乳腺癌患者血浆D-二聚体水平与乳腺癌组织中Ki-67表达的相关性

蒋凤莲 杨伟洪 黄文宇

乳腺癌是女性中最常见的癌症类型,得益于目前先进的检查方法及治疗手段,近年来死亡率已大大降低；但是,它仍然是许多国家妇女死于癌症的第二大主要原因,仅次于肺癌。临床发现癌症和高凝状态之间存在相关性,体现在肿瘤细胞的血管生成、进展、转移性扩散中,晚期癌症D-二聚体水平升高,这是由于交联纤维蛋白降解引起的；表明纤维蛋白溶解和止血的整体激活［1］。肿瘤细胞的异常增殖和迁移是肿瘤进展期间肿瘤病理学的标志,有关肿瘤细胞增殖活性和迁移的研究促进了对肿瘤生物学行为的理解,并为肿瘤的诊断,治疗和预后提供了临床证据［2］,Ki-67 是位于10 号染色体上的一个基因,可以检测到增殖细胞核基质中的核蛋白,其功能已证明与有丝分裂有关,特别是与肿瘤细胞的增殖密切相关［3］,本研究探讨乳腺癌患者血浆D-二聚体水平与乳腺癌组织中 Ki-67 表达及其与临床特征的关系,希望在临床工作中对乳腺癌患者的病情与预后评估提供帮助。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2017年10月～2019年10月50例就诊于中山市博爱医院的乳腺癌患者,均为女性且临床资料完整,年龄30～78 岁,平均年龄(50.35± 12.86)岁,所有患者均依据临床、病理检查结果进行确诊。收集所有患者临床资料,包括：绝经状态、年龄、TNM、T,淋巴结转移,组织学分级、Ki-67 表达。排除标准：①合并存在有其他恶性肿瘤疾病；②在3 个月 内有改变了凝血因子情况,例如华法林治疗,血栓发作,凝血障碍,肝病,妊娠,重大创伤,严重感染；③在 近3 个月内进行了手术。

1.2 检测方法

1.2.1 D-二聚体检测方法 所有研究对象抽取静脉血3 ml 放于抗凝管中,检测血浆D-二聚体水平,血浆D-二聚体水平正常参考值为＜0.5 mg/L。

1.2.2 Ki-67 检测方法 将乳腺癌标本在10%福尔马林中固定48 h,石蜡包埋,并使用Ki-67 抗体切成4 μm薄片用于SP 免疫组化法(IHC)染色,磷酸盐缓冲盐水用作阴性对照。在光学显微镜下分析Ki-67 染色,基于肿瘤细胞的染色程度和染色反应的强度来评估IHC染色结果。

1.3 观察指标及判定标准

1.3.1 血浆D-二聚体水平与临床病理特征的关系 比较不同绝经状态、TNM、T、淋巴结转移、组织学分级、Ki-67 表达患者的血浆D-二聚体水平。

1.3.2 Ki-67 表达情况与临床病理特征的相关性 比较不同绝经状态、TNM、T、淋巴结转移、组织学分级患者Ki-67 表达与临床病理特征的相关性。

1.3.3 判定标准 按切片中细胞有无黄棕色区域判定为阳性标准,Ki-67 的细胞染色阳性表达率≥14%视为 Ki-67 高表达,低于此标准视为低表达。

1.4 统计学方法 采用SPSS22.0 统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差()表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t 检验；Ki-67 与临床特征间的相关性应用Spearman 相关分析。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌患者中血浆D-二聚体水平与临床病理特征的关系 绝经前后患者的血浆D-二聚体水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)；患者TNM 越高血浆D-二聚体水平越高,差异有统计学意义(P＜0.05)；患者T越高D-二聚体水平越高,差异有统计学意义(P＜0.05)；有淋巴结转移患者血浆D-二聚体水平高于无转移患者,差异有统计学意义(P＜0.05)；患者组织学分级越高D-二聚体水平越高,差异有统计学意义(P＜0.05)；Ki-67 高表达患者D-二聚体水平高于低表达患者,差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.2 乳腺癌患者组织中Ki-67 表达与临床病理特征的相关性分析 50 例患者中Ki-67 低表达23 例,高表达27 例,经Spearman 相关分析显示,乳腺癌组织中Ki-67 表达情况与患者绝经状态无相关性(r=0.171,P＜0.05),与TNM、T、淋巴结转移、组织学分级呈正相关(r=0.364、0.411、0.395、0.556,P＜0.05)。见表1。

表1 50 例乳腺癌患者血浆D-二聚体水平、Ki-67 表达与临床病理特征的关系(,n)

表1 50 例乳腺癌患者血浆D-二聚体水平、Ki-67 表达与临床病理特征的关系(,n)

注：不同绝经状态、TNM、T、淋巴结转移、组织学分级、Ki-67 患者的血浆D-二聚体水平比较,P＜0.05

3 讨论

血浆D-二聚体是通过血纤蛋白溶酶降解血纤蛋白而产生的,其水平随着血纤蛋白溶解的增强而增加,在许多临床情况下,例如吸烟、感染、怀孕、老年、外伤、肿瘤等,血浆D-二聚体水平升高［4］,D-二聚体升高可能由癌症中的组织因子(TF)表达介导［5］,TF 表达增加会诱导过量的纤维蛋白形成,并导致静脉血栓栓塞症(VTE)和癌症患者的D-二聚体水平升高。Diao 等［6］观察到,远处转移的胃癌患者,尤其是内脏转移的患者血浆D-二聚体水平显著升高。实际上,其建议D-二聚体是胃癌患者TNM 的有前途的预测指标。Lee等［7］报道,大肠癌患者血浆D-二聚体和纤维蛋白原降解产物水平的升高与临床TNM 显著相关。此外,在大肠癌患者中,术前血浆D-二聚体水平与更大的T 和淋巴结转移有关［8］。

Dirix 等［9］进行的类似研究,在比利时的30 例乳腺癌患者中,发现D-二聚体水平与肿瘤负荷和进展动力学相关,并得出结论,D-二聚体水平与肿瘤负荷呈正相关(P=0.001)；Révillion 等［10］在印度尼西亚对79 例 乳腺癌患者进行的另一项研究得出的结论是癌症血浆D-二聚体水平与患者的TNM 呈正相关；在印度,Dent等［11］对90 例乳腺癌患者进行的一项类似研究得出的结论是,D-二聚体水平升高标志存在淋巴管浸润、肿瘤转移。本研究结果显示,乳腺癌患者随着肿瘤TNM的升高、原发肿瘤分期越高肿瘤负荷越大、肿瘤组织学分化越差,D-二聚体的水平在升高,有淋巴结转移者D-二聚体的水平高于无转移者,提示随着肿瘤的增殖、浸润和转移,D-二聚体的水平也升高,根据上述研究,本研究证实了D-二聚体水平与乳腺癌发生之间存在关系。

自从1991 年Gerdes 等［12］首次将其作为一种非组蛋白以来,Ki-67 作为一种重要的肿瘤增殖标记就受到了越来越多的关注,并且与肿瘤的发展、进展、侵袭、转移和预后高度相关。它仅在细胞周期的增殖和合成阶段在增殖细胞核中表达,可以从G1 到M 期检测到,而在静止G0 期则不能检测到,它已被用作癌症的增殖标记［13］。郑克文等［14］已经揭示了在肾癌细胞中敲低Ki-67 可以显著抑制癌细胞增殖并促进细胞凋亡,表明Ki-67 可能通过影响癌细胞的生长和凋亡而参与肾癌的进展。此外,已证明在膀胱癌细胞中敲除Ki-67可抑制肿瘤生长［15］。本研究结果表明,乳腺癌组织Ki-67 表达水平与癌症TNM 呈正相关。此外,Ki-67表达水平与T 和淋巴结转移呈正相关,同时Ki-67 与肿瘤组织学分化之间也发现了显著的关系,因为分级更高的肿瘤具有更高水平的细胞增殖,因此比其他分级的肿瘤更具侵袭性,表明Ki-67 可能影响乳腺癌细胞的恶性程度,可能Ki-67 高表达影响癌细胞的增殖和迁移,可见Ki-67 高表达在乳腺癌的发生发展中很重要。

肿瘤转移过程涉及多种肿瘤-宿主相互作用［16］,为了生存,转移的癌细胞必须离开原发性肿瘤,迁移到淋巴系统中,在转移部位建立新的血供。纤维蛋白重塑参与大部分转移步骤,在恶性疾病中纤维蛋白溶解活性上调,而在转移性疾病中纤维蛋白溶解活性升高。纤维蛋白被纤溶酶原激活剂系统降解为D-二聚体,这是一种酶促级联反应,对于降解侵入淋巴管腔所需的细胞外基质蛋白至关重要。淋巴结转移患者中升高的D-二聚体可能反映了在存在淋巴管浸润的情况下系统性或肿瘤性凝血激活和纤维蛋白溶解。本研究中,Ki-67 高表达患者D-二聚体水平高于低表达者,两者存在相关性,本研究的结果与以上发现得到了证实,这表明Ki-67 可能通过影响癌细胞的增殖和迁移而参与了乳腺癌的发展,而肿瘤转移过程中由于交联纤维蛋白降解引起的D-二聚体水平升高。

综上所述,D-二聚体水平升高与TNM、T、淋巴结转移、组织学分级、Ki-67 表达相关,Ki-67 表达与TNM、T、淋巴结相关,D-二聚体水平与Ki-67 表达相关,临床工作中监测乳腺 D-二聚体和Ki-67 表达有助于对患者病情与预后的评估。