董 娜,万 启,李亚波,张爱菊,张小林
(甘肃医学院药学系,甘肃平凉 744000)
药品中有机溶剂残留是指药物制剂在生产过程中所使用过的,但又未能完全除去的挥发性有机化合物,行业协会将他们分为四类,丙酮归为第3 类属低毒溶剂,在2015年版《中国药典》中规定丙酮残留不得超过0.5%[1]。目前,丙酮测定多采用顶空气相色谱法[2 - 6]。苦参素具有环酮结构(图1),性质相对稳定,苦参素胶囊在生产过程中涉及到包括丙酮、乙醇在内的多种有机溶剂,为了有效控制产品质量和保证用药安全,邹义栩[7]等采用顶空气相色谱法同时对该药物中丙酮、乙醇2种残留溶剂进行检测,丙酮的最低检测浓度达到6.38×10-7mol/L,可用于实际样品分析。但到目前为止,荧光法测定丙酮报道较少。
图1 苦参素结构式Fig.1 Structure formula of matrine
930N荧光分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)。
苦参素胶囊(正大天晴药业集团股份有限公司,批号:20010763,规格:0.1克/粒)。取苦参素胶囊10粒,准确称量,用水定容至10 mL,该溶液作为供试液。
取2.0 mL碘液于25 mL容量瓶中,加1.0 mL 1 mol/L NaOH溶液,1.50 mL供试液,轻微振荡,静置反应3 min后,加入1.0 mL 1 mol/L HCl,2.0 mL 0.10 mmol/L RhB溶液,5.0 mL HAc-NaAc缓冲溶液,蒸馏水定容,静置5 min后,以365 nm为激发波长,测定发射波长580 nm处1.0×10-3mmol/L RhB荧光强度(F),同时测定丙酮空白荧光强度(F0),计算ΔF(ΔF=F-F0)。
图2 不同体系的荧光光谱Fig.2 Fluorescence spectra in different system
在pH=4.5环境下考察不同体积0.10 mmol/L RhB溶液的荧光特性(图3)。结果表明,在0~4.0 mL范围内RhB荧光强度与RhB加入体积有线性关系,当RhB浓度大于等于8.0×10-6mol/L时(即体积大于等于2.0 mL),自猝灭作用增强,线性关系变差。故0.10 mmol/L RhB取量为2.0 mL。
图3 罗丹明B浓度对荧光强度的影响Fig 3 Effect of the concentration of Rhodamine B on fluorescence intensity
图4 碘液浓度对荧光强度的影响Fig.4 Effect of the concentration of iodine on fluorescence intensity
图5 溶液pH对荧光强度的影响Fig.5 Effect of solution pH on fluorescence intensity
图6 动力学曲线(a.荧光恢复;b.荧光猝灭)Fig.6 Kinetic curve(a.fluorescence recovery;b.fluorescence quenching)
苦参素胶囊中丙酮和乙醇残留同时存在,二者均可发生碘仿反应,因此实验重点考察了丙酮和乙醇共存时乙醇的干扰情况。选择丙酮浓度为8 μmol/L,乙醇浓度为80 μmol/L(浓度设定比为1∶10),按照实验方法测定两种物质与碘混合后不同反应时间段荧光强度(图8)。结果表明,丙酮碘仿反应较快,3 min后荧光强度趋于恒定;乙醇在5 min后荧光强度开始增大,显然在样品加入3 min时加HCl终止碘仿反应,10倍乙醇不干扰丙酮测定。乙醇反应分两步完成,先氧化生成乙醛,其后是乙醛碘仿反应,反应速率有差异。实验同时考察了Al3+、Cl-、Na+、Mg2+、K+和Zn2+等离子干扰情况,测量误差控制在±5%以内,100倍的上述离子均不干扰测定。
图7 丙酮工作曲线Fig.7 Working curve of acetone
图8 乙醇干扰性考察Fig.8 Study on the interference of ethanol
取3批样品适量,按“1.2”方法完成供试品溶液制备及丙酮残留测定,并进行加标回收实验,结果见表1。结果显示,药样中均有丙酮检出,继而求得原药中的丙酮质量分数为0.0019%、0.0021%和0.0018%,但测定值均未超过0.5%的最高限量规定;加标回收率在96.5%~105.0%范围内,相对标准偏差(RSD)≤2.5%。说明方法准确度和精密度良好。
表1 药品中丙酮的测定结果