BD-96C、TB-DNA和痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌的价值对比

陈红，吕丹，李慧，刘庆丰(焦作市第三人民医院，河南 焦作454001)

结核病是指感染结核分枝杆菌引起的慢性传染病，结核分枝杆菌主要侵染肺部，引起肺结核［1］。相关数据显示，全球约有20亿结核分枝杆菌感染者，我国是结核病的高发国家之一，发病率居全球第二［2］。结核病可通过谈话、咳嗽、喷嚏等多种方式进行传播，具有较强的传染性，会给社会带来严重负担。因此，对结核病尽早诊断，对于有效预防疾病传播具有重要意义。结核病的早期诊断主要依赖于有效的检测手段，为提高临床上对于结核病的诊断准确率，本研究旨在探讨BD-96C、TB-DNA和痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌的价值。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年12月～2020年1月于我院就诊的疑似肺结核患者302例作为研究对象，其中男198例、女104例；年龄18～72(53.42±10.71)岁。本研究经我院伦理委员会批准。纳入标准：（1）经临床症状、影像学检查等初步诊断为疑似肺结核者；（2）均有咳痰、咳嗽、咯血、低热、盗汗等症状；（3）可采集到符合标准的痰液标本；（4）患者自愿参与本研究。排除标准：（1）临床资料不全者；（2）近期采用方案治疗者；（3）痰液标本量低于2ml者。

1.2 方法 采集所有患者清晨第一口来自支气管深部的黏液或脓痰2～5ml于无菌痰杯中并送检。分别采用BD-96C、TB-DNA和痰涂片抗酸染色法检测痰样。（1）BD-96C法先用1～2倍体积的4%氢氧化钠溶液消化标本15～20min，再加入无菌磷酸盐缓冲液并离心，取下层液体并加入1ml磷酸盐缓冲液摇匀后取0.5ml液体接种于液体快速培养基中，放入快速培系统中培养（珠海贝素生物科技有限公司），每天观察培养情况，连续观察2个月。（2）TB-DNA法：取适量痰样并向其中加入等量4%氢氧化钠溶液，摇匀后静置20min后离心，去除上清液并加入50μl DNA提取液，摇匀后加热并离心。按照DNA-PCR检验试剂盒（苏州天隆科技有限公司）说明书进行操作，并采用荧光定量PCR检测仪（西安天隆科技有限公司）判定结果。（3）痰涂片抗酸染色法：按照《痰涂片镜检查标准化操作及质量保证手册》中的标准进行标本处理［3］，包括涂片、染色等，并在光学显微镜下进行观察。（4）进一步鉴定菌种：对于在培养基中培养后呈阳性的标本应送入实验室进行结核菌培养和菌种鉴定。

1.4 统计学方法 数据采用SPSS 25.0软件处理，计数资料以n（%）表示，行χ2检验，计量资料以±s表示，行t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同检测方式痰液标本检测结果比较BD-96C、TB-DNA和痰涂片抗酸染色法检测阳性率分别为41.06%、30.79%、28.15%，BD-96C与TB-DNA和痰涂片抗酸染色法检测阳性率比较，差异显著（P<0.05）。见表1。

表1 不同检测方式痰液标本检测结果比较（n）

2.2 BD-96C痰培养标本经TB-DNA检测结果BD-96C培养阳性标本，经TB-DNA检测后阳性率为87.10%；BD-96C培养阴性标本，经TB-DNA检测后阳性率为5.06%。见表2。

表2 BD-96C痰培养标本经TB-DNA检测结果

2.3 痰涂片抗酸染色检测结果 在108例BD-96C（+）TB-DNA（+）中经痰涂片抗酸染色检测阳性率为92.59%，16例BD-96C（+）TB-DNA（-）中经痰涂片抗酸染色检测阳性率为68.75%，9例BD-96C（-）TBDNA（+）中经痰涂片抗酸染色检测阳性率为11.11%，169例BD-96C（-）TB-DNA（-）中经痰涂片抗酸染色检测阳性率为0.00%。见表3。

3 讨论

临床实践表明，对于结核分枝杆菌的早期、准确检测是预防和控制结核病的重要手段［4，5］。目前，对于结核分枝杆菌的检测手段多样，且检测结果会受患者痰量、检测时间、送检时间等多种因素影响，可能出现检测结果与预期不一致的情况［6，7］。为有效提高早期诊断准确性，本研究采用3种不同方式检测患者痰样，并比较检测结果。

表3 痰涂片抗酸染色检测结果

本研究结果显示，BD-96C、TB-DNA和痰涂片抗酸染色法检测阳性率分别为41.06%、30.79%、28.15%，BD-96C与TB-DNA和痰涂片抗酸染色法检测阳性率比较差异具有统计学意义，表明BD-96C检测法具有较高的检出率和应用价值。此外，本研究中TB-DNA检测阳性率略低于BD-96C，这与临床上某些研究结果不一致［8］。笔者分析原因可能为：（1）检测结果可能受痰样质量和实验室环境影响。（2）BD-96C进行液体培养时敏感度较固体培养时升高［9］。（3）BD-96C痰培养检测结果呈阳性时可能部分菌种为非结核分支杆菌。（4）TB-DNA检测结果可能受不同检测试剂质量影响。BD-96C检测结果中阳性率为41.06%，TB-DNA阳性率为30.79%，表明BD-96C均有较高的特异性，但对于BD-96C痰培养阳性和TBDNA检测阴性者只能表明痰中无结核分枝杆菌，无法排除患者不是肺结核，需进一步对培养样本进行菌种鉴定分析。进一步研究结果显示，BD-96C培养阳性标本中，经TB-DNA检测后阳性率为87.10%，对于BD-96C和TB-DNA检测均呈阳性者，基本可确诊为肺结核，剩下的TB-DNA检验阴性者还需进一步鉴定。BD-96C培养阴性标本中，经TB-DNA检测后仍呈阴性者应采用其他方式，如r-干扰素释放试验等检测，避免误诊［10］。在108例BD-96C（+）TB-DNA（+）中经痰涂片抗酸染色检测阳性率为92.59%，16例BD-96C（+）TB-DNA（-）中经痰涂片抗酸染色检测阳性率为68.75%，可能是因为痰涂片在菌液含量较少的情况下难以观察到结核分枝杆菌，而BD-96C和TB-DNA敏感性较高，检出率也更高。16例BD-96C（+）TB-DNA（-）中经痰涂片抗酸染色检测阳性率为68.75%，可能是其他菌种呈阳性，还需进一步鉴定菌种。9例BD-96C（-）TB-DNA（+）中经痰涂片抗酸染色检测阳性率为11.11%，可能是由于痰涂片污染或在TB-DNA检测时荧光定量PCR法敏感度过高难以区分结核分枝杆菌和其他分枝杆菌，也有可能为死菌。169例BD-96C（-）TB-DNA（-）中经痰涂片抗酸染色检测阳性率为0.00%，可能是痰中菌种含量过低或非结核分枝杆菌仍需进一步鉴定菌种。

综上所述，BD-96C检测准确率较高，是确诊肺结核的金标准，但临床上为进一步提高准确率，可结合其他检测方式。特别是痰液培养阴性者，除实验室诊断外，还应结合患者临床症状、接触史、影像检查结果等进行综合诊断。