自贡地区健康成人外周血淋巴细胞亚群参考区间的建立

黄婧芫

摘要：目的：探讨自贡地区健康成年人外周血淋巴细胞亚群的变化特点，建立自贡地区健康成年人外周血淋巴细胞亚群参考区间。方法：收集509例健康成年人外周血标本（年龄18～79岁，其中男257例、女252例），并按照性别年龄分组，18～50岁为青年组（247例），≥51岁为中老年组（262例），用流式细胞仪进行外周血淋巴细胞亚群检测（荧光微球绝对计数法），用正态分布法和百分位数法建立各指标的参考区间。结果：男性CD3+（个/ul）、CD3+CD8+（个/ul）高于女性，CD3+CD4+%低于女性（P<0.05）;青年组CD3+CD8+%、CD3+CD8+（个/ul）高于中老年组（P<0.05）;青年组CD3+CD4+CD8+%、 CD3+CD4+CD8+（个/ul）低于中老年组（P<0.05）。结论：由于不同年龄组、不同性别淋巴细胞亚群部分指标差异有统计学意义，研究中把各淋巴细胞亚群分组间无统计学意义的合并一起制定相应参考区间，初步建立了自贡地区健康成人外周血淋巴细胞亚群参考区间，为今后自贡地区艾滋病及相关疾病的诊断、治疗以及疗效评价提供依据。

关键词：健康成年人;淋巴细胞亚群;参考区间

外周血淋巴细胞（T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞）是人体的免疫细胞，在维持机体的免疫功能中起重要作用[1]。 淋巴细胞亚群分析能客观反映机体当前的免疫功能，在艾滋病、白血病、肿瘤疾病、感染性疾病等疾病的辅助诊断、发病机制分析、疗效观察及预后判断方面具有重要意义[2]。健康人群外周血淋巴细胞亚群正常参考区间，是监测和评价机体免疫功能的基础，对疾病的诊断分期、預后评估、疗效评价等均有重要指导意义。

本研究对509例健康成年人外周血样本淋巴细胞亚群进行检测，旨在初步建立健康成年人外周血淋巴细胞亚群参考区间，为机体免疫状态分析和临床诊疗提供参考。

1材料与方法

1.1 研究对象

选择2021年1～6月于我院体检中心进行体检的509例健康成年人为研究对象，年龄18～79岁、平均（42.2±12.25）岁，男257例、女252例。18～50岁为青年组（247例），≥51岁为中老年组（262例）。均无现病史，全血细胞分析、肝肾功能检查正常，排除患有人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、梅毒螺旋体等感染者和免疫系统等疾病患者。

1.2 仪器与试剂

仪器为Beckman/Coulter NAVIOS型流式细胞仪，试剂及溶血剂均为美国美国Beckman/Coulter公司提供的专用配套测定试剂（淋巴细胞亚群单克隆抗体组合试剂CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5，CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5，精密度质控微球Flow-check Pro Fluorospheres，荧光微球Flow-Count Fluorospheres，溶血剂OptiLyse C Lysing Solution，缓冲液PBS）。

1.3 实验方法

1.3.1 仪器校正

取出精密度质控微球Flow-check Pro Fluorospheres恢复室温后，对流式细胞仪进行光路校准，变异系数（CV）在要求范围内，以确保仪器处于稳定状态，保证实 验结果的准确性。

1.3.2 标本检测

荧光微球绝对计数法。根据试剂盒说明书，每份标本同时做2管，分别向试管中加入20ul稀释好单克隆抗体组合（100 ul单克隆抗体组合加500 ul生理盐水）和反向加样的20u1 EDTA-K2抗凝全血，漩涡混匀器混匀后室温孵育15～30 min，加入溶血剂OptiLyse C 200ul放置20 min后（待完全溶血），加入500 ul 缓冲液PBS漩涡混匀器混匀后准备上机（须在2 h内上机完成检测）。

1.4 质量保证

参加卫健委室间质评成绩满意，室内质控在控。

1.5 统计学分析

使用SPSS19.0统计软件进行处理，所有数据用单样本 Kolmogorov-Smirnov 检验是否为正态分布，用（±s）表示，参考区间建立采用（±1.96s），非正态分布数据用P2.5～P97.5描述，进行t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 不同性别健康成年人外周血淋巴细胞亚群比较

男性CD3+（个/ul）、CD3+CD8+（个/ul）高于女性，CD3+CD4+%低于女性（P<0.05）。其余项目男女之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2 不同年龄组健康成年人外周血淋巴细胞亚群比较

青年组CD3+CD8+%、CD3+CD8+（个/ul）高于中老年组（P<0.05）;青年组CD4+/CD8+、CD3+CD4+CD8+%、 CD3+CD4+CD8+（个/ul）低于中老年组（P<0.05）。见表1。

2.3 自贡地区健康成年人外周血淋巴细胞亚群参考区间的建立

由于不同年龄组、不同性别淋巴细胞亚群部分指标差异有统计学意义，研究中把各淋巴细胞亚群分组间无统计学意义的合并一起制定相应参考区间。男性组与女性组CD3+（个/ul）、CD3+CD8+（个/ul）、CD3+CD4+%需分组建立参考值，青年组与中老年组CD3+CD8+%、CD3+CD8+（个/ul）、CD3+CD4+CD8+%、CD3+CD4+CD8+（个/ul）需分组建立参考值。因此，按年龄或性别组分别制定相应的95%参考值区间（±1.96s）（P2.5～P97.5）。见表2。

3讨论

实验室检测项目的参考区间来源主要有卫健委临检中心推荐、试剂说明书、公开发表文献、实验室自建等。目前，大多数第三方实验室或检验科检测淋巴细胞亚群，方法学参考卫健委临检中心发布的 WX/T360—2011文件《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》，而参考区间大多采用《中国人血液淋巴细胞免疫表型参考值调查》。调查结果表明，淋巴细胞亚群分布受地域、性别、年龄等因素的影响。此类参考区间无法满足本地区临床诊疗的需要，从表1、表2可以看出，部分淋巴细胞亚群项目参考区间与性别、年龄有相关性。因此，在健康成人中，根据年龄和性别确定淋巴细胞参考值范围对于评估患者结果非常重要。

不同仪器、试剂、标本制备方法和操作的差异等也可能影响淋巴细胞亚群检测结果。然而，其是否会成为导致检测结果具有显著性差异的影响因素有待进一步研究证实。在完善实验技术、严格控制质量的基础上，分别建立不同年龄、性别等健康人群淋巴细胞亚群的参考范围仍然有助于增加实验室检测的可定量性，从而提高其临床应用价值。本研究不足之处是研究例数偏少，年龄范围未收集到大于80岁以上老年人，尚需要多中心大规模实验室共同对健康人群 参考区间做进一步调查研究。

综上所述，不同人群之间外周血淋巴细胞亚群参考区间具有统计学差异。采用本实验室建立的相关参考区间更切合本地区受检人群的实际情况，可为免疫状态分析和临床诊疗提供更精准的参考依据。初步建立了自贡地区健康成人外周血淋巴细胞亚群参考区间，为今后自贡地区艾滋病及相关疾病的诊断、治疗以及疗效评价提供依据。

参考文献

[1]Tsokos GC，Rose NR.Immune cell signaling in autoimmune disease[J].Clin Immunol，2017（181）：1-8.

[2]卫生部临床检验标准专业委员会.流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南：WS/T360—2011 [S].北京：中国医学院科学院北京协和医院，2011.3E9C0194-2AC7-49DE-9272-19AFACD7ECF0