哈尔滨师范大学梦溪湖细菌总数测定

徐胜楠

（哈尔滨师范大学,黑龙江 哈尔滨150025）

水中细菌总数与水体受有机污染的程度相关，现今国内外对细菌总数测定的方法有：检测片法、测定细胞重量法、显微记数法、稀释倒平皿法，荧光法等。在本研究通过平板计数细菌总数测定法，采样分析了梦溪湖4 个采样点的细菌总数，为梦溪湖水质污染状况评价和水污染改善提供参考依据。

1 研究区域概况与采样点的布设

本文的研究区域为梦溪湖，位于哈尔滨师范大学中部，其中共分四个区域，均为人工湖，人工湖泊采样点应该尽可能覆盖污染物所形成的污染面积，寻找能够切实反映水域的水质特征的采样点。2017 年5 月确定梦溪湖水体的布点，共布设4 个点，6-9 月分别于每月的同一天取水样，并在取水的当天做实验，隔天进行菌落计数并记录。共计16 个点，采样点的分布如图1 所示。

图1 采样点示意图

2 材料与方法

2.1 水样的采集

将水面以下0～15 厘米的深水样品浸入带塞的灭菌的玻璃瓶中，将玻璃瓶瓶口朝下翻过来取下玻璃塞使水将流入瓶中，在玻璃瓶满时用瓶塞盖住瓶口，从水中取出后尽快检查。

2.2 细菌总数测定方法

本文使用平板计数法测定梦溪湖湖水中细菌总数[1-2]。

2.2.1 依照国家卫生部于2001 年9 月份实施的《生活用水卫生规范》操作[3]，按照10 倍稀释法和去离子水将水样稀释成倍数不同的水样，每个稀释度重复两次。然后加入到四十五摄氏度的普通细菌培养基约15mL，立即充分混匀，等到培养基凝固后，放到三十七摄氏度的恒温培养箱培养四十八小时，取出计数细菌总数。

2.2.2 优势菌落种群的鉴定：使用菌落记数方法，通过观察已计数的有菌落的平板上的菌落的颜色、形态等性状，然后根据出现的频率确定优势菌落并进行分离培养。对所选菌株进行现状观察、革兰氏染色、大小观测、等性状实验，将形状相同的归类为同一种菌株[4]。按照水中组菌总数测定操作过程[5]操作。

2.3 研究方法

使用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，并且使用平板菌落计数法来测定水中的细菌总数。因为水中的细菌对营养和其他生长条件有不同的要求，不可能找到使水中的所有细菌在单一条件下生长和繁殖的培养基并且水中有许多种细菌，所以在培养基平板上生长的细菌数量大约是一个近似值。

2.4 水样的稀释

取出三个已经灭好菌的空试管，分别加入9mL 的去离子水。取1ml 的水样注入6-1，9ml 去离子水内，充分震荡摇匀后再自6-1 取1ml 至6-2 去离子水内,如此稀释到6-3,稀释度分别为6-1、6-2 和6-3，将水样充分震荡，使可能存在的细胞胶团得以分散开；如果三个稀释度的菌数依然过多或过少而导致无法计数,则继续稀释或减小稀释倍数来调节结果。

2.5 可能遇到的困难和问题以及相应的解决办法和措施（表1）

表1 可能遇到的困难和问题以及相应的解决办法和措施

3 结果与分析

梦溪湖细菌总数的测定得到的结果如表2 所示。

如图2，从六月份起，哈尔滨师范大学梦溪湖中的细菌总数逐渐升高，表明水中有机质逐渐增多，水质愈加下滑，2017 年6月水体中有机物质含量较低，2017 年7 月起，有机物质均有增加，4 个布设点中1 号与2 号水体中增加的有机物质尤其高，经多次稀释测得：1 号采样点6 月水体中细菌总数为200 个/ml，7月水体中细菌总数为225 个/ml，8 月水体中细菌总数为500 个/ml，9 月水体中细菌总数为690 个/ml；2 号采样点6 月水体中细菌总数为65 个/ml，7 月水体中细菌总数为130 个/ml，8 月水体中细菌总数为380 个/ml，9 月水体中细菌总数为540 个/ml；3 号采样点6 月水体中细菌总数为80 个/ml，7 月水体中细菌总数为65 个/ml，8 月水体中细菌总数为128 个/ml，9 月水体中细菌总数为250 个/ml；4 号采样点6 月水体中细菌总数为26 个/ml，7月水体中细菌总数为15 个/ml，8 月水体中细菌总数为68 个/ml，9 月水体中细菌总数为112 个/ml；革兰氏染色结果为蓝紫色阳性，优势菌种为短杆状菌。6-9 月，1 号点位细菌平均总数为404 个/ml；2 号为279 个/ml；3 号为个131/ml；4 号为55 个/ml。可以看出在6-9 月，1 号点位水质最差，细菌平总数达到404个/ml；4 号点位水质最好，细菌平均总数为55 个/ml。

表2 梦溪湖细菌总数测定结果表

图2 6-9 月梦溪湖各采样点细菌总数变化图

图3 6-9 月细菌平均总数折线图

由图3 可知，对2017 年6-9 月梦溪湖中不同监测点的细菌总数测定结果表明，6-9 月梦溪湖各监测点的细菌总数平均值分别为六月93 个/ml、七月109 个/ml、八月269 个/ml、九月398个/ml，总体呈上升趋势，1 号点位最多，九月份总数达到690 个/ml，4 号点位最少，九月份总数112 个/ml。从实验结果中得出，2017 年6-7 月，水体水质较好，细菌总数为93 个/ml，2017 年8-9 月，有机物质增多，原因为梦溪湖为人工湖，8-9 月为温度较高的月份，8 月平均温度为25℃左右，9 月平均温度为22℃左右，水中的藻类、微生物、细菌等在此温度下大量繁殖、死亡，导致水质下降。综上所述，梦溪湖水体中细菌种类丰富，具体表现为在培养皿上的细菌群落形态各异，其中短杆状菌为优势菌种。并且，梦溪湖水体中还有大量浮游生物，藻类等。这说明梦溪湖水质污染较小，在满足可提供人们日常观赏游玩的需求上还具有一定的自净能力，达到景观用水中细菌总数的标准要求。

4 结论

采用平板菌落计数法分时段测定梦溪湖水体中的细菌总数来反应水体水质及水中有机物质的变化，在整个夏季，水质最好的月份为6 月，水质最差的月份为9 月。相同布点位水质会由于时间的不同而变化，水体中有机物质会随着时间的增加而增加。经革兰氏染色实验得出，水体中短杆状菌为优势菌种，符合《地表水环境质量标准》(GB3838-2002) 中规定Ⅳ类水体中细菌总数的标准限值，能够满足人们日常观赏需要。

本文对哈尔滨师范大学梦溪湖水中细菌总数进行测定，结果显示湖水质受污染较小，可供一般的观赏游玩，美化了校园环境，但是我们也要继续加强对梦溪湖水体的保护。

5 建议及对策

对于哈尔滨师范大学梦溪湖湖水，在微生物过多时，可采用两种方法：

5.1 循环过滤法。用理化的方式来清洁哈尔滨师范大学梦溪湖中的杂质，将水中的固体物质和水体分离开来。这种方法通常采用喷洒化学试剂使梦溪湖水体中形成含有污染物的沉淀物，用这种方法来处理哈尔滨师范大学梦溪湖中的水。事实上这种方法适用于含有很多沉积物或悬浮固体物质（SS）的人工湖水。但是，该方法对人工湖水中的有机物质和藻类植物的抑制和处理并无太大效果，而且但凡人工湖水面积扩大一点，就要延长过滤的周期，从而使得水质根本达不到想要的效果。

5.2 曝气法。这种方法就是使用可以曝气的装置每天十二小时向水中注入氧气来升高水中溶解氧的含量、用以达到净化人工湖水体的目的。在此方法中哈尔滨师范大学使用的大部分设备是普通的曝气器和小型的喷泉装置设备等。这种方法只能改善人工湖水体的变黑、发臭的现象，对于抑制藻类生长和净化水体的质量没有明显的治疗效果。