原发性胆汁性胆管炎患者PBMC中Caspase-1与IL-18水平观察

汪玉龙 郝维敏 郭志国 王晶 刘志

原发性胆汁性胆管炎(PBC)是消化系统中常见的一种疾病，罹患群体多为女性，发病原因较多且复杂，同时该疾病多与风湿性关节炎、硬皮病等并存，不利于患者正常生活、工作的开展[1-2]。既往已有较多学者指出免疫紊乱与PBC的发生、发展关系密切，因此现阶段针对PBC患者免疫机制的研究已成为一项热门课题[3-4]。天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)及白细胞介素-18(IL-18)均具有调控机体免疫的作用，本次研究对PBC患者治疗时的外周血单个核细胞(PBMC)中的Caspase-1、IL-18进行观察，分析其在PBC发生、发展中的作用，现报道如下。

资料与方法

一、一般资料

纳入对象为安徽医科大学附属宿州医院于2018年4月至2019年4月收治的PBC患者，共计54例，设为观察组，另外选取同期体检健康的志愿者54名纳入研究对象，设为健康组。观察组中男女占比为12/42例，最大年龄64岁，最小年龄42岁，中位年龄53岁，肝硬化分级[5]A、B、C级例数分别为25、18、12例；健康组中男女占比为14/40例，最大年龄64岁，最小年龄43岁，中位年龄53岁。两组基础信息对比P>0.05。研究开展经医院伦理委员会批准。

二、纳入与排除标准

(一)纳入标准 ①患者均参照疾病相关诊断共识确诊[6]，志愿者体检结果无异常且与患者不存在血缘关系；②>18岁且<65岁；③均签署知情同意书。

(二)排除标准 ①非PBC；②同时患有血液系统疾病；③同时患有恶性肿瘤与心脑血管疾病；④精神异常不能配合本研究。

三、实验室检查

患者(治疗前)与志愿者入院后抽取EDTA-K2抗凝全血3 mL，经离心Ficoll法分离PBMC，使用RNA蛋白提取试剂盒按照说明书提取RNA，并以微量核酸定量仪对RNA的浓度及纯度进行检测，随后取1 μg RNA行逆转录后行定量PCR扩增，检查Caspase-1、IL-18的mRNA水平，扩增条件95 ℃ 30 s，1个循环，95 ℃ 5 s、95 ℃ 34 s，40个循环。Caspase-1上游引物5′-AGAGAACGGTGGTGCTGAACAA-3′，Caspase-1下游引物5′-CCTTTCGGAATAACGGAGT-3′，IL-18上游引物5′-GCTTGAATCTAAATTATCAG-TC3′，IL-18下游引物5′-GAAGATTCAAATTGC-ATCTTAT3′。

四、统计学分析

结 果

一、两组Caspase-1、IL-18水平观察

观察组Caspase-1、IL-18水平高于健康组(P<0.05)。见表1。

表1 两组Caspase-1、IL-18水平观察 (±s)

二、不同肝硬化分级患者Caspase-1、IL-18水平观察

不同患者Caspase-1、IL-18水平观察，C级>B级>A级，均有P<0.05。见表2。

表2 不同肝硬化分级患者Caspase-1、IL-18水平观察 (±s)

三、相关性分析

Caspase-1、IL-18水平与肝硬化分级呈正相关，差异均有P<0.05。见表3。

表3 Caspase-1、IL-18水平与肝硬化分级的相关性分析

讨 论

PBC是一种起病隐匿且逐渐发展的慢性自身免疫性疾病，临床特征表现为导管上皮细胞损失、抗线粒抗体阳性等，该疾病起病后会受机体免疫的影响形成胆管炎及进行性肝胆纤维化、硬化，严重者甚至还会导致肝功能丧失[7-9]。PBC的治疗药物仅有熊去氧胆酸，但治疗后效果并不理想，患者仍需接受肝移植手术，再加上我国近年来PBC的患病群体不断增加，因此与该疾病治疗有关的研究日益受到临床医师的重视[10-12]。

在本次研究中，观察组Caspase-1、IL-18高于健康组，提示PBC患者体内Caspase-1、IL-18水平呈现出高表达。Caspase-1是Caspase家庭中的一员，通常以pro-Caspase-1形式存在，当Caspase-1活化后能够发挥免疫、炎症调控的作用[13-15]，IL-18为白细胞介素-1家族的一员，对体内的炎症因子增殖具有促进作用，同时Caspase-1能转化IL-18前体，形成IL-18[16-18]，在转化的过程中容易导致机体出现炎症或自身免疫性疾病，故患者体内Caspase-1、IL-18水平明显高于健康人。樊佳等[19]在PBC患者的Caspase-1水平观察中证实，PBC患者Caspase-1水平相对于正常人会明显上升，同时其还会参与到疾病的发生中，与本次研究具有一定的相似之处。

在不同肝硬化分级患者的Caspase-1、IL-18水平观察中，C级>B级>A级，表明Caspase-1、IL-18水平随疾病严重程度的上升而增加，Caspase-1、IL-18可参与到疾病的发生与发展中。PBC是一种发病后逐渐进展的疾病，本次研究PBC患者PBMC中Caspase-1、IL-18随疾病进展不断增加，笔者分析可能是PBC发病后机体各种细胞受到危险信号的刺激，导致Caspase-1活化，并促进IL-18成熟，从而造成机体出现持续的炎症反应、免疫失调，故加重病情。这与李腾达等[12]的研究结果相一致。最后为验证Caspase-1、IL-18与肝硬化分级间的关系，笔者借助Spearman系数进行检验，证实Caspase-1、IL-18水平与肝硬化分级呈正相关，能够与上述研究结果相互验证，故PBC的诊治中临床也可通过检查Caspase-1、IL-18作为参考依据。

综上，Caspase-1、IL-18与PBC的发生、发展关系密切，在PBC患者体内Caspase-1、IL-18呈现出高表达。