华人民共和国兽药典》2015 版二部收载成方制剂和单味制剂共196种，如大黄芩鱼散、七清败毒颗粒、龙胆碳酸氢钠片、鱼腥草注射液等；散剂有146 种，如仁香散、止咳散、四味穿心莲散、龙胆泻肝散等。 中兽药剂型比较单一，口服液、灌注剂等液体制剂只有百分之十左右，其余百分之九十左右是粉散剂。因此，刘月月等［6］、胡莉萍［7］针对中兽 药的研究与应用现状，提出了中兽药新药研发存在稳定性研究不充分、剂型单一、忽略中药使用特点等系列问题。

中药散剂是我国临床医学应用最早、 简单易行、疗效确切的剂型之一，具有制备简单、易分散、起效快等优点，但是中药的成分非常复杂，影响中药鉴别的因素很多。 许曾等［8］等以2015 版《中国药典》为标准，对中药散剂在粒度、外观均匀度、水分、装量差异、微生物限度等方面存在的质量问题进行了综合分析，微生物限度超标为主要问题，应从药材、辅料及包材的管理、环境、设备清洁程度和人员操作方面严格管理。 金军等［9］研究了蒙药白蒿三味汤散剂质量标准， 以盐酸麻黄碱为指标进行含量测定，控制成品的质量，分离效果好，专属性强，简便准确。黄芊等［10］建立了痔炎冲洗灵散剂的质量标准， 采用薄层色谱法对该散剂中中药成分青黛和大黄进行了鉴别， 用高效液相色谱法测定了该散剂中野菊花中蒙花苷的含量， 操作简便，重复性好，测定结果准确可靠。 色珍等［11］建立了藏药股乃贡炯散剂的薄层色谱鉴别标准，用TLC 法对股乃贡炯散剂中车前状垂头菊、 印度獐牙菜、紫檀香、芫荽果等进行薄层色谱定性鉴别，专属性强，定性质控可行。 从近十年文献报道看，国内对中药散剂的质量标准研究还有待深入，而国外对中药散剂的质量标准研究报道较少。

图8 190725 样品穿梅三黄散大黄薄层图

图9 190801 样品穿梅三黄散大黄薄层图

中兽药穿梅三黄散外用散剂，由大黄、黄芩、黄柏、穿心莲、乌梅5 味药材组成，依据处方的组成， 采用主要药材名称的缩写并结合剂型特点而命名。该品为灰黄色粉末，气微香，味微苦，具有清热解毒功效， 在鱼病的防治中主要用于细菌性败血症、肠炎、烂鳃与赤皮病。在检查项中，外观均匀度检查、水分含量测定检查、最低装量检查等试验结果均符合规定， 检查项的方法均可作为穿梅三黄散的质量标准内容。 穿梅三黄散组成为药材原粉，可以建立显微鉴别方法。该方法专属性强且易观察，显微特征明显，所以将显微鉴别内容进行了保留［12］。

图10 穿梅三黄散中黄柏薄层图谱

中兽药穿梅三黄散的组方中，大黄为君药，在处方中的比例大，含量高，对原标准中大黄薄层鉴别进行了复核， 笔者发现样品的主斑点与对照品和对照药材的主斑点一致，3 批的准确度和重现性良好，无干扰，进行了保留。 同时，笔者参照《中华人民共和国兽药典》2015 年版二部中黄柏药材及含有黄柏药材的复方制剂如意金黄散等的薄层色谱方法进行鉴别，结果显示，对照品和3 批样品的主斑点均不在同一位置， 薄层色谱条件有待摸索，故不建议列入质量标准正文。

随着许多中药材价格的持续升高和对显著临床疗效的期望， 导致个别中兽药生产企业出现以次充好、质量检测把关不严、违规使用替代品、用量不足及非法添加化学药物等现象， 所以必须建立一个科学的符合中兽医发展规律的质量标准体系，推动中兽药事业不断发展壮大［13-14］。 鉴于此，积极开展针对中兽药制剂质量标准的研究， 这也是中兽药研究与产业化的重要内容， 对我国中兽医药事业的发展具有深远影响。