罗勒的提取和抗菌活性研究*

孙丁立，邵 敬，王 森，顾晶晶

(亳州学院中药学院,安徽 亳州 236800)

罗勒(Ocimumbasilicum)，唇形科罗勒属药食兼用芳香植物，其味似茴香，全株小巧，叶色翠绿，芳香四溢，别名九层塔、香花子、兰香等。总状花序顶生于茎、枝上，各部均被微绒毛，其茎、叶及花穗均含有芳香油，主要用作调配化妆品、香料等原料及食用香精，嫩叶可食，具有驱风、健胃及发汗作用。全草入药，治疗胃肠胀气、肠炎腹泻、外感风寒、瘀肿、风湿性关节炎、蛇咬伤，煎水洗湿疹及皮炎。罗勒味辛甘，性温，有解毒，活血，疏风解表的功效，可应用于日用品、医药保健等多个方面[1]。

目前大部分学者主要研究的是罗勒挥发油及粗提取物的提取方法和抗氧化、抗菌性能[2-3]，而对罗勒化学成分抗菌的研究不深入[4-5]。方茹等[6]对罗勒的挥发油及粗多糖进行了抑菌作用的初步探究，发现挥发油和粗多糖对革兰氏阳性菌和阴性菌的生长均表现出很好的抑制作用，并且受不同浓度影响会产生明显的差异。据报道显示罗勒的水提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及克雷伯杆菌产生很好的抑菌效果，而罗勒醇提物对霍乱弧菌具有较好的抑菌作用。

近年来，随着对罗勒的研究不断深入，对其化学成分和抗氧化、抗菌作用的研究逐渐加深，其临床的研究价值也引起了科研工作者们的关注。因此本项目对亳州产的罗勒进行各个部位的提取，进行抗菌测试，筛选出抗菌性比较强的提取部位，以期为进一步探索罗勒单体化学成分的抗菌性能提供依据。

1 实 验

1.1 材 料

罗勒：安徽省亳州市疏毛罗勒(Ocimumbasilicum)。

试剂：乙醇(90%)、蒸馏水、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二甲基亚砜，国药集团化学试剂有限公司；胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)和胰酪大豆胨液体培养基(TSB)，北京三药科技开发公司；医用生理盐水。

标准菌株：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏菌(Salmonella)、大肠杆菌(Escherichia coli)。

1.2 仪 器

XSE104电子天平，梅特勒-托利多；4IK3ORA-C型旋转蒸发器，巩义予华仪器有限公司；Rephile超纯水器，上海乐枫生物科技有限公司；SW-CJ-1F/1FD单人单面垂直送风净化工作台，苏州净化设备有限公司；PWT-P75B恒温培养箱，合肥达斯卡特科学器材有限公司；ZEALWAYGR85DA灭菌容器，北京盛科信德科技有限公司；DW-86L338J超低温保存箱，青岛海尔生物医疗股份有限公司。

2 方 法

2.1 供试品的提取及配制

取适量罗勒全草，粉碎，在60 ℃水浴中，通过90%的乙醇-水对罗勒进行浸泡，每24 h提取1次，共3次，合并提取液，减压浓缩得到总提物。然后采用石油醚，乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，共获得5个提取部位，分别是总提物部位、石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位和水溶性部位，对其进行三种标准菌株测试，探究其抗菌活性，如图1所示。

图1 实验技术路线

分别称取上述5个提取部位的待测样品256 mg，放置在20 mL的无菌离心管内，加入尽量少的二甲基亚砜溶解并加入无菌水至10 mL，得25.6 mg/mL储备液。分别取4 mL、2 mL、1 mL上述储备液于20 mL无菌离心管内，对应加入4 mL、6 mL、7 mL无菌水，可得8 mL 12.8 mg/mL、8 mL 6.4 mg/mL、8 mL 3.2 mg/mL，分别取4 mL、2 mL、1 mL上述已配置的3.2 mg/mL溶液于20 mL无菌离心管内，对应加入4 mL、6 mL、7 mL无菌水，分别得8 mL 1.6 mg/mL、8 mL 0.8 mg/mL、8 mL 0.4 mg/mL，分别取4 mL、2 mL、1 mL上述0.4 mg/mL溶液于20 mL无菌离心管内，对应加入4 mL、6 mL、7 mL无菌水，可得8 mL 0.2 mg/mL、8 mL 0.1 mg/mL、8 mL 0.05 mg/mL或按照比例稀释分别取3.2 mg/mL溶液0.5 mL，分别加入0.5 mL、1.5 mL、3.5 mL无菌水，分别得1 mL 1.6 mg/mL、2 mL 0.8 mg/mL、4 mL 0.4 mg/mL，以此类推。

2.2 测试方法

本实验结合了滤纸片扩散法和琼脂培养基涂布法[6-9]的优点，采取的测试方法是：取100 μL待测样品加入离心管中，然后加入100 μL菌液，混合均匀，涂布在已经固化的琼脂培养基上。静置5 min左右，倒置放置，在培养箱中37 ℃下培养16 h左右，观察菌落生长情况。

3 结果与讨论

3.1 罗勒5个提取部位对3种菌的抑制作用

将罗勒5个提取部位的提取物分别按照上述配制方法配置备用，A1、A2分别为总提物12.8 mg/mL、6.4 mg/mL；B1、B2为石油醚提取部位12.8 mg/mL、6.4 mg/mL；C1、C2为乙酸乙酯提取部位12.8 mg/mL、6.4 mg/mL；D1、D2为正丁醇提取部位12.8 mg/mL、6.4 mg/mL；E1、E2水溶性部位12.8 mg/mL、6.4 mg/mL。

按照2.1配置待测样品和2.2测试方法进行沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑菌测试，平行2次。结果发现，5个提取部位的12.8 mg/mL和6.4 mg/mL提取物对沙门氏菌抑菌效果最为显著，且乙酸乙酯部位抑菌效果最好，石油醚部位次之，提取物的浓度变化对抑菌效果的影响比较明显，如图2所示。

图2 罗勒各提取部位对沙门氏菌的抑制作用

3.2 不同提取部位的不同浓度对沙门氏菌的抑制影响

5个不同部位的提取物逐一按照12.8 mg/mL、6.4 mg/mL、3.2 mg/mL、1.6 mg/mL、0.8mg/mL、0.4 mg/mL、0.2 mg/mL、0.1 mg/mL、0.05 mg/mL配制溶液，进行沙门氏菌的抗菌活性测试，分别将不同浓度标记在照片上。

3.2.1 不同浓度乙酸乙酯提取部位对沙门氏菌抑菌测试

乙酸乙酯部位结果显示：与空白对比，乙酸乙酯部位的提取物，对沙门氏菌抑菌效果明显，12.8 mg/mL时抑菌最好，但是浓度的变化对抑菌效果影响不明显，如图3所示。

图3 不同浓度乙酸乙酯提取部位对沙门氏菌的抑制作用

3.2.2 不同浓度总提取物、石油醚、正丁醇以及水部位对沙门氏菌的抑制影响

图4 石油醚提取部位对沙门氏菌抑菌测试图

图5 总提物部位对沙门氏菌抑菌测试图

图6 正丁醇提取部位对沙门氏菌的抑制作用

图7 水部位对沙门氏菌的抑制作用

与空白对比，石油醚提取部位、总提物部位在12.8 mg/mL时抑菌效果最好，随着浓度降低，抑菌效果逐渐减弱，如图4、图5所示。但正丁醇提取部位、水部位在上述相同情况下抗菌效果比较差，浓度对其抑菌效果较小，如图6、图7所示。

4 结 论

罗勒(Ocimumbasilicum)是唇形科罗勒属药食兼用芳香植物，其味辛甘，性温，有解毒，活血，疏风解表的功效，为了开发与利用这一自然资源，我们对罗勒的抗菌效果进行了实验测试，结果显示罗勒的5个提取部位对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌均有抑制作用，且抑制效果在天然药物中较为理想，其中乙酸乙酯提取部位的抗菌效果较优异，石油醚提取部位次之。此外，本课题组在进行抗菌实验的同时也在进行亳州疏毛罗勒化学成分抗氧化及抗炎能力的研究，希望能为亳州地区罗勒的进一步开发和利用提供参考依据。