注射用腺苷钴胺配制后颜色异常原因分析*

江小四，方先骏，程 钢

（安徽医科大学第一附属医院药剂科·国家中医药管理局中药化学三级实验室，安徽 合肥 230022）

腺苷钴胺又称腺苷辅酶维生素B12，是维生素B12的活性辅酶形式之一，临床主要用于治疗多发性神经炎、三叉神经痛、神经麻痹等［1］，也常与其他药物联用，治疗糖尿病周围神经病变、带状疱疹、多发性神经炎、老年性聋等疾病［2-5］。腺苷钴胺的化学性质不稳定，对光敏感，对酸、碱、热和氧亦不稳定［6］，易分解产生腺苷、羟钴胺素等杂质［7-8］。因此，注射用腺苷钴胺溶解后须立即使用，同时注意避光。其一般选用注射用水或0.9%氯化钠注射液，肌肉注射或静脉注射给药。2019年7月9日，某三甲医院内分泌病区护士配制注射用腺苷钴胺时常规抽取维生素B1注射液2 mL溶解，溶解后溶液呈无色透明，与此前得到的红色澄清液不符，且同时配制的其他腺苷钴胺溶液的颜色也均为红色澄清液体，怀疑该支药品质量存在问题。药学人员依据生产企业提供的质量标准，首先抽样检验该批次其他药品，再从光照、pH、溶剂及与其他药品配伍等因素入手，考察注射用腺苷钴胺溶解后颜色异常的原因，为临床安全用药提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1200型高效液相色谱仪，包括G1310A四元泵、G1314BVWD型紫外检测器、手动进样器、色谱工作站、DT-230A型柱温箱（美国Agilent公司）；TU-1810型紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；PHS-3E型酸度计（上海仪电科学仪器股份有限公司）；BT25S型电子天平（赛多利斯科学仪器＜北京＞有限公司，精度为0.01 mg）；BiosaferSB-3200 DT-6L型超声清洗机（南京赛飞生物科技有限公司）。

1.2 试药

腺苷钴胺对照品（中国食品药品检定研究院，批号为14658-201803，规格为每瓶100 mg，含量为99.0%）；注射用腺苷钴胺（哈尔滨三联药业股份有限公司，批号为1903171P2122，规格为每支1 mg）；维生素B1注射液（石药银湖制药有限公司，批号为3719061910，规格为每瓶2 mL∶100 mg）；维生素C注射液（山东新华制药股份有限公司，批号为1901151，规格为每瓶5 mL∶0.1 g）；维生素B6注射液（山东方明药业集团股份有限公司，批号为19071242，规格为每瓶2 mL∶0.1 g）；硫辛酸注射液（亚宝药业集团股份有限公司，批号为190604，规格为每瓶6 mL∶0.15 g）；10%氯化钾注射液（中国大冢制药有限公司，批号为9196K5，规格为每瓶10 mL∶0.1 g）；50%葡萄糖注射液（中国大冢制药股份有限公司，批号为9I80J1，规格为每瓶20 mL∶10 g）；灭菌注射用水（四川科伦药业股份有限公司，批号为M19031905-2，规格为每瓶500 mL）；0.9%氯化钠注射液（安徽丰原药业股份有限公司，批号为118030606，规格为每瓶500 mL）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 注射用腺苷钴胺质量考察

含量测定：色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为甲醇-水（30∶70，V／V）；流速为0.8 mL／min；检测波长为260 nm；柱温为30℃；进样量为10μL。取腺苷钴胺对照品5.41 mg，精密称定，置50 mL棕色容量瓶中，加灭菌注射用水溶解并定容，摇匀，即得质量浓度为0.107 1 mg／mL的对照品溶液。取样品1支，加2 mL 0.9%氯化钠注射液溶解、摇匀，移至10 mL棕色容量瓶中，用灭菌注射用水反复洗涤西林瓶，直至瓶中无红色液体，洗液一并置容量瓶中，加灭菌注射用水定容，摇匀，即得供试品溶液。分别取对照品溶液和供试品溶液各10μL，进样测定（以上操作均在室温避光条件下操作）。记录色谱图，按外标法以峰面积计算样品含量，结果样品中腺苷钴胺的含量为标示量的105.0%，符合标准（90.0%～110.0%）［9］。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatograms

其他项目检查：根据药品质量标准［9］对样品进行性状、pH、羟钴胺素测定，结果均符合要求，说明该批药品质量合格。

2.2 腺苷钴胺溶液光稳定性考察

取样品14支，分别加入2 mL 0.9%氯化钠注射液溶解，摇匀，于室温见光条件下放置14 d内，逐日观察溶液颜色、褪色、浑浊沉淀情况。结果溶液颜色和澄清度未见明显变化。并取放置0，1，3，5，9，14 d的样品，依法配制供试品溶液，分别进样测定，色谱图见图2。以0 d的含量为100%计算，结果第1，3，5，9，14天的相对百分含量分别为44.0%，10.0%，8.4%，3.4%，2.9%。可见，腺苷钴胺见光极易分解。

2.3 配伍溶液外观性状考察

取样品8支，分别注入维生素B1注射液、维生素B6注射液、维生素C注射液、硫辛酸注射液、50%葡萄糖注射液、10%氯化钾注射液、0.05 mol／L硫酸溶液、0.1 mol／L氢氧化钠溶液各2 mL，摇匀，各移至5 mL烧杯中，在室温下放置0，1，2，3，24 h时观察，结果各配伍溶液各时点均呈红色，均未产生浑浊沉淀。其中，前六种配伍药品均为该病区当日配制过的药品，在室温放置24 h内颜色无异常，说明导致病区配制液颜色异常的原因不是样品与以上药品配伍所致。后两种配伍药品属强酸、强碱溶液，样品与之配伍后均呈红色澄清，故排除病区配制液颜色异常为pH变化所致。

图2 光稳定性考察高效液相色谱图Fig.2 HPLC chromatograms of the photostability test

2.4 病区样品与维生素B1的鉴别对比

以移液枪精密量取病区配置样品溶液、维生素B1注射液各0.1 mL，分别置2 mL EP塑料离心管中，加灭菌注射用水1 mL，超声，摇匀，分别得相应供试品溶液。取2种供试品溶液各10μL，按2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图（见图3）并比较。

图3 鉴别对比高效液相色谱图Fig.3 HPLC chromatograms of the identification and comparison

由图3可见，病区样品供试品溶液与维生素B1供试品溶液色谱峰的保留时间、峰高、峰面积、色谱峰个数基本一致，说明病区样品供试品溶液中含有维生素B1，且2种供试品溶液中维生素B1浓度一致；病区样品供试品溶液在腺苷钴胺的保留时间（2.90 min左右）未出现色谱峰，说明病区样品中不含腺苷钴胺。

3 讨论

3.1 该批次药品是否存在质量问题

对注射用腺苷钴胺（批号为1903171P2122）的质量检验结果表明，该批次药品含量测定、性状、pH、羟钴胺素等项目均符合药品质量标准，质量合格。

3.2 样品光稳定性考察的目的和结果

有文献报道，0.5 mg／mL的腺苷钴胺水溶液置透明容量瓶中，于（55±5）lx光照强度、25℃条件下放置，60 min后含量降至70.35%～73.48%［10-11］，若在日光下放置，照射30 min含量仅剩0.73%［6］。本试验中腺苷钴胺配制液置药品原包装棕色西林瓶中，有标签遮挡，相当于采取了一定的遮光措施，故含量下降较文献报道慢，且在14 d时仍能检测出腺苷钴胺。病区注射用腺苷钴胺配制后颜色异常事件发生于7月9日，同日反映问题后及时送至药检室，置冰箱冷藏避光保存，直至7月22日获得生产企业提供的腺苷钴胺对照品后开始试验。考虑腺苷钴胺见光极易分解，故检测14 d室温不避光贮存条件下腺苷钴胺的含量变化，考察其配制液见光稳定性。结果表明，室温不避光放置14 d后，腺苷钴胺配制液在2.9 min保留时间处仍能检测到色谱峰。峰面积测定结果显示，腺苷钴胺相对含量为2.9%，而供试品溶液在腺苷钴胺保留时间处未见色谱峰，说明病区样品中不含腺苷钴胺。

此外，还可结合质谱，通过检测腺苷钴胺主要分解产物腺苷、羟钴胺素等［7-8］，进一步验证病区样品中是否含有腺苷钴胺，结果会更严谨。

3.3 病区样品配制液颜色异常原因分析与建议

试验结果显示，病区样品中不含腺苷钴胺。推测原因可能有，该药品生产厂家在生产过程中漏灌了药液（粉），导致该支药品为空瓶，灯检及相关质检人员未能将空瓶检出，致使该次品流入市场；药房药师调配及发药时未核查到药品最小包装；病区护士配制前未仔细查看瓶内是否有药物，直接将维生素B1注射液作为溶剂注入，而维生素B1注射液为无色透明，故“配好”的药液呈无色透明。

建议药品生产厂家加强对生产机件的保养维护，减少因灌装瓶倾斜、移位等造成瓶口对不准灌装口，使药液（粉）漏出，可积极应用药液灌装机在线称重系统，有效剔除不合格装量药瓶，保证每支药品剂量精准；灯检和质检人员须严把质量关，避免漏筛；药师要严谨对待针剂调剂工作，严格遵循“四查十对”，认真细致地核查到药品最小包装，杜绝不合格药品进入临床。