不同分期HIV感染者免疫球蛋白Ig、T淋巴细胞亚群的表达及与HIV RNA的相关性

杨秀丽，杨凤美

（商丘市第一人民医院，河南商丘476000）

艾滋病（AIDS）是一种严重威胁全球公众健康的传染性疾病，由感染人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus，HIV）所导致的免疫缺陷综合征，主要攻击机体免疫系统，以CD4+T淋巴细胞减少为特征，使其免疫功能丧失，常因并发严重感染和恶性肿瘤而死亡[1]。人体感染HIV后体内辅助性T细胞破坏，细胞免疫功能下降；并继发体液免疫功能下降，随即出现免疫球蛋白含量异常变化，参与机体的体液免疫调节，在机体抵抗病原体感染过程中的起重要作用[2]。目前，对不同分期HIV感染者免疫球蛋白、T淋巴细胞亚群的变化及与HIV RNA的相关性研究尚少。因此，本文以不同分期HIV感染者作为研究对象，检测其体内免疫球蛋白、T淋巴细胞亚群的水平，并进一步探讨其与HIV RNA载量相关性和临床意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2013年2月—2018年6月在我院门诊或住院就诊的110例HIV感染患者，所有患者均经酶联免疫吸附试验（ELISA）法HIV抗体初筛，并经过本地区疾病预防控制中心采用Western Blot蛋白印迹试验确证HIV感染，均为未抗病毒初诊的患者。艾滋病诊断标准符合2015年中华医学会《艾滋病诊疗指南（第三版）》[3]，根据世界卫生组织（WHO）将HIV感染者临床分期为Ⅳ期。本研究根据纳入对象分为五组，分Ⅰ期组（无症状期）、Ⅱ期组（轻度疾病期）、Ⅲ期组（中度疾病期）、Ⅳ期组（严重疾病期），并设无HIV感染者20例为健康对照组。Ⅰ期组40例，男26例，女14例，平均年龄（35.63±9.36）岁；Ⅱ期组 28例，男 18例，女 10例，平均年龄（39.64±8.29）岁；Ⅲ期组 24例，男 16例，女 8例，平均年龄（40.57±10.37）岁；Ⅳ期组 18例，男 11例，女 7例，平均年龄（45.56±11.43）岁；对照组 20例，男 12例，女 8例，平均年龄（38.31±9.82）岁。比较5组研究对象一般资料，差异无统计学意义（P＞0.05），一般资料有可比性，且所有研究对象均经过我院伦理委员会要求，同时签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 血清免疫球蛋白测定 采用免疫比浊法测定血清免疫球蛋白IgM、IgA、IgG水平。免疫球蛋白抗体及标准品试剂盒购自上海泛柯生物公司，采用日立全自动7080生化分析仪器进行检测。

1.2.2 流式细胞术分析T淋巴细胞亚群 使用Beckman Navios型号流式细胞仪分析CD4+、CD8+T淋巴细胞计数，采用Beckman公司提供的八色荧光抗体试剂。

1.2.3 HIV RNA检测 采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）技术测定，使用Qiagen公司提供试剂和罗氏公司LightCycler检测仪器，步骤按照说明书进行操作（结果＞500拷贝/mL提示阳性）。

1.3 统计学分析 采用SPSS21.0软件分析，收集数据资料符合正态分布，计量资料用均数±标准差（±s）表示，2组间比较采用t检验，相关性分析用Spearman秩和检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组免疫球蛋白水平测定 HIV感染者4组中，IgM、IgA水平测定与健康对照组比较（P＞0.05）；除外Ⅰ期组，Ⅱ期组、Ⅲ期组、Ⅳ期组患者IgG水平均高于健康对照组（t值分别为9.243、11.338、12.543，P<0.05），见表 1。

表1 各组IgM、IgA、IgG水平测定 （pg/mL，±s）

表1 各组IgM、IgA、IgG水平测定 （pg/mL，±s）

注：与健康对照组比较。

组别 n I g M I g A I g GⅠ期组 4 0 2.1 3±0.4 5 2.1 2±1.6 7 1 2.0 2±1.6 7Ⅱ期组 2 8 3.8 7±0.4 8 4.5 8±1.5 1 2 9.3 5±2.8 6Ⅲ期组 2 4 2.2 7±0.7 1 5.4 4±1.3 8 2 7.6 4±3.0 1Ⅳ期组 1 8 2.1 9±0.7 9 4.6 7±1.6 1 2 8.3 8±3.4 2健康对照组 2 0 1.4 2±0.6 4 2.5 7±0.6 7 1 1.9 2±2.1 3

2.2 4期患者T淋巴细胞计数及流式细胞分析图4组CD4+T细胞计数和CD4+T/CD8+T比值均显著低于健康对照组，随着分期级别越高，显著性更明显（P＜0.05）；4期患者CD8+T计数水平较健康对照组明显升高，二者比较差异有统计学意义（t值分别为 9.671、11.325、14.253、12.819，P＜0.05），见表 2、图 1。

图1 不同分期HIV患者T细胞亚群流式细胞图情况。

表2 各组T淋巴细胞计数测定 （个/μL，±s）

表2 各组T淋巴细胞计数测定 （个/μL，±s）

注：与健康对照组比较。

组别 n CD4+T CD8+T CD4+T/CD8+TⅠ期组 40 456.67±34.04 416.36±71.23 1.09±0.45Ⅱ期组 28 395.33±38.23 551.37±94.78 0.72±0.32Ⅲ期组 24 289.50±36.46 753.48±89.94 0.38±0.42Ⅳ期组 18 198.61±78.75 864.85±102.69 0.39±0.21健康对照组 20 651.32±51.68 376.13±73.52 1.73±0.33

2.3 4组HIV病毒载量测定情况 除Ⅰ期感染组，其他3组病毒载量水平均较高，均需尽早抗病毒治疗，见表3。

表3 4组患者病毒载量水平 （log10拷贝/mL）

2.4 IgG、CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T 与 HIV RNA载量的相关性 设HIV RNA载量（copies/mL）作为Y 轴，IgG、CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T 水平作为 X轴，采用Spearman分析相关性；通过分析发现所有HIV感染者的HIV RNA载量与CD4+T、CD4+T/CD8+T水平呈负相关（相关指数R=-0.564、P<0.001，R=-0.209、P=0.028），HIV RNA 载量与 CD8+T、IgG 水平呈正相关（相关指数 R=0.479、P<0.001，R=0.375、P<0.001），见图 2。

图2 IgG、CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T 与HIV RNA载量的相关性分析

3 讨论

HIV病毒主要攻击T淋巴细胞免疫群，摧垮机体免疫功能，出现各种机会性感染或肿瘤[4-5]。T淋巴细胞有多种生物功能细胞亚群，包括有CD4+T、CD8+T等，其中CD4+T细胞是HIV病毒主要攻击目标，既可促进细胞免疫，又可分泌促炎性因子，CD4+T细胞可分为Th1、Th2、Th3等亚型[6]。Th1细胞主要分泌白细胞介素（IL）-2、肿瘤坏死因子（TNF）-β、干扰素（IFN）-γ及IFN-α等，在HIV感染期间参与介导细胞毒活性，调节局部炎性反应免疫应答，促进细胞免疫和辅助抗体生成，在机体抗胞内HIV病毒感染中起重要作用[7]。Th2细胞可分泌IL-4、IL-5等，刺激B淋巴细胞增殖，参与体液免疫应答，协同细胞免疫，发挥抗体的潜力，保护机体免受HIV病毒感染[8]。Th3细胞起着下调抗原递呈细胞、促进Th1细胞的活性，主要分泌IL-4、IL-10、转化生长因子（TGF）-β等促炎性因子，发挥免疫抑制作用[9]。CD4+T细胞能促进其他T细胞的分化成熟，也可参与体液协助B细胞产生Ig，是机体重要的免疫调节细胞[10]。本研究通过观察HIV感染者不同临床分期阶段CD4+T细胞变化情况，结果发现所有HIV感染者的HIV RNA载量与CD4+T、CD4+T/CD8+T水平呈负相关且随着临床分期级别越高CD4+T细胞下降越明显，该结果与肖健等[11]报道一致。因此笔者认为CD4+T细胞数作为评估HIV感染者免疫状况、病情严重程度最直接的指标。

机体感染HIV病毒后还可产生特异性CD8+T淋巴细胞，在CD4+T细胞的调控和HIV病毒的刺激活化，转化为细胞毒性T细胞，杀伤被感染的正常组织细胞，其生成量越高机体破坏力越大，与病毒复制程度有关[12-13]。本研究通过观察HIV感染者在不同临床分期阶段CD8+T细胞检测情况，结果显示各临床分期阶段HIV RNA载量与CD8+T水平呈正相关。因此通过早期监测CD8+T基线水平可能有助于了解抗病毒的疗效，可作为治疗期间评估指标。

免疫球蛋白分子有抗体活性，主要存在于血浆中，是体液免疫的重要效应分子[14]。其通过与相应抗原特异性结合转化为抗体，激活补体，在HIV感染者中大量分泌，促进巨噬细胞的吞噬作用，中和毒素和病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力，故在抗感染过程中起到主力军作用，随着免疫功能日益削减，免疫球蛋白含量亦可被消耗[15]。本研究对HIV不同阶段免疫球蛋白分析，Ⅰ期患者病毒尚不活跃，相对静止状态，IgG表达水平尚未被完全激发，随着分期级别升高，可因疾病严重程度而刺激性增加。通过相关性分析发现HIV感染者血清免疫球蛋白与病毒载量水平呈正相关，说明体液免疫在抗艾滋病毒感染过程中起着重要的作用。与健康对照组相比，HIV感染者体内免疫球蛋白含量明显升高，以IgG为主，这与Ipp等[16]报道相一致。Mutoh等[17]发现通过高效抗逆转录病毒疗法（HARRT，简称ART）治疗后HIV感染者的Ig显著下降，同时临床症状改善，各种机会性感染机率明显下降，说明体液免疫可反应疾病的转归。Subramaniam等[18]报道在ART之前HIV感染儿童的唾液IgA水平显着降低，经过抗病毒治疗后可明显改善，说明HIV感染者IgA水平仍存在异常表达，但本文所纳入对象均未经过治疗，发现HIV感染者组中，IgA水平测定与健康对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05），仍需多中心，大样本临床实验进一步验证。目前尚无相关IgM在HIV感染者的报道，本研究中发现HIV感染者中IgM水平测定与健康对照组比较差异无统计学意义。

综上所述，4期感染者的免疫功能因疾病严重程度存在明显差异，根据临床分期，纵向比较不同时期患者Ig、T淋巴细胞亚群与HIV RNA载量之间变化水平，发现CD4+T、Ig和血浆HIV RNA载量检测在判断病情、抗病毒疗效评估及预后方面起着重要作用。所以，不能单纯以CD4+T和CD8+T评估患者免疫功能，还需结合免疫球蛋白和病毒学指标综合评估免疫重建效果[19]。