正交试验法优选参葛颗粒的水提工艺

单 鑫，徐 丹，涂清波，陈 璟

（南京中医药大学翰林学院，江苏 泰州 225300）

参葛颗粒由葛根、党参、五味子、枸杞子、甘草5味药组成，诸药合用，具有养阴清热、化瘀通络的功效，对络脉不和、酒毒伤中所引起的酒精性肝损伤有较好的养护作用[1-2]。

水提药物甘草中的主要有效成分是甘草苷、甘草酸铵；枸杞多糖是枸杞子中的有效成分，同时，醇提药渣中也含有多糖类成分[3-4]。本研究选取甘草酸铵、甘草苷及水提浸出物得率作为考察指标，采用L9（34）正交试验法优选参葛颗粒的水提工艺，以扩大其适用范围。

1 试验材料

1.1 仪器

WATERS Alliance-017（2998PDA，美国Waters公司），HH-420型水浴锅（上海力辰邦西公司），FA1104N电子天平（上海天平仪器厂），MS-105DU型电子天平（Mettler Toledo），Milli-Q超纯水系统（Millipore），KQ-500B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

甘草、枸杞子（安徽丰原铜陵中药饮片有限公司），甘草苷、甘草酸铵（中国食品药品检定研究院），甲醇、乙腈（美国Merk公司），超纯水（试验室自制），其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 水提工艺设计

按照L9（34）正交表设计水提工艺，以加水量（A）、提取次数（B）、提取时间（C）、浸泡时间（D）为考察因素，进行2味饮片的回流提取工艺优选，选取甘草苷、甘草酸铵、水溶性浸出物为指标进行测定，各因素水平如表1所示。

表1 水提工艺因素水平

2.2 样品处理方法

称取枸杞子10 g、甘草10 g，加入相应配方量按最佳醇提工艺提取后的药渣，共9份，分别以相应的因素水平进行回流提取，水提液过滤，浓缩成浸膏，备用。

2.3 甘草苷、甘草酸铵含量测定

色谱条件为色谱柱：Tnature C18柱（4.6 mm×250.0 mm，5 μm），流动相为流动相A（乙腈）、流动相B（0.05%磷酸水），梯度洗脱，如表2所示。流速：1.0 mL/min，检测波长：250 nm，柱温：30 ℃，进样量：10 μL。

表2 流动相梯度洗脱程序

称取样品浸膏适量（相当于甘草饮片0.2 g），精密称定，置于250 mL锥形瓶中，精密量取70%乙醇100 mL加入，称重，回流30 min，冷却，称重，用70%乙醇补足失重，摇匀，过滤，收取滤液，即得供试品溶液。

2.4 水提浸出物得率测定

取各水提正交样品浸膏（相当于生药饮片2 g），精密称定，置于干燥恒重的蒸发皿中，置于105 ℃烘箱中，干燥3 h取出，置于干燥器中，冷却30 min，放凉，精密称重，计算水提浸出物得率。

2.5 正交试验结果与分析

对于9份样品中测得的甘草苷、甘草酸铵、水提浸出物得率，采用综合评分法评价，综合评分=0.5（Amax－Ai）+0.3（Bmax－Bi）+0.2（Cmax－Ci）+100。

Ai为甘草苷质量，Amax为各组中甘草苷质量最大值；Bi为甘草酸铵质量，Bmax为各组中甘草酸铵质量最大值；Ci为浸出物得率，Cmax为各组中浸出物得率最大值，结果如表3～4所示。

表3 L9（34）正交试验结果

表4 方差分析结果

方差分析结果表明，试验各因素对所选指标的影响依次为：C（提取次数）＞B（提取时间）＞A（加水量）＞D（浸泡时间）；确定参葛颗粒水提最佳工艺为：A2B2C2D2，加入饮片总量的12倍水，浸泡0.5 h，提取2次，每次1.0 h。

2.6 最佳水提工艺验证

称取配方量10倍的枸杞子、甘草饮片3份，等比例加入醇提药渣，依照上述优选的水提工艺进行验证，取样测定浸膏中甘草苷、甘草酸铵及浸出物得率。每份样品中甘草苷质量分别为30.38、31.24、30.44 mg，甘草酸铵质量分别为108.71、110.22、110.95 mg，浸出物得率分别为22.32%、22.98%、23.48%。结果表明，优选工艺稳定可行。

3 讨论

3.1 提取工艺选择

参葛颗粒由5味药物组成，以水溶性成分为主，如枸杞子的主要化学成分为枸杞多糖、甜菜碱、类胡萝卜素、维生素C等，甘草的主要有效成分为三萜皂苷类、黄酮类、香豆素类、生物碱、有机酸、多糖等，本试验选择回流提取法[5-7]。

3.2 评价指标选择

因醇提药渣中多糖含量较大，对计算枸杞多糖转移率的干扰较大，本试验选取的甘草苷、甘草酸铵是甘草的主要有效成分，与《中国药典》2020年版指标一致，从原料到制剂全面控制制剂质量，有助于提高临床用药的安全性及有效性[8-9]。