纤溶酶原激活物抑制剂－1基因多态性在恶性肿瘤合并静脉血栓栓塞症患者中的表达

贺小艳，夏春勇，滕金凤，丁 玲

静脉血栓栓塞症 （venous thromboembolism，VTE）包括深静脉血栓栓塞（deep venous thromboembolism，DVT）和肺栓塞（pulmonary thromboembolism，PE）。自19世纪50年代开始，越来越多的研究认为纤溶系统基因突变与VTE的发病相关，其中血浆纤溶酶原激活抑制剂－1（plasminogen activator inhibitor－1，PAI－1）基因4G/5G的多态性会引起纤维蛋白溶解异常，与静脉血栓形成密切相关［1］。国内外实验表明［2］，PAI－1 4G/5G启动子区域纯合4G/4G基因的遗传会导致纤维蛋白溶解障碍以及血栓形成。有研究表明，癌症和静脉血栓的形成具有很大的相关性，并且合并有静脉血栓栓塞症的癌症患者预后更差［3］。因此，笔者选取恶性肿瘤合并VTE患者作为研究对象，同时选取同期在该院接受治疗的恶性肿瘤患者作为对照进行研究，利用荧光原位杂交技术（FISH）测定PAI－1基因表达，并进行比较分析，探讨PAI－1基因在恶性肿瘤患者静脉血栓发生的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2019年9月—2020年8月笔者医院收治的32例确诊为恶性肿瘤合并VTE患者作为研究组，其中肺癌10例、胰腺癌3例、宫颈癌3例、卵巢癌2例、食管癌2例、乳腺癌2例、前列腺癌2例、肝癌1例、结直肠癌1例、其他肿瘤6例；合并转移22例，未转移10例。选择同期35例恶性肿瘤患者作为对照组，其中肺癌13例、食管癌3例、乳腺癌3例、肝癌3例、胰腺癌2例、前列腺癌2例、结直肠癌2例、卵巢癌1例、宫颈癌1例、其他肿瘤5例；淋巴结转移14例、淋巴结未转移21例。

1.2 纳入标准恶性肿瘤患者经病理学或者细胞学检测确诊；VTE诊断标准按照美国胸科医师学会2016年《静脉血栓栓塞症治疗指南》［4］。该研究得到了医院伦理委员会的批准。

1.3 主要仪器多通道荧光定量分析仪（型号：Fascan 48S），西安天隆科技有限公司生产。

1.4 方法采集患者外周静脉血2 ml于EDTA抗凝管中，送至医院药物基因检测室进行检测。检测方法：将200μl血样加入1 ml样本萃取液中，上下颠倒离心管10次或振荡，使血样与样本萃取液混匀；静置10 min后，用高速离心机12000转/min（7500 g离心力）离心3 min，富集得到“米粒样”白细胞；加入400μl细胞保存液，振荡混匀；取1μl白细胞样本加入探针试剂中，离心约15 s，使白细胞样本聚于探针试剂管底部。最后在荧光检测仪上通过荧光原位杂交技术（FISH）完成检测。

1.5 统计学方法采用SPSS 16.0软件进行统计分析。研究组和对照组之间的基因型和等位基因分布采用χ2检验比较；采用χ2检验基因型分布是否符合Hardy－Weinberg遗传平衡法则。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 PAI-1基因4G/5G基因型的总体分布PAI－1 4G/5G基因分布频率，经统计检验，预测例数与实际例数差异无统计学意义（P=0.8698），符合Hardy－Weinberg遗传平衡，表明所选取的样本具有群体代表性。见表1、表2。

表1 PAI-1基因4G/5G基因型分布

表2 PAI-1 4G/5G基因分布Hardy-Weinberg遗传平衡检验

2.2 2组PAI-1基因型比较经统计检验，2组3种基因型分布差异具有统计学意义（P=0.0198）；2组等位基因4G和5G频率差异具有统计学意义（P=0.0038）。见表3。

表3 2组PAI-1 4G/5G基因型及等位基因频率分布［例（%）］

2.3 2组出现肿瘤转移的PAI-1 4G/5G基因型比较研究组出现转移与未转移的频率与对照组相比，差异具有统计学意义（P=0.0359）。对出现转移患者的PAI－1 4G/5G基因型比较，结果显示，2组出现转移患者的PAI－1 4G/5G基因型与同组未转移患者比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表4。

表4 2组出现转移PAI-1 4G/5G基因型频率分布［例（%）］

3 讨论

静脉血栓栓塞症（VTE）是一种多基因遗传病。目前，已经有多个基因被证明与VTE风险相关，如ABO基因，FII G20210A基因，FV Leiden，PAI-1 4G/5G，MTHFR C677T/A1298C，EPCR6936A/G等［4］。PAI-1属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族的成员，通过抑制组织型纤溶酶原激活剂-1（tissue-type plasminogen activator，t-PA）和尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase-typeplasminogen activator，u-PA），发挥着溶解血凝块的作用［5］。PAI-1除了抑制血管内纤维蛋白溶解之外，还参与细胞黏附、迁移的调控［6］。近年来，在静脉血栓的相关研究中，PAI-1基因启动子区域4G/5G插入/缺失的多态性最为热门。有研究发现，4G等位基因能够结合转录激活子，增强mRNA转录并提高PAI-1水平；与此相反，5G基因能够结合阻遏蛋白，从而减少mRNA转录和降低PAI-1水平［7］。PAI-1纯合子4G/4G基因型与PAI-1水平升高相关，会导致机体出现低纤维蛋白溶解状态，从而增加静脉血栓的形成风险［8］。该研究结果显示研究组4G/4G基因型10例占31.25%，对照组4G/4G型4例占11.43%，4G4G基因多态性与静脉血栓形成有显著相关性。研究组5G/5G基因型6例占18.75%，对照组5G/5G型17例占48.57%，5G5G基因多态性与静脉血栓形成有显著相关性。有研究分析了u-PA、PAI-1基因的4G/5G多态性与接受辅助内分泌治疗的node-阴性、hr-阳性/her2-阴性特定乳腺癌患者的经典预后因素之间的关系，发现u-PA，PAI-1肿瘤组织水平低者生存率高，基因型4G5G和5G5G较基因型4G4G者生存率高，同样提出u-PA和PAI-1肿瘤组织水平以及PAI-1基因的4G/5G多态性对乳腺癌患者预后评估具有重要意义的［9］。对出现转移患者的PAI-1 4G/5G基因型比较结果显示，研究组、对照组出现转移患者的PAI-1 4G/5G基因型与同组未转移患者比较，差异均无统计学意义。

PAI-1 4G4G可作为恶性肿瘤发生VTE的高危因素之一，可以在肿瘤患者发生血栓的预防、治疗中发挥重要作用。由于该研究为单中心研究，且样本量有限，未针对转移严格设定纳排标准，尚需扩大样本量进一步深入研究。