血红蛋白电泳在地中海贫血筛查中的运用研究

林丽华 卢爱薇 吴秀珍 马菲菲 黄绍娥

地中海贫血是临床贫血疾病中较为常见的一种，是常见的常染色体隐性遗传病之一[1]。该病发病机制较为复杂，可能与肽链合成障碍、珠蛋白基因缺失等因素相关，但具体发病机理不明。地中海贫血患者血红蛋白存在一定的异常，因结构改变而导致溶血[2]。患者在宏观症状上主要表现为肝脾肿大、溶血性贫血、高胆红素血症等[3]。地中海贫血目前临床上尚缺乏有效的治疗方法，早期诊断并予以干预具有关键性意义。通过产前筛查疾病患者是临床最重要的措施之一。基因检测虽然具有较好的效果但检测费用昂贵，检测流程繁琐，难以在临床上普及。血红蛋白电泳仪可以测定血液中血红蛋白A（hemoglobin A，HbA）、血红蛋白A2（hemoglobin A2，HbA2）、血红蛋白F（hemoglobin F，HbF）等含量，从而辨别患者的异常并进行分型诊断。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入我院2019 年1—12 月收治的200 例接受地中海贫血筛查的患者。患者男性76 例，女性124 例，年龄22 ～74 岁，平均年龄（50.4±4.6）岁，BMI 8.2 ～22.4 kg/m2，平均病程（20.3±1.4）kg/m2。本研究经我院伦理委员会审批通过。本研究经患者同意。

1.2 纳入与排除

纳入：（1）患者临床上存在红细胞平均体积减少或平均血红蛋白量降低，病历完整。（2）地中海贫血携带家庭。（3）产前孕妇及丈夫接受地中海贫血筛查。排除标准：（1）合并恶性肿瘤疾病的患者。（2）合并严重的凝血功能障碍性疾病患者。（3）合并严重精神障碍性疾病的患者。（4）合并传染性肝炎或肝硬化的患者。（5）合并缺铁性贫血的患者。

1.3 方法

对所有纳入对象抽取空腹静脉血于抗凝管，加入枸橼酸钠抗凝剂抗凝并采用美国伯乐D-10 血红蛋白测试系统进行检测，检测过程中采用配套试剂盒测定HbA、HbA2 以及HbF 的含量，检测的过程严格按照说明书的相关规定进行，对于没有及时进行检测的标本需要妥善放置于4℃环境下保存并在次日完成检测。

1.4 观察指标

观察不同性别地中海贫血患者筛查结果；对比不同地中海贫血表型中Hb 含量情况。

1.5 统计分析

采用SPSS 19.0 统计软件，计量资料采用（±s）表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，采用（%）表示，P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同性别地中海贫血患者筛查结果

200 例筛查患者中共检测出56 例患者地中海贫血患者其中α地中海贫血20 例（10.00%），β 地中海贫血26 例（13.00%），混合地中海贫血3 例（1.50%），其他血红蛋白病7 例（3.50%）。见表1。

2.2 不同地中海贫血表型中Hb 含量比较

α 地中海贫血患者HbA 高于混合地中海贫血和其他血红蛋白病（P＜0.05）；β 地中海贫血患者HbA2 高于α 地中海贫血、混合地中海贫血和其他血红蛋白病（P＜0.05）；混合地中海贫血患者HbF 高于α 地中海贫血、β 地中海贫血和其他血红蛋白病（P＜0.05），见表2。

3 讨论

贫血是临床常见的疾病，根据贫血的病理机制不同可以分为红细胞生成减少性贫血、红细胞破坏过多性贫血、红细胞丢失过多性贫血等。根据红细胞的形态分类，贫血又可以分为大细胞性贫血、正常细胞性贫血、单纯小细胞性贫血以及小细胞低色素性贫血等。不同的贫血临床特点存在差异，临床治疗的重点也不同，治疗后疾病的预后、转归也不一样。地中海贫血是临床常见的遗传性贫血疾病，主要由珠蛋白链合成失衡导致患者出现体内溶血，患者体内正常血红蛋白生成减少，因而该贫血属于小细胞低色素性贫血。地中海贫血患病人数较多，人群危害性较大，严重危害患者的健康状况和生活质量。从区域发病特点上看，地中海贫血好发于长江以南地区，尤其是广东、广西地区的人群高发，其中广西地区基因携带率高达20.00%。地中海贫血的发病特点为不完全隐性遗传，具体地讲，两个表现为轻度症状的隐性携带者可以通过遗传将地中海贫血的致病基因共同传递于后代个体，导致后代出现重型的地中海贫血，严重者可以出现早期死亡风险。轻型的地中海贫血患者症状表现不明显，生活各方面受到的影响较小；随着年龄的增长症状表现可以逐渐加重，可以出现缺氧、呼吸困难、面色苍白、气促等症状，此时患儿生活所受到的影响较大。重型的地中海贫血患儿往往表现为黄疸、肝脾肿大、智力障碍、性成熟障碍等。脾大是重型地中海贫血患儿的重要表现，而肝脏肿大早期主要由于髓外造血导致，晚期主要由于含铁血黄素沉积导致肝硬化和肝细胞结节性增生形成。部分患儿因骨骼发育异常面部表现为眼距增宽、鼻梁低平、额头突出、头部大等，严重的骨骼发育缺陷可以出现病理性骨折。同时在出生后2 d 内死亡，给患儿家庭带来严重的精神和经济负担，尤其对产妇的伤害十分明显。过剩的珠蛋白链可以在红细胞内聚集形成不稳定的产物从而导致红细胞寿命缩短。临床上根据地中海贫血的珠蛋白链合成失衡情况大致将该疾病分为α 地中海贫血、β 地中海贫血等主要类别，其中α 地中海贫血代表α 基因缺陷，患者体内α 珠蛋白链合成减少，体内多余的β 珠蛋白链相互聚合形成地中海贫血（HbH）并导致血红蛋白的结构出现异常。相类似的，β 地中海贫血代表β 基因缺陷，患者体内β 珠蛋白合成减少，体内多余的α 珠蛋白链相互聚合并导致血红蛋白的结构出现异常。当体内α 珠蛋白链完全缺失的情况下，体内多余γ 链将进一步聚合，使得HbA2、HbA 以及HbF 等含量减少。异常结构的珠蛋白在通过机体重要组织间隙的过程中容易受到破坏，导致患者出现溶血性贫血。目前地中海贫血缺乏有效的治疗方法，早期通过针对并及时治疗干预减少重型地中海贫血患者的出现是临床工作的重点。因而有效、迅速的检测方法对于疾病的诊断十分关键。不可否认，基因诊断技术通过检测地中海贫血相关的致病基因可以对高危患者进行诊断，但检测的费用非常昂贵，检测流程较为繁琐且耗费时间较长，对仪器设备的要求较高，因而这种方法无法在基层医院开展应用。而血红蛋白电泳分析通过利用实验室常用的诊断设备分离、鉴别患者体内异常血红蛋白的情况，从而为疾病诊断提供重要的参考信息。既往传统采用醋酸纤维薄膜电泳法进行血红蛋白电泳，检测过程需要对红细胞进行多次的洗涤处理，制作血红蛋白液并予以点样、电泳，而后剪取电泳区带，并且浸泡出红细胞液，通过比色步骤后对各类Hb 含量进行计算。这种检测方法虽然具有一定的效果，但总体上监测结果容易受到技术条件、操作者经验、试验条件等多种因素的制约，导致检测结果受影响。相比之下，全自动血红蛋白电泳系统通过采用自动化的检测程序对血红蛋白的含量进行检测，检测过程中点样、染色、电泳等步骤完全自动化，不易受到外界因素的干扰且完好地避免了人为因素对检测结果的影响，具有较高的检测准确性和分辨率。全自动化的电泳检测使得漏诊率降低，同时契合该病临床特征，在检测过程中对孕妇本身的影响较小，临床应用价值更高[4]。本研究探讨血红蛋白电泳在地中海贫血筛查中的运用与结果。结果表明，200 例筛查患者中共检测出56 例患者地中海贫血患者。α 地中海贫血患者HbA 高于混合地中海贫血和其他血红蛋白病（P＜0.05）；β 地中海贫血患者HbA2 高于α 地中海贫血、混合地中海贫血和其他血红蛋白病（P＜0.05）；混合地中海贫血患者HbF 高于α地中海贫血、β 地中海贫血和其他血红蛋白病（P＜0.05）。结合研究结果进行分析，作为一种临床常见的遗传性溶血性疾病，珠蛋白基因缺陷以及后续的基因表达异常是导致一系列症状的重要原因。通过有效的血红蛋白检测可以早期对患者进行诊断并采取措施进行疾病干预。血红蛋白检测的意义重在预防重型地中海贫血患儿的出现，因而女性孕期的地中海贫血相关筛查项目十分重要，而血红蛋白电泳是其中一项非常有效的检测方法，通过检测患者体内异常的Hb 可以对相应的疾病类型进行鉴别[5-6]。从本研究的相关结果看，不同类型的地中海贫血血液中检测的各种血红蛋白含量存在差异，这可以作为临床分类诊断的重要标准[7-8]。值得注意的是虽然目前许多地区在应用血红蛋白电泳筛查的过程中取得的效果较为显著，但后续临床及相关医疗研究工作需要进一步研究更加高效的检测方法对该疾病的诊断治疗进行突破，长期止步不前可能随着基因的变化而可能对检测结果带来一定的影响[9-10]。今后需要进一步提升血红蛋白电泳仪器设备的性能，提高检测的准确度，缩短检测时间，完善筛查体系，最大限度地缩小疾病对患者生活的影响[11-12]。

表1 不同性别地中海贫血患者筛查结果

表2 不同地中海贫血表型中Hb 含量比较（%， ±s）

表2 不同地中海贫血表型中Hb 含量比较（%， ±s）

疾病类别 HbA HbA2 HbF α 地中海贫血 93.17±2.54 1.49±0.38 1.09±0.22 β 地中海贫血 91.65±4.07 5.12±1.03 3.45±1.25混合地中海贫血 72.36±18.49 1.51±0.89 5.32±1.87其他血红蛋白病 54.18±28.31 2.07±1.48 1.08±0.54 F 值 17.196 39.188 24.233 P 值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

综上所述，血红蛋白电泳在地中海贫血筛查中的应用价值显著，通过全自动化的血红蛋白电泳检查可以有效避免外界因素对检测过程的干扰，提高检测结果的稳定性，可以根据Hb 的含量对地中海贫血的疾病进行分类，并对重型地中海贫血患者的预防具有重要的意义。血红蛋白电泳操作便捷、经济、高效。