蛋白激酶D1在宫颈癌中的表达及临床意义

帅 旭 何跃东

1.四川大学华西妇产儿童医院(成都，610041)；2.四川省成都市第五人民医院

宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤，发病出现低龄化受到广泛关注[1]。宫颈病变的产生是一个持续且漫长的过程，研究发现增殖细胞核抗原(Ki67)、P53等增殖基因、抑癌基因在宫颈癌的发生发展中占据重要地位，对宫颈癌诊疗及预后均有作用[2]。蛋白激酶D1(PKD1)为近年来新发现的肿瘤调控因子，在多种恶性肿瘤细胞中均能高表达，在细胞黏附、迁移、分化、凋亡等过程中具有调节作用[3]。然而国内外对PKD1与宫颈癌的关系研究甚少。因此，本研究收集宫颈标本探究PKD1的表达及与临床病理学特征关系，为宫颈癌诊疗提供新靶点。

1 资料与方法

1.1 研究对象

收集2018年1月-2019年12月本院就诊的宫颈癌患者48例(宫颈癌组)、CINⅢ患者42例(CINⅢ组)及正常宫颈者38例(对照组)的宫颈组织标本。纳入标准：①经阴道镜活检、宫颈锥切术、子宫全切术或宫颈癌手术取得宫颈组织标本，且经病理学检查证实；②年龄>18岁；③资料齐全。排除标准：①既往放化疗史；②既往宫颈手术史；③合并免疫性疾病或肝肾功能不全；④合并其他恶性肿瘤。本研究通过医院伦理委员会审批，研究对象均自愿签署知情同意书。

1.2 检测方法

1.2.1免疫组化法3组标本切片脱蜡水化，0.3%H2O2-甲醇溶液处理切片；行两步免疫组化染色，利用磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次后加PKD1抗体(武汉博士德生物工程有限公司)孵育60min，PBS洗3次加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔PKD1二抗(武汉博士德生物工程有限公司)孵育40min，再PBS洗3次后加入二氨基联苯胺(DAB)显色液孵育10min；经HARRIS苏木素复染5min，水洗分化、蓝化，最后脱水封片，行染色封片观察。

1.2.2阅片及免疫组化评分由病理科医师双盲法阅片，每张切片取10个阳性细胞富集的高倍视野(×200)观察；根据阳性细胞数量分别记为0分(无阳性细胞)、1分(阳性细胞≤25%)、2分(25%<阳性细胞≤50%)、3分(50%<阳性细胞≤75%)、4分(阳性细胞>75%)；根据着色强度分别记为0分(未着色)、1分(淡黄色)、2分(棕黄色)、3分(棕褐色)。上述2项评分相加即为最终得分，≤1分为阴性，>1分为阳性。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 各组年龄比较

宫颈癌组年龄(47.62±9.15)岁(34～63岁)，CINⅢ组年龄(46.95±9.02)岁(32～62岁)，对照组年龄(46.71±9.06)岁(33～61岁)。3组年龄比较无差异(P>0.05)。

2.2 PKD1表达情况比较

3组宫颈标本PKD1阳性表达率及免疫组化评分比较，均为宫颈癌组>CINⅢ组>对照组(P<0.05)，见表1。图A为宫颈癌宫颈组织PKD1表达情况，见大量阳性细胞；图B为CINⅢ的宫颈PKD1表达情况，阳性细胞较多，深染；图C为CINⅠ的宫颈组织PKD1表达情况，见少量阳性细胞，染色较深；图D为正常宫颈组织PKD1表达情况，未见阳性细胞，淡染。具体见图1(212页)。

表1 PKD1表达及评分情况

2.3 PKD1与宫颈癌临床病理特征及Ki67关系

宫颈癌组中，PKD1阳性组39例、阴性组9例，两组年龄、组织学分型、病灶大小、人乳头瘤病毒(HPV)感染情况比较无差异(P>0.05)。 FIGO分期、低分化、淋巴结转移及Ki67表达阳性率PKD1阳性组均高于PKD1阴性组(P<0.05)。见表2。

表2 PKD1与宫颈癌临床病理特征及Ki67关系[例(%)]

2.4 PKD1表达与宫颈癌临床病理特征及Ki67表达相关性

经Spearman秩相关检验，宫颈癌组PKD1免疫组化评分与FIGO分期、淋巴结转移及Ki67免疫组化评分呈显著正相关(P<0.05)，与肿瘤分化程度呈显著负相关(P<0.05)。见表3。

表3 PKD1与宫颈癌临床病理特征及Ki67相关性分析

3 讨论

PKD1是PKD蛋白家族成员之一，广泛参与细胞内关键信号通路传导[4]。Ganju[5]等发现PKD1在胰腺癌组织中高表达，且特异性PKD1蛋白抑制剂能抑制胰腺癌组织增生，控制胰腺癌进展。在胃癌组织中，PKD1启动子异常甲基化，使PKD1表达下调，参与胃癌的发生发展[6]。故PKD1在不同类型肿瘤细胞中表达情况不同，发挥着不同的生物学功能。本研究分析了PKD1在宫颈癌组织中的表达情况，结果显示宫颈标本PKD1阳性表达率及免疫组化评分在宫颈癌组中最高，CINⅢ组次之，两组均显著高于对照组。说明PKD1不仅在宫颈癌细胞中高表达，也在癌前病变中高表达，且PKD1在正常宫颈组织癌变过程中可能持续发挥作用，与国外研究结果一致[7]。

磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路在恶性肿瘤发生、发展、转归中发挥重要作用。有研究显示PKD1可通过抑制磷脂酰肌醇3磷酸(PIP3)的生成，调控PI3K/Akt信号通路，实现促肿瘤细胞增殖作用[8]。本研究中宫颈癌PKD1阳性组FIGO分期高于PKD1阴性组，且PKD1免疫组化评分与FIGO分期呈显著正相关。说明PKD1可能通过调控PI3K/Akt信号通路等方式，参与宫颈癌细胞增殖过程[9]。另据文献报道，PKD1还能介导血管内皮生长因子(VEGF)，通过调节组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性，发挥促肿瘤血管新生作用[10]。本研究也发现PKD1阳性组低分化、淋巴结转移率均高于PKD1阴性组，且PKD1免疫组化评分与淋巴结转移呈显著正相关，而与肿瘤分化程度呈显著负相关；即宫颈癌恶性程度越高，PKD1表达上调越明显。考虑该结果与PKD1通过调控PI3K/Akt信号通路、调节HDAC活性等多种途径，发挥促宫颈癌细胞增殖、血管新生作用，加速肿瘤细胞浸润、转移有关[11]。

另外，大量研究证实HPV感染与宫颈癌具有显著相关性，HPV感染后宫颈上皮细胞可表达大量E6蛋白，引起P53抑癌基因大量降解，促进肿瘤发生[12]。而本研究结果显示宫颈癌PKD1表达与HPV感染无明显相关性。分析原因可能与样本量较少，检验效能不足有关[13]。因此，宫颈癌PKD1表达与HPV感染关系还需大样本研究。

近年来，Ki67已成为宫颈癌等恶性肿瘤的重要标志物，能反映细胞群体的增殖活性，其表达随着宫颈癌病变程度的加重而增强，与宫颈癌病情发展及患者预后情况密切相关[14-15]。本研究中宫颈癌PKD1阳性组Ki67表达阳性率高于PKD1阴性组，且PKD1免疫组化评分与Ki67免疫组化评分呈显著正相关。说明PKD1可能与Ki67存在协同效应，在宫颈癌的发生发展中发挥促进作用[16]。

综上所述，PKD1在宫颈癌及CINⅢ中表达均上调，且与宫颈癌FIGO分期、淋巴结转移、分化程度密切相关，与Ki67表达情况一致，具有一定临床应用价值，但其作用机制仍需进一步探讨。