人精子活力试验用于辅助生殖实验室的质量控制要点分析

黄启江

【关键词】人精子活力试验;辅助生殖实验室;质量控制

[中图分类号]R321 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2021）26-0192-02

不孕症是近年来备受关注的课题，我国生殖医学工作者将提升不孕症患者的受孕率作为重点研究项目，且在临床实践中取得一定成效[1]。辅助生殖技术是现阶段提高受孕率的主要技术，其包括体外授精-胚胎移植和胚胎植入前基因诊断等衍生技术，但胚胎质量的影响因素较多，可直接影响手术成功率。有学者提出，胚胎质量与辅助生殖实验室内部环境有关，如培养器皿和移液枪等设备的清洁度均会影响到胚胎质量[2]。HSMA是目前最为常用的辅助生殖实验室质量控制检测技术，其能够检出影响胚胎质量的不良因素，发现对胚胎质量起保护作用的积极因素，敏感性较高。基于此，本研究选取健康生育男性45例作为实验对象，用于分析HSMA检测对于辅助生殖实验室内质量控制的作用。

1资料与方法

1.1一般资料 研究落实于2019年12月至2020年12月间，实验对象为健康生育男性45例。年龄23～39岁，均值（29.65±1.26）岁;所有男性受检者均在取精前禁欲3～5d，精液的纳入标准：精子密度不低于70*106mL;精液量不低于2mL;精子活动率不低于50%。

1.2方法 所有实验对象的取精方法一致，即洗净双手与外生殖器后，手淫取精。实验试剂为HTF培养液、精子分离液、牛血清白蛋白（0.3%）、矿物油、磷酸盐缓冲液、甲醛（0.25%、0.75%）。实验仪器为光学显微镜、离心机、精液分析仪、培养管、移液枪、恒温箱、去离子超纯水制备机。标本处理方法为：精液液化以后将其移至含有精子分离液（2mL）的试管内，进行离心处理，转速为1800r/min，时间为20min，将被分离出的精子沉淀物吸出后混入磷酸盐缓冲液（4mL）中，混合均匀后计算活力精子数。而后再次离心处理，转速为1500r/min，时间为5min，将上清液去除后混入HTF培养液（适量）中，使精子密度为1*106mL，以备用。在HTF培养液中添加100μL的甲醛溶液，浓度分别为0.25%和0.75%。而后添加100μL的矿物油或100μL的牛血清白蛋白（0.3%）或100μL的矿物油+牛血清白蛋白（0.3%）。精子于21℃～22℃条件下培养24h与48h，经10μL至100μL的移液枪将培养管内液体混匀，吸出剂量5μL，使用光学显微镜（*20）在Makler计数板上计算100个精子的有活力数量，对比初始精液，算出平均精子活力指数，若其数值低于0.75则视作不合格。

1.3观察指标 观察不同浓度甲醛HTF培养液的精子活力指数，观察添加与未添加附加物的培养液精子活力指数。

1.4统计学分析 数据处理经由SPSS21.0软件完成，计量数据经t值对比与检验，假设校验有意义则P值不足0.05。

2结果

2.1不同培养时间、不同浓度下HTF培养液精子活力指数比较 培养24h、48h后，甲醛浓度为0.25%的培养液内精子活力指数高于浓度为0.75%的培养液精子活力指数，且培养48h后，同一甲醛浓度下的精子活力指数低于培养24h的精子活力指数，对比有统计学意义（P<0.05），详见表1。

2.2添加与未添加附加物的HTF培养液精子活力指数比较 添加牛血清白蛋白与矿物油的甲醛HTF培养液精子活力指数高于未添加数值，对比统计学意义（P<0.05），详见表2。

3讨论

辅助生殖实验室是人工助孕的核心场所，其包括体外受精和人工受精两个技术层面，常用的卵子冷冻和囊胚培养等辅助生殖技术均产自辅助生殖实验室[3]。但有研究发现，辅助生殖实验室的环境质量控制管理会直接影响到胚胎质量，需要借助HSMA检测技术有效控制实验室质量。其具有经济效益好、取材方便等优势，能够科学评估精子活力，根据其活力变化检出细胞毒性，确定实验室内不良因素[4]。

甲醛是常见的人类致畸与致癌物质，高浓度甲醛或长时间接触低浓度甲醛均会对人体健康造成损害，甚至会引发死亡。生物学与医学领域广泛使用浓度为5-10%的甲醛溶液，嚴格防护可以避免甲醛危害。但有动物实验发现甲醛经稀释后会产生生殖毒性，且细胞毒性与甲醛浓度正相关[5]。本次研究中在胚胎培养液中加入浓度为0.25%与0.75%的甲醛溶液，以评估特定时间内微量毒素对于精子活力的影响。结果中培养24h与48h后，0.25%甲醛的HTF培养液精子活力指数高于0.75%甲醛，培养48h后，同一甲醛浓度的精子活力指数低于培养24h后的精子活力指数，对比有统计学意义（P<0.05）。说明甲醛具有生殖毒性，即使是低浓度甲醛也会影响精子活力，需要严格筛查实验室内是否存在微量毒性元素。同时证实HSMA检测对于培养环境中的微量毒素具有较高敏感性，可高效用于辅助生殖实验室的质量控制工作中。

蛋白质可确保生物体的正常新陈代谢，可在提供营养的同时发挥解毒功能，对于机体健康具有保护作用[6]。辅助生殖实验室的实验目的是提高受孕率，在实验过程中胚胎学家们会结合实验目的将多种蛋白或血清添加至培养液中，以保证胚胎或细胞的健康生长，以防胚胎或生殖细胞遭受外界有害因素的侵害。牛血清是最为天然的细胞培养液，含有丰富的球蛋白与白蛋白等细胞生长营养物质[7]。而矿物油分馏自原油，其性状无味无色，属于液态饱和性碳氢化合物，广泛用于组织细胞的培养工作中。矿物油的惰性高，黏稠度偏低，封闭性好，对水分蒸发具有阻隔作用，可有效覆盖培养液，确保其处于恒温环境，是维持培养环境稳定的有效措施[8]。结果中添加牛血清白蛋白与矿物油附加物的甲醛HTF培养液精子活力指数高于未添加精子活力指数，对比统计学意义（P<0.05）。说明以上物质在有毒培养液中同样能够发挥生殖细胞保护功能，可以促进胚胎发育，有效提升胚胎存活率。

综上所述，HSMA检测可以客观评估精子活力，作为辅助生殖实验室的合理化质量控制手段，具有敏感性高、检测方便、结果可靠等优势，对于实验室内的培养环境和物品监测具有较高的检验价值。此外，HSMA检测能够筛查对于精子活力起保护作用的附加物质，对于胚胎质量控制有积极作用。