不同分期HIV感染者免疫球蛋白Ig、T淋巴细胞亚群的表达及与HIV RNA的相关性

2021-05-12 03:17杨秀丽杨凤美
关键词:期组载量亚群

杨秀丽,杨凤美

(商丘市第一人民医院,河南商丘476000)

艾滋病(AIDS)是一种严重威胁全球公众健康的传染性疾病,由感染人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)所导致的免疫缺陷综合征,主要攻击机体免疫系统,以CD4+T淋巴细胞减少为特征,使其免疫功能丧失,常因并发严重感染和恶性肿瘤而死亡[1]。人体感染HIV后体内辅助性T细胞破坏,细胞免疫功能下降;并继发体液免疫功能下降,随即出现免疫球蛋白含量异常变化,参与机体的体液免疫调节,在机体抵抗病原体感染过程中的起重要作用[2]。目前,对不同分期HIV感染者免疫球蛋白、T淋巴细胞亚群的变化及与HIV RNA的相关性研究尚少。因此,本文以不同分期HIV感染者作为研究对象,检测其体内免疫球蛋白、T淋巴细胞亚群的水平,并进一步探讨其与HIV RNA载量相关性和临床意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2013年2月—2018年6月在我院门诊或住院就诊的110例HIV感染患者,所有患者均经酶联免疫吸附试验(ELISA)法HIV抗体初筛,并经过本地区疾病预防控制中心采用Western Blot蛋白印迹试验确证HIV感染,均为未抗病毒初诊的患者。艾滋病诊断标准符合2015年中华医学会《艾滋病诊疗指南(第三版)》[3],根据世界卫生组织(WHO)将HIV感染者临床分期为Ⅳ期。本研究根据纳入对象分为五组,分Ⅰ期组(无症状期)、Ⅱ期组(轻度疾病期)、Ⅲ期组(中度疾病期)、Ⅳ期组(严重疾病期),并设无HIV感染者20例为健康对照组。Ⅰ期组40例,男26例,女14例,平均年龄(35.63±9.36)岁;Ⅱ期组 28例,男 18例,女 10例,平均年龄(39.64±8.29)岁;Ⅲ期组 24例,男 16例,女 8例,平均年龄(40.57±10.37)岁;Ⅳ期组 18例,男 11例,女 7例,平均年龄(45.56±11.43)岁;对照组 20例,男 12例,女 8例,平均年龄(38.31±9.82)岁。比较5组研究对象一般资料,差异无统计学意义(P>0.05),一般资料有可比性,且所有研究对象均经过我院伦理委员会要求,同时签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 血清免疫球蛋白测定 采用免疫比浊法测定血清免疫球蛋白IgM、IgA、IgG水平。免疫球蛋白抗体及标准品试剂盒购自上海泛柯生物公司,采用日立全自动7080生化分析仪器进行检测。

1.2.2 流式细胞术分析T淋巴细胞亚群 使用Beckman Navios型号流式细胞仪分析CD4+、CD8+T淋巴细胞计数,采用Beckman公司提供的八色荧光抗体试剂。

1.2.3 HIV RNA检测 采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定,使用Qiagen公司提供试剂和罗氏公司LightCycler检测仪器,步骤按照说明书进行操作(结果>500拷贝/mL提示阳性)。

1.3 统计学分析 采用SPSS21.0软件分析,收集数据资料符合正态分布,计量资料用均数±标准差(±s)表示,2组间比较采用t检验,相关性分析用Spearman秩和检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组免疫球蛋白水平测定 HIV感染者4组中,IgM、IgA水平测定与健康对照组比较(P>0.05);除外Ⅰ期组,Ⅱ期组、Ⅲ期组、Ⅳ期组患者IgG水平均高于健康对照组(t值分别为9.243、11.338、12.543,P<0.05),见表 1。

表1 各组IgM、IgA、IgG水平测定 (pg/mL,±s)

表1 各组IgM、IgA、IgG水平测定 (pg/mL,±s)

注:与健康对照组比较。

组别 n I g M I g A I g GⅠ期组 4 0 2.1 3±0.4 5 2.1 2±1.6 7 1 2.0 2±1.6 7Ⅱ期组 2 8 3.8 7±0.4 8 4.5 8±1.5 1 2 9.3 5±2.8 6Ⅲ期组 2 4 2.2 7±0.7 1 5.4 4±1.3 8 2 7.6 4±3.0 1Ⅳ期组 1 8 2.1 9±0.7 9 4.6 7±1.6 1 2 8.3 8±3.4 2健康对照组 2 0 1.4 2±0.6 4 2.5 7±0.6 7 1 1.9 2±2.1 3

2.2 4期患者T淋巴细胞计数及流式细胞分析图4组CD4+T细胞计数和CD4+T/CD8+T比值均显著低于健康对照组,随着分期级别越高,显著性更明显(P<0.05);4期患者CD8+T计数水平较健康对照组明显升高,二者比较差异有统计学意义(t值分别为 9.671、11.325、14.253、12.819,P<0.05),见表 2、图 1。

图1 不同分期HIV患者T细胞亚群流式细胞图情况。

表2 各组T淋巴细胞计数测定 (个/μL,±s)

表2 各组T淋巴细胞计数测定 (个/μL,±s)

注:与健康对照组比较。

组别 n CD4+T CD8+T CD4+T/CD8+TⅠ期组 40 456.67±34.04 416.36±71.23 1.09±0.45Ⅱ期组 28 395.33±38.23 551.37±94.78 0.72±0.32Ⅲ期组 24 289.50±36.46 753.48±89.94 0.38±0.42Ⅳ期组 18 198.61±78.75 864.85±102.69 0.39±0.21健康对照组 20 651.32±51.68 376.13±73.52 1.73±0.33

2.3 4组HIV病毒载量测定情况 除Ⅰ期感染组,其他3组病毒载量水平均较高,均需尽早抗病毒治疗,见表3。

表3 4组患者病毒载量水平 (log10拷贝/mL)

2.4 IgG、CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T 与 HIV RNA载量的相关性 设HIV RNA载量(copies/mL)作为Y 轴,IgG、CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T 水平作为 X轴,采用Spearman分析相关性;通过分析发现所有HIV感染者的HIV RNA载量与CD4+T、CD4+T/CD8+T水平呈负相关(相关指数R=-0.564、P<0.001,R=-0.209、P=0.028),HIV RNA 载量与 CD8+T、IgG 水平呈正相关(相关指数 R=0.479、P<0.001,R=0.375、P<0.001),见图 2。

图2 IgG、CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T 与HIV RNA载量的相关性分析

3 讨论

HIV病毒主要攻击T淋巴细胞免疫群,摧垮机体免疫功能,出现各种机会性感染或肿瘤[4-5]。T淋巴细胞有多种生物功能细胞亚群,包括有CD4+T、CD8+T等,其中CD4+T细胞是HIV病毒主要攻击目标,既可促进细胞免疫,又可分泌促炎性因子,CD4+T细胞可分为Th1、Th2、Th3等亚型[6]。Th1细胞主要分泌白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-β、干扰素(IFN)-γ及IFN-α等,在HIV感染期间参与介导细胞毒活性,调节局部炎性反应免疫应答,促进细胞免疫和辅助抗体生成,在机体抗胞内HIV病毒感染中起重要作用[7]。Th2细胞可分泌IL-4、IL-5等,刺激B淋巴细胞增殖,参与体液免疫应答,协同细胞免疫,发挥抗体的潜力,保护机体免受HIV病毒感染[8]。Th3细胞起着下调抗原递呈细胞、促进Th1细胞的活性,主要分泌IL-4、IL-10、转化生长因子(TGF)-β等促炎性因子,发挥免疫抑制作用[9]。CD4+T细胞能促进其他T细胞的分化成熟,也可参与体液协助B细胞产生Ig,是机体重要的免疫调节细胞[10]。本研究通过观察HIV感染者不同临床分期阶段CD4+T细胞变化情况,结果发现所有HIV感染者的HIV RNA载量与CD4+T、CD4+T/CD8+T水平呈负相关且随着临床分期级别越高CD4+T细胞下降越明显,该结果与肖健等[11]报道一致。因此笔者认为CD4+T细胞数作为评估HIV感染者免疫状况、病情严重程度最直接的指标。

机体感染HIV病毒后还可产生特异性CD8+T淋巴细胞,在CD4+T细胞的调控和HIV病毒的刺激活化,转化为细胞毒性T细胞,杀伤被感染的正常组织细胞,其生成量越高机体破坏力越大,与病毒复制程度有关[12-13]。本研究通过观察HIV感染者在不同临床分期阶段CD8+T细胞检测情况,结果显示各临床分期阶段HIV RNA载量与CD8+T水平呈正相关。因此通过早期监测CD8+T基线水平可能有助于了解抗病毒的疗效,可作为治疗期间评估指标。

免疫球蛋白分子有抗体活性,主要存在于血浆中,是体液免疫的重要效应分子[14]。其通过与相应抗原特异性结合转化为抗体,激活补体,在HIV感染者中大量分泌,促进巨噬细胞的吞噬作用,中和毒素和病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力,故在抗感染过程中起到主力军作用,随着免疫功能日益削减,免疫球蛋白含量亦可被消耗[15]。本研究对HIV不同阶段免疫球蛋白分析,Ⅰ期患者病毒尚不活跃,相对静止状态,IgG表达水平尚未被完全激发,随着分期级别升高,可因疾病严重程度而刺激性增加。通过相关性分析发现HIV感染者血清免疫球蛋白与病毒载量水平呈正相关,说明体液免疫在抗艾滋病毒感染过程中起着重要的作用。与健康对照组相比,HIV感染者体内免疫球蛋白含量明显升高,以IgG为主,这与Ipp等[16]报道相一致。Mutoh等[17]发现通过高效抗逆转录病毒疗法(HARRT,简称ART)治疗后HIV感染者的Ig显著下降,同时临床症状改善,各种机会性感染机率明显下降,说明体液免疫可反应疾病的转归。Subramaniam等[18]报道在ART之前HIV感染儿童的唾液IgA水平显着降低,经过抗病毒治疗后可明显改善,说明HIV感染者IgA水平仍存在异常表达,但本文所纳入对象均未经过治疗,发现HIV感染者组中,IgA水平测定与健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),仍需多中心,大样本临床实验进一步验证。目前尚无相关IgM在HIV感染者的报道,本研究中发现HIV感染者中IgM水平测定与健康对照组比较差异无统计学意义。

综上所述,4期感染者的免疫功能因疾病严重程度存在明显差异,根据临床分期,纵向比较不同时期患者Ig、T淋巴细胞亚群与HIV RNA载量之间变化水平,发现CD4+T、Ig和血浆HIV RNA载量检测在判断病情、抗病毒疗效评估及预后方面起着重要作用。所以,不能单纯以CD4+T和CD8+T评估患者免疫功能,还需结合免疫球蛋白和病毒学指标综合评估免疫重建效果[19]。

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