血清miR-1和miR-26水平与川崎病患儿的关系及其对冠状动脉损伤的评估价值

魏伟 魏灵睿 冷辉

(1.湖北省随州市中心医院儿科，湖北 随州 441300； 2.湖北大学生命科学学院，湖北 武汉 430062； 3.湖北省随州市中心医院病案统计科，湖北 随州 441300)

川崎病(Kawasaki disease，KD)是一组以全身血管炎为主要病理特征的黏膜皮肤淋巴结综合征，多发于5岁以下的婴幼儿，临床可表现为发热、皮疹、手足红肿和眼结膜充血等[1]。目前，KD的发病机制尚不明确，临床主要采用静脉输注丙种球蛋白和口服阿司匹林等治疗，但仍有部分患者的治疗效果并不十分满意[2]。有研究[3-4]显示，KD是儿童心脏病的重要诱因之一，若不及时诊治，可引起冠状动脉损伤(coronary artery lesion，CAL)，甚至发生心肌梗死，严重影响患儿的预后。分析KD患儿的血清学指标，正确评估患者的疾病发展，指导临床治疗，具有重要的临床意义。miRNA是一类具有多种调控作用的单链非编码RNA，可与靶mRNA的3’-UTR结合，调节细胞内的多条重要信号通路[5]。miR-1和miR-26均为近年发现的与心血管疾病密切相关的miRNA，可调控细胞内重要信号通路的表达，影响血管平滑肌细胞和血管内膜细胞的增殖，参与心血管疾病的发生和发展[6-7]。但miR-1和miR-26与KD患儿之间的关系尚不清楚。因此，本研究检测了KD患儿的血清miR-1和miR-26水平，并进一步分析血清miR-1和miR-26水平与患儿临床特征和CAL发生之间的关系，旨在探索miR-1和miR-26与KD病情发展之间的关系，以指导临床治疗。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选择2016年1月—2019年12月湖北省随州市中心医院收治的92例KD患儿，男58例，女34例，年龄0.50～5.00岁，平均(2.76±0.85)岁。纳入标准：均符合小儿心脏病学中KD的诊断标准[8]，均处于急性发作期，均为初次发病，均获得患儿家属知情同意，经医院医学伦理委员会审核通过。排除标准：合并急性淋巴结炎和病毒性心肌炎等炎性疾病；合并先天性心功能不全者；合并肝肾等严重脏器功能不全和免疫系统疾病者；合并血液系统疾病者。根据KD患儿治疗后CAL发生情况，将其分为CAL组(n=32)和无CAL(NCAL)组(n=60)。CAL组男19例，女13例，年龄0.50～5.00岁，平均(2.62±0.83)岁，身高(96.25±10.15) cm，体重(13.72±2.91) kg；NCAL组男39例，女21例，年龄0.50～5.00岁，平均(2.84±0.89)岁，身高(97.41±10.73) cm，体重(14.40±3.27) kg。另选取同期于本院体检的46例儿童为对照组，男30例，女16例，年龄1.00～5.00岁，平均(2.92±0.92)岁。

1.2 治疗方法

所有纳入患者均参考KD治疗指南进行治疗[9]，采用静脉输注丙种球蛋白和口服阿司匹林治疗，对于静脉输注丙种球蛋白无反应的患儿采用激素治疗。对于治疗过程中合并CAL的患者参考中华医学会制定的治疗指南进行治疗[10]，采用小剂量抗血小板药、抗凝药物和溶栓治疗等。

1.3 观察指标

分别于急性期(治疗前)和恢复期(治疗后第5天)，采集患者血液3 mL，离心15 min(3 500 r/min)，取血清，采用荧光定量PCR检测血清miR-1(上游引物：5’-AGCGGCAGAATCAGGAGTA-3’，下游引物：5’-GAGGACCTTGGAGGCAGAC-3’)和miR-26(上游引物：5’-CGTAGGGGCGAGGGCTGAGC-3’，下游引物：5’-AGGCGATGCGTAGCGATGGCG-3’)水平，引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。治疗后，采用彩色多普勒超声诊断仪(iE33型，PHILIPS公司)检测冠状动脉内径，并进行CAL分级[10]，Ⅰ级：冠状动脉未扩张；Ⅱ级：冠状动脉轻度扩张,且在30 d内恢复；Ⅲ级：出现冠状动脉单个小至中型冠状动脉瘤；Ⅳ级：出现巨大冠状动脉瘤，或1支冠状动脉内多个动脉瘤，但无狭窄；Ⅴ级：冠状动脉造影显示有狭窄或闭塞。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 KD患儿的血清miR-1和miR-26水平

KD患儿急性期和恢复期的血清miR-1和miR-26水平明显低于对照组(P<0.05)，冠状动脉内径明显大于对照组(P<0.05)；KD患儿急性期的血清miR-1和miR-26水平明显低于恢复期(P<0.05)，冠状动脉内径明显大于恢复期(P<0.05)。见表1。

表1 KD患儿的血清miR-1和miR-26水平

2.2 KD患儿血清miR-1和miR-26水平与CAL之间的关系

CAL组和NCAL组KD患儿急性期的血清miR-1和miR-26水平明显低于恢复期(P<0.05)，冠状动脉内径明显大于恢复期(P<0.05)；CAL组KD患儿急性期和恢复期的血清miR-1和miR-26水平明显低于NCAL组(P<0.05)，冠状动脉内径明显大于NCAL组(P<0.05)。见表2。

表2 KD患儿血清miR-1和miR-26水平与CAL之间的关系

2.3 KD患儿CAL分级与血清miR-1和miR-26水平之间的关系

不同CAL分级KD患儿急性期的血清miR-1和miR-26水平明显低于恢复期(P<0.05)，冠状动脉内径明显大于恢复期(P<0.05)；随着CAL分级增加，KD患儿急性期和恢复期的血清miR-1和miR-26水平明显降低(P<0.05)，冠状动脉内径明显增大(P<0.05)。见表3。

表3 KD患儿血清miR-1和miR-26水平与CAL之间的关系

2.4 KD患儿的血清miR-1和miR-26水平与冠状动脉内径之间的相关性

KD患儿急性期血清miR-1和miR-26水平与冠状动脉内径呈显著负相关(r=-0.367，-0.391；P<0.05)。见图1。

2.5 血清miR-1和miR-26水平对KD患儿CAL发生的预测价值

血清miR-1和miR-26预测KD患儿CAL的曲线下面积(AUC)依次为0.817和0.854，联合预测的AUC为0.930，见图2和表4。

图2 血清miR-1和miR-26水平预测KD患儿CAL的ROC曲线

表4 血清miR-1和miR-26水平预测KD患儿CAL的ROC曲线特征

3 讨论

KD是一种多发于婴幼儿的全身血管炎症性疾病，主要累及分布全身的中小血管，尤其是冠状动脉，可引起冠状动脉扩张、狭窄和冠状动脉瘤等严重并发症的形成，甚至可发展为缺血性心脏病和猝死[11]。目前，KD并发CAL的机制尚不明确，大部分学者认为可能与炎症介质的大量释放、血管内皮功能障碍和血小板活化等有关[12-13]。分析KD患者的发展机制，寻找特异性的分子标志物，评估患者预后，指导临床治疗，对于减少CAL具有重要意义。miRNA是一类能调节基因表达的短单链内源非编码RNA，引起目标RNA降解或翻译抑制，从而对基因表达具有调控作用[14]。研究[15]显示，miR-1包括miR-1-1和miR-1-2，分别位于染色体20q13.33和18q11.2，在心肌梗死患者的外周血中表达量明显升高。miR-26包括miR-26a和miR-26b，是多种肿瘤发生和发展及预后的标志物，可调控肿瘤细胞的恶性生物学行为。近年研究显示，miR-26还可参与心律失常、心血管重构和心肌梗死等心血管疾病等的发生和发展[16]。因此，本研究通过检测KD患儿的血清miR-1和miR-26水平来分析miR-1和miR-26与KD患儿CAL之间的关系。

本研究中，急性期和恢复期KD患儿的血清miR-1和miR-26水平均明显低于健康对照组，冠状动脉内径均明显高于健康对照组，且急性期血清miR-1和miR-26水平均明显低于恢复期，提示KD患儿存在冠状动脉病理解剖学改变，血清miR-1和miR-26水平随病情发展而变化。已有研究[17-18]显示，miR-1是急性心肌梗死患者早期诊断的血清标志物，可抑制血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A，VEGFA)和内皮素的表达，抑制血管内皮细胞的增殖，抑制血管的形成。Yan等[19]的研究显示，急性KD患儿的血清miR-1水平明显升高，在恢复期下降至正常水平，本研究结果与其有所差异，可能是由于miR-1参与调控体内多种病理生理途径，其变化水平与患者自身特点有关，随病情进展变化而有所差异。Zhou等[20]的研究显示，血清VEGFA水平与KD患儿CAL的发生密切相关，血清VEGFA水平持续升高与CAL的发生有关，提示KD患儿血清miR-1水平下降，可能通过使血清VEGFA水平持续升高，引起血管损伤。Chen等[21]的研究显示，miR-26可下调肿瘤坏死因子-α/核因子κB(TNF-α/NF-κB)信号通路的表达，抑制白介素-6的释放，降低细胞内炎症因子水平，抑制血管癌的发生。TNF-α/NF-κB信号通路是体内重要的炎症信号通路，可诱导全身炎症反应，诱导血管内皮细胞损伤，与KD的发生和发展密切相关[22]，提示KD患儿血清miR-26水平下降，可能通过活化TNF-α/NF-κB信号通路，诱导血管内皮细胞损伤，临床可通过检测血清miR-1和miR-26水平来评估患者的病情发展。

本研究中，CAL组和NCAL组患儿急性期的血清miR-1和miR-26水平明显低于恢复期，冠状动脉内径明显大于恢复期，且随着CAL分级增加，KD患儿急性期和恢复期的血清miR-1和miR-26水平明显降低，冠状动脉内径明显增大，提示血清miR-1和miR-26水平与KD患儿CAL的发生有关。本研究中，血清miR-1和miR-26水平与KD患儿的冠状动脉内径具有显著的相关性，提示临床可根据患儿的血清miR-1和miR-26水平评估患者的病情发展。本研究中，血清miR-1和miR-26水平对KD患儿CAL的发生具有较高的预测价值，且联合检测可明显提高其预测价值，提示临床可根据患儿的血清miR-1和miR-26水平评估患者的病情发展，预测CAL的发生，指导早期预防治疗。

综上所述，KD患儿的血清miR-1和miR-26水平均明显降低，冠状动脉内径均明显增大，血清miR-1和miR-26水平与冠状动脉内径具有显著的相关性，可用于临床预测KD患儿CAL的发生。本研究不足之处在于样本数量较少，且血清miR-1和miR-26调控KD患儿CAL发生的具体机制尚不明确，需扩大临床样本量进一步深入研究。